神經細胞死亡抑制劑的製作方法

2024-03-01 02:05:15

專利名稱：神經細胞死亡抑制劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種細胞死亡抑制劑，詳細而言，涉及一種具有神經細胞死亡抑制作 用的腦神經保護劑。更詳細而言，本發明是涉及具有神經細胞死亡抑制作用的下列藥劑以 血管性痴呆或變性痴呆(所述變性痴呆以阿爾茨海默病性痴呆為代表)等痴呆性疾病的發 展抑制劑、以血管性痴呆或變性痴呆(所述變性痴呆以阿爾茨海默病性痴呆為代表)等痴 呆性疾病的預防和/或治療劑、腦梗塞的復發預防劑、腦梗塞的預防和/或治療劑。
背景技術：
伴隨著人口動態的高齡化，認知功能降低的狀態即痴呆性疾病患者的增加成為 社會問題。痴呆性疾病被定義為「基於腦血管疾病、阿爾茨海默症或其他原因的腦器質性 (organic)變化，達到使日常生活產生障礙程度的記憶功能及其他認知功能降低的狀態」。雖然根據原因將痴呆(dementia)分為血管性痴呆及變性痴呆兩大類，但任一類 的結果均可見到神經細胞脫落。在不知其有效恢復方法的現狀下，以抑制病態的發展為第 一目標。為人所知的阿爾茨海默病性痴呆是變性痴呆的一種，推斷全世界的患者數目為約 1800萬人，預料今後將進一步增加，故期待開發預防方法及治療方法。就阿爾茨海默病性痴 呆的病理學特徵而言，可列舉腦組織的萎縮、大腦皮質的老人斑出現；已獲知老人斑是3 澱粉樣蛋白(0-amyloid)沉積所致。就阿爾茨海默病性痴呆的治療法而言，已知有依據膽鹼能假說(cholinergic hypothesis)(非專利文獻1)的新藥、依據澱粉樣蛋白連級聯反應假說(amyloid cascade hypothesis)(非專利文獻2)的新藥的開發。其中，所謂膽鹼能假說是依據阿爾茨海默病性痴呆患者的大腦皮質中乙醯膽鹼合 成酶活性特異性地減少的事實，而考慮通過某種方法補充乙醯膽鹼量來治療的方案。就依 據該假說的治療藥而言，創製出具有抑制乙醯膽鹼酯酶(是乙醯膽鹼分解酶)作用的鹽酸 多奈哌齊(donepezilHCl)，其具有一定的效果。但是，基於膽鹼能假說的藥劑，由於是以神 經迴路的補強為目標，所以對於與病態發展同時出現的神經細胞脫落的事實，其有效性有 限。另一方面，所謂澱粉樣蛋白級聯反應假說是依據0澱粉樣蛋白的凝集、沉積帶來 神經原纖維的變化，最終引起神經細胞死亡，而考慮通過防止3澱粉樣蛋白的沉積來治療 的方案。就基於該假說的治療藥而言，雖然期待、分泌酶(Y-secretase)的抑制劑、疫苗 等開發，但有副作用的問題，至今尚未上市(非專利文獻3)。關於其他治療途徑，曾有報告提出在服用高脂血症治療劑的HMG-CoA還原酶抑制 劑(以下有時稱為他汀類藥物)的患者中，阿爾茨海默病性痴呆的發病率低的流行病學數 據(非專利文獻4)；及依據他汀類藥物可使3澱粉樣蛋白的生成降低的發現，而報告了他 汀類藥物有作為阿爾茨海默病性痴呆治療藥的可能性(專利文獻1至8)。也有曾報告他汀 類藥物具有抑制Y分泌酶的活性複合物形成的作用(專利文獻9)。
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上述藥劑對於神經細胞死亡的作用有以下報告。也就是說，已知鹽酸多奈哌齊具 有針對0澱粉樣蛋白或穀氨酸的神經毒性的保護作用(非專利文獻5及6)以及在缺血模 型中的神經細胞保護作用(非專利文獻7)。但是，這些都是體外(in vitro)的結果，而且 由於顯示神經保護作用的濃度也比顯示乙醯膽鹼酯酶抑制作用的濃度的用量高，在給藥的 患者中是否發揮神經保護作用並不明確。此外，在他汀類藥物的情況下，已知在實施短暫性腦缺血的動物模型中抑制腦梗 塞尺寸增大的報告(非專利文獻8)，及通過抑制超氧化物歧化酶(superoxide dismutase) 減少的作用而發揮神經細胞保護作用(非專利文獻9)。也已知將鹽酸多奈哌齊等乙醯膽鹼酯酶抑制劑與他汀類藥物組合而應用於阿爾 茨海默病性痴呆的報告(專利文獻10)。但是在該文獻中不存在具體的數據，也未明確具體 以何種藥物組合最適合。此外，雖然已知乙醯膽鹼酯酶抑制劑的加蘭他敏(Galantamine) 與他汀類藥物並用的臨床效果，不過與單獨治療相比，指出該並用治療的情況增加了副作 用的危險性(專利文獻11)。此外，尚未有鹽酸多奈哌齊對於短暫性腦缺血具有神經保護作 用的報告。如上所述，對於以阿爾茨海默病性痴呆為主的痴呆性疾病而言，尚不存在具有令 人滿意的、有效的神經細胞死亡抑制作用的藥劑提供；此種藥劑仍是人們所期望的。此外， 具有有效的神經細胞死亡抑制作用的藥劑，除對於痴呆性疾病有用之外，不但可作為腦梗 塞復發的預防劑，而且還可作為腦梗塞的預防和/或治療劑。專利文獻1 國際公開第02/062824號公報小冊子專利文獻2 國際公開第01/096311號公報小冊子專利文獻3 國際公開第01/032161號公報小冊子專利文獻4 國際公開第00/028981號公報小冊子專利文獻5 國際公開第99/048488號公報小冊子專利文獻6 美國專利第6472421號專利文獻7 美國專利第6440387號專利文獻8 美國專利第6080778號專利文獻9 國際公開第2005/063294號公報小冊子專利文獻10 國際公開第2005/099823號公報小冊子專利文獻11 國際公開第03/082298號公報小冊子非專利文獻1 :Science,219 :1184_1190，1983非專利文獻2 :Science,256 184-185，1992非專利文獻3 :Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98 :9312_9317，2001非專利文獻4 :Arch. Neurol.，57 1439-1443，2000非專利文獻5 :Neuroreport,9 1519-1522，1998非專利文獻6 :J. Pharmacol. Exp. Ther.，306 -.112-111, 2003非專利文獻7 :Eur. J. Pharmacol.，472 :57_63，2003非專利文獻8:Brain Research，1037 :52_58，2005非專利文獻 9 :Therapeutic Research, 26 1277-1286, 200
發明內容
本發明的目的在於提供對神經細胞死亡顯示出優異的抑制作用的藥劑。鑑於這些實際情況，本發明人進行了深入研究，結果驚人地發現在並用匹伐他汀 鈣等匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽的情況下，可以得到該組合對神經細胞死亡具有 特異且顯著的抑制作用，從而完成本發明。至目前為止，有關將匹伐他汀類與多奈哌齊或多 奈哌齊鹽組合的實例中，並沒有報告神經細胞死亡抑制作用發揮至何種程度的實例。也就是說，本發明提供(1) 一種神經細胞死亡抑制劑，該神經細胞死亡抑制劑由匹伐他汀類與多奈哌齊 或多奈哌齊鹽組合而成；(2)上述(1)記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述匹伐他汀類為匹伐他汀鈣；(3)上述⑴或⑵記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述多奈哌齊鹽為鹽酸多 奈哌齊；(4)上述(1)至(3)的任一項記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述的神經細胞 死亡抑制劑將含有所述匹伐他汀類的製劑與含有所述多奈哌齊或多奈哌齊鹽的製劑組合 後進行給藥；(5)上述(1)至(4)的任一項記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述神經細胞死 亡抑制劑為腦神經保護劑；(6)上述(1)至(4)的任一項記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述神經細胞死 亡抑制劑為痴呆性疾病的預防和/或治療劑；(7)上述(6)記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述痴呆性疾病的預防和/或治 療劑為痴呆性疾病的發展抑制劑；(8)上述(6)或(7)記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述痴呆性疾病為血管性 痴呆或變性痴呆；(9)上述(8)記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述變性痴呆為阿爾茨海默病性 痴呆；(10)上述(1)至(4)的任一項記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述神經細胞死 亡抑制劑為腦梗塞的預防和/或治療劑；(11)上述(10)記載的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述腦梗塞的預防和/或治療 劑為腦梗塞的復發預防劑；(12) 一種醫藥組合物，該醫藥組合物含有匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽， 以及製藥上可接受的載體；(13)上述(12)記載的醫藥組合物，其中，所述匹伐他汀類為匹伐他汀鈣；(14)上述(12)或(13)記載的醫藥組合物，其中，所述多奈哌齊鹽為鹽酸多奈哌 齊；(15)上述(12)至(14)的任一項記載的醫藥組合物，其中，該醫藥組合物將含有匹 伐他汀類的製劑與含有多奈哌齊或多奈哌齊鹽的製劑組合後進行給藥；(16)上述(12)至(15)的任一項記載的醫藥組合物，其中，該醫藥組合物用於抑制 神經細胞死亡；(17)上述(12)至(16)的任一項記載的醫藥組合物，其中，該醫藥組合物用於保護腦神經；(18)上述(12)至(17)的任一項記載的醫藥組合物，其中，該醫藥組合物用於痴呆 性疾病的預防和/或治療；(19)上述(18)記載的醫藥組合物，其中，所述痴呆性疾病的預防和/或治療是指 抑制痴呆性疾病的發展；(20)上述(18)或(19)記載的醫藥組合物，其中，所述痴呆性疾病為血管性痴呆或 變性痴呆；(21)上述(20)記載的醫藥組合物，其中，所述變性痴呆為阿爾茨海默病性痴呆；(22)上述(12)至(15)的任一項記載的醫藥組合物，其中，該醫藥組合物用於腦梗 塞的預防和/或治療；(23)上述(22)記載的醫藥組合物，其中，所述腦梗塞的預防和/或治療用於預防 腦梗塞復發；(24) 一種抑制患者的神經細胞死亡的方法，該方法包含將含有匹伐他汀類與多奈 哌齊或多奈哌齊鹽以及製藥上可接受的載體的醫藥組合物以足以抑制神經細胞死亡的有 效量給予患者；(25) 一種保護患者的腦神經的方法，該方法包含將含有匹伐他汀類與多奈哌齊 或多奈哌齊鹽以及製藥上可接受的載體的醫藥組合物以足以保護腦神經的有效量給予患 者；(26)上述(24)或(25)記載的方法，其中，所述匹伐他汀類為匹伐他汀鈣；(27)上述(24)至(26)的任一項記載的方法，其中，所述多奈哌齊鹽為鹽酸多奈哌 齊；(28)上述(24)至(27)的任一項記載的方法，其中，將含有匹伐他汀類的製劑與含 有多奈哌齊或多奈哌齊鹽的製劑組合後進行給藥；(29)上述(24)至(28)的任一項記載的方法，其中，所述抑制神經細胞死亡或保護 腦神經用於痴呆性疾病的預防和/或治療；(30)上述(29)記載的方法，其中，所述痴呆性疾病的預防和/或治療是指抑制痴 呆性疾病的發展；(31)上述(29)或(31)記載的方法，其中，所述痴呆性疾病為血管性痴呆或變性痴 呆；(32)上述(31)記載的方法，其中，所述變性痴呆為阿爾茨海默病性痴呆；(33) 一種預防和/或治療患者的腦梗塞的方法，該方法包含將含有匹伐他汀類與 多奈哌齊或多奈哌齊鹽以及製藥上可接受的載體的醫藥組合物以足以預防和/或治療腦 梗塞的有效量給予患者；(34)上述(33)記載的方法，其中，所述腦梗塞的預防和/或治療為預防腦梗塞的 復發；(35) 一種匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽的組合的用途，其用於製造神經細 胞死亡抑制劑；(36) 一種匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽的組合的用途，其用於製造腦神經 保護劑；
(37)上述(35)或(36)記載的用途，其中，所述匹伐他汀類為匹伐他汀鈣；(38)上述(35)至(37)的任一項記載的用途，其中，所述多奈哌齊鹽為鹽酸多奈哌 齊；(39)上述(35)至(38)的任一項記載的用途，其中，該匹伐他汀類與多奈哌齊或多 奈哌齊鹽的組合的用途，是將含有匹伐他汀類的製劑與含有多奈哌齊或多奈哌齊鹽的製劑 組合後進行使用；(40)上述(35)至(39)的任一項記載的用途，其中，所述神經細胞死亡抑制劑或腦 神經保護劑是用於痴呆性疾病的預防和/或治療；(41)上述(40)記載的用途，其中，所述痴呆性疾病的預防和/或治療是指抑制痴 呆性疾病的發展；(42)上述(40)或(41)記載的用途，其中，所述痴呆性疾病為血管性痴呆或變性痴 呆；(43)上述(42)記載的用途，其中，所述變性痴呆為阿爾茨海默病性痴呆；(44) 一種匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽的組合的用途，其用於製造腦梗塞 的預防劑和/或治療劑；(45)上述(44)記載的用途，其中，所述腦梗塞的預防劑和/或治療劑是用於預防 腦梗塞的復發。根據本發明，可以提供對神經細胞死亡顯示出優異抑制作用的神經細胞死亡抑制 劑，此外，可以提供腦神經保護劑、痴呆性疾病的發展抑制劑、痴呆性疾病的預防和/或治 療劑、腦梗塞的復發預防劑、腦梗塞的預防和/或治療劑。


圖1是顯示匹伐他汀與安理申(Aricept)(鹽酸多奈哌齊)單獨或並用給藥時對 神經細胞死亡的作用效果圖。圖2是顯示辛伐他汀(sinvastatin)與安理申(鹽酸多奈哌齊)單獨或並用給藥 時對神經細胞死亡的效果圖。
具體實施例方式本發明所使用的匹伐他汀類包含匹伐他汀或匹伐他汀鹽、或者這些物質的內酯 體，也包含與這些物質的水合物等醫藥品所允許的溶劑形成的溶劑合物。匹伐他汀類具有 基於HMG-CoA還原酶抑制作用的膽固醇合成抑制活性，已知可作為高脂血症治療藥。作為 匹伐他汀的鹽，可列舉鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽；鈣鹽、鎂鹽等鹼土類金屬鹽；苯乙基胺鹽等 有機胺鹽或銨鹽等。其中，匹伐他汀類優選匹伐他汀鹽，特別優選鈣鹽、鈉鹽。可根據美國專利第5856336號、日本特開平1-279866號公報所記載的方法製造匹 伐他汀類。本發明所使用的多奈哌齊或多奈哌齊鹽，已知是基於乙醯膽鹼酯酶抑制作用可作 為阿爾茨海默病性痴呆的治療劑。關於鹽酸多奈哌齊，可根據公知的方法，例如日本特開平 1-79151號公報、日本特開平07-252216號公報、日本特開平11-263774號公報或日本特開 平11-171861號公報等所公開的方法容易地進行製造。此外，鹽酸多奈哌齊可由市售品(商品名「安理申」)容易地獲得。作為多奈哌齊鹽，只要是醫藥上可接受的鹽即無特殊限制，可 例舉如鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽等無機酸鹽；乙酸鹽、三氟乙酸鹽、富馬 酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸 鹽等有機酸鹽等；其中，優選鹽酸鹽。
本發明將匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽進行組合後給藥，如下述實施例所 示，對大鼠椎骨-總頸動脈結紮(4點缺血)再開通的模型，與分別單獨給予匹伐他汀類、 或者多奈哌齊或多奈哌齊鹽的情況相比較，在並用這兩種藥劑的情況下，海馬CAl區域的 神經細胞死亡得到顯著地抑制，顯示出顯著的神經細胞死亡抑制作用。因此，本發明的藥 劑可用作神經細胞死亡抑制劑。本發明的神經細胞死亡抑制劑還可作為腦神經保護劑、 痴呆性疾病的發展抑制劑、痴呆性疾病的預防和/或治療劑、腦梗塞的復發預防劑、腦梗 塞的預防和/或治療劑。就痴呆性疾病而言，可列舉多發梗塞性痴呆大範圍缺血型(包 含Binswanger (賓斯旺格)型白質腦病)、多發腦梗塞性、局限性腦梗塞性、遺傳性血管性 痴呆(CADASIL等)等血管性痴呆；阿爾茨海默病性痴呆(阿爾茨海默病(Alzheimer』 s disease ；簡稱AD)或阿爾茨海默病型老年痴呆(seniledementia Alzheimer，s type ；簡 稱SDAT))、額顳葉變性症(額顳葉痴呆(frontotemporal dementia ；簡稱FTD)、匹克氏病 (Pick，s disease)等)、路易體痴呆(瀰漫性路易體病(Diffuse Lewy body disease ； 簡稱DLBD)等)、帕金森氏病(伴有痴呆的帕金森氏病(Parkinson』 s disesase (PD) with dementia))、神經原纖維變化型老年痴呆、嗜銀顆粒性痴呆、亨丁頓舞蹈症(Huntington』 s disesase)、進 亍個生核上個生麻搏(progressivesupranuclear palsy)、皮質基底核變個生症等 變性痴呆；此外，還可列舉克雅氏病(Creutzfeldt-Jacob Disease)、人類免疫缺陷病毒 (HIV)相關性痴呆。在這些痴呆性疾病中，本發明的藥劑尤其可作為阿爾茨海默病性痴呆的 發展抑制劑、阿爾茨海默病性痴呆的預防和/或治療劑。本發明所用的藥劑或醫藥組合物的給藥方式，並無特殊限制，可依治療目的而進 行適當地選擇，可列舉如通過片劑、膠囊劑、顆粒劑、薄膜包衣劑、散劑、糖漿劑等口服給藥， 或者通過注射劑、栓劑、吸入劑、經皮吸收劑、滴眼劑、滴鼻劑等非口服給藥。不過，通常情況 下，優選口服給藥。在配製口服固體製劑的情況下，可加入賦形劑，且視需要加入粘合劑、崩散劑、潤 滑劑、著色劑、矯味劑、矯臭劑等後，通過常用方法製造片劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑等。作為 添加劑可使用該領域一般使用的物質，可例舉如作為賦形劑的乳糖、氯化鈉、葡萄糖、澱 粉、微晶纖維素、矽酸等；作為粘合劑的水、乙醇、丙醇、單糖漿、明膠液、羥丙基纖維素、甲基 纖維素、乙基纖維素、紫膠、磷酸鈣、聚乙烯吡咯烷酮等；作為崩散劑的瓊脂末、碳酸氫鈉、 十二烷基硫酸鈉、硬脂酸單甘油酯(7$7彡 >酸* ) V 'J -t V F )等；作為潤滑劑的精 制滑石、硬脂酸鹽、硼砂、聚乙二醇等；作為著色劑的胡蘿蔔素、黃色三氧化二鐵、焦糖 (caramel)等；作為矯味劑的蔗糖、橙皮等。在配製口服固體製劑的情況下，可加入矯味劑、緩衝劑、穩定劑、防腐劑等，並通過 常用方法製造內服液劑、糖漿劑、酏劑等。作為添加劑，可使用該領域一般使用的物質，可例 舉例如作為矯味劑的蔗糖等、作為緩衝劑的檸檬酸鈉等、作為穩定劑的黃蓍膠等、作為防腐 劑的對羥基苯甲酸酯等。在配製注射劑的情況下，可添加pH調節劑、穩定劑、等張劑，並通過常用方法製造皮下注射劑、肌肉注射劑及靜脈內注射劑。作為添加劑，可使用該領域一般使用的物質，可例舉例如作為PH調節劑的磷酸鈉等、作為穩定劑的焦亞硫酸鈉等、作為等張劑的氯化鈉等。本發明的藥劑或醫藥組合物的使用形式，雖然可以作為如下形式使用將匹伐他 汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽組合使用，作為經過兩種藥劑的給藥而協同增效的神經細胞 死亡抑制劑，以得到腦神經保護、阿爾茨海默症型痴呆的發展抑制、阿爾茨海默症型痴呆的 預防和/或治療、腦梗塞的復發預防、腦梗塞的預防和/或治療效果，但並不限於這些使用 形式。可將匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽同時給予，也可相隔一段時間分別給予。也 就是說，對於匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽，可將該兩種藥劑製成單一製劑使用，或 將該兩種藥劑分別製成製劑而以組合產品(試劑盒)的形式使用。在本發明中，將該兩種藥劑製成單一製劑而給藥的情況下，匹伐他汀類與多奈哌 齊或多奈哌齊鹽的配製比以質量比計，在1 0.005至1 500的範圍；此外，從得到特別 優異的協同增效效果的觀點出發，優選1 0. 1至1 10的範圍。此外，在本發明中，將該兩種製劑分別製成製劑的情況下，含有匹伐他汀類的製劑 可以通過與多奈哌齊或多奈哌齊鹽並用給藥作為神經細胞死亡抑制劑的形式提供，且可作 為與多奈哌齊或多奈哌齊鹽並用給藥的腦神經保護劑、痴呆性疾病的發展抑制劑、痴呆性 疾病的預防和/或治療劑、腦梗塞的復發預防劑、腦梗塞的預防和/或治療劑來使用。另一 方面，含有多奈哌齊或多奈哌齊鹽的製劑可以通過與匹伐他汀類並用給藥作為神經細胞死 亡抑制劑的形式提供，且可作為與匹伐他汀類並用給藥的腦神經保護劑、痴呆性疾病的發 展抑制劑、痴呆性疾病的預防和/或治療劑、腦梗塞的復發預防劑、腦梗塞的預防和/或治 療劑來使用。該兩種藥劑的劑型可以相同，也可以不同。此外，各成分的給藥次數可以不同。在本發明中，匹伐他汀類的給藥量，雖可依患者的體重、年齡、性別、症狀等進行適 當地選擇，但在成人的情況下，通常每日可給藥0. 01至50mg，優選0. 1至20mg，更優選1至 10mg。此外，多奈哌齊或多奈哌齊鹽的給藥量，雖可依症狀增減，但在成人的情況下，通常每 日可給藥0.01至lOOmg，優選0. 1至50mg，更優選1至10mg。此外，給藥可為每日1次或分 為2次以上給藥。在本說明書中，併入了作為本申請基礎申請的日本專利申請2007-259682號說明 書中所記載的全部事項。此外，在本申請的日文說明書中，依據目前的表述方法，將該基礎 申請說明書中的「痴呆」修改為「認知症」。以下，雖然列舉了實施例來進一步說明本發明，但本發明不限於這些實施例。實施例1對於大鼠椎骨_總頸動脈結紮(4點缺血)再開通模型的海馬CAl區域的神經細 胞死亡，依據以下的試驗方法評價並用給藥匹伐他汀鈣(以下，以「匹伐他汀」來表述)與 鹽酸多奈哌齊(以下，使用商品名「安理申」來表述)時的效果。1.供試動物及飼育環境取得7周齡的Crlj :WI系雄性大鼠(日本Charles River株式會社)，經檢疫(5 日)及馴化(7日以上)後供應實驗。在整個實驗期間，在維持明暗周期(室內光照明期 間早上6點至下午6點)、溫度23士3°C、溼度55士 15%的飼育室中進行飼育，並讓大鼠自 由攝取固體飼料(CRF-1 ；日本東方酵母工業株式會社(Oriental Yeast Co.，Ltd.))及飲用水(自來水)。2.溶液配製將匹伐他汀與安理申在使用時分別懸浮於羧甲基纖維素鈉(以下稱為CMC-Na，SIGMA)的0. 5w/v%水溶液中，且按照使給藥量成為5mL/kg的方式進行配製。3.試驗方法按照平均體重基本均勻的方式，將大鼠分成5組(每組6隻)(1)正常組(未處 理組)；(2)溶劑對照組；(3)匹伐他汀(3mg/kg)單獨給藥組；(4)安理申(0. 5mg/kg)單獨 給藥組；(5)匹伐他汀(3mg/kg)和安理申(0.5mg/kg)並用給藥組。將分組之日定為給藥的第1日，被檢藥物每日給藥1次，共計6日，合計口服給藥 6次。此外，對於正常組及溶劑對照組，給予CMC-Na的0. 5 八％水溶液。在給藥的第5日，對於正常組之外的大鼠，經由腹腔內給予35mg/kg的戊巴比妥鈉 (Nenbutal (登錄商標)注射液，大日本製藥株式會社)，在麻醉下露出位於第一頸椎部的左 右翼孔(alar foramen)，用烙鐵將椎骨動脈熱凝固且永久結紮兩側椎骨動脈。接下來，露 出、剝離兩側總頸動脈，將矽管環狀放置並縫合。在給藥的第6日，將正常組之外的大鼠在乙醚麻醉下，通過放置的矽管露出兩側 總頸動脈，以杉田式血管夾(瑞穗醫科工業株式會社)進行10分鐘的短暫性結紮後，縫合 皮膚。在兩側總頸動脈結紮再開通後的第5日(正常組是最終給藥的第5日)，對於 通過常用方法麻醉後的大鼠，以4%的多聚甲醛(pH 7. 4)、繼而用波恩氏溶液(Bouin』 s solution) (pH 3. 5至4.0)進行灌注固定處理，並摘出腦。將固定過的腦進行脫水、透明、包 埋於石蠟後，以前囟(bregma)-3. 3mm附近製作厚10 μ m的切片。接下來，將切片進行尼氏 (Nissle)染色，在光學顯微鏡下拍攝右側海馬CAl區域，用影像分析裝置(Win ROOF V5. 6， 三谷商事)計算神經細胞數目，然後測量CAl的長度。4.數據處理及統計分析依照下式，求出每單位長度的神經細胞數目，且計算出每組的平均值及標準偏差。海馬CAl神經細胞數目(個數/mm) =CAl的神經細胞數目(個數)/單位長度 (所測定場所的長度mm)。對於顯著性差異(significant difference)檢驗，在(1)組與(2)組之間進行 Student t檢驗；在(2)組與(3)、(4)及(5)組之間進行Durmett多重比較檢驗。關於顯 著性標準(significance level)，將任一檢驗的出錯率(P)小於5%當作具有顯著性，其分 為小於5% (ρ < 0. 05)及小於(ρ < 0. 01)進行表述。結果如圖1所示。圖1的縱軸表示神經細胞數目(個數/mm)。圖1中「 ## 」記號 為ρ < 0. 01，表示具有顯著性差異；「*」記號為ρ < 0. 05，表示具有顯著性差異。如圖1所 示，在溶劑對照組中，與正常組相比較，可確認海馬CAl區域的神經細胞數目有顯著減少。與溶劑對照組相比較，在3mg/kg匹伐他汀的單獨給藥組、0. 5mg/kg安理申的單獨 給藥組中，雖然顯示神經細胞數目有增加的傾向，但不具有顯著性。就3mg/kg匹伐他汀的 單獨給藥組而言，雖也曾報告具有顯著差異(參照非專利文獻9)，但在如本發明上述實驗 方法這樣嚴格的方法中，無法確認有顯著差異。相對於此，在3mg/kg匹伐他汀與0. 5mg/kg安理申的並用給藥組中，與溶劑對照組相比較，可觀察到海馬CAl區域的神經細胞數目顯著增加，可以確認本發明的兩種藥劑的 並用產生了明顯的作用效果。比較例1為了確認匹伐他汀以外的他汀類藥物的作用，使用辛伐他汀進行同樣的試驗。也 就是說，除了使用辛伐他汀(15mg/kg)代替實施例1中的匹伐他汀以外，供試動物及飼育環 境、溶液配製、試驗方法、數據處理及統計分析均在完全相同的條件下進行。因此，組的構成 為以下5組(1)正常組(未處理組)；(2)溶劑對照組；(3)辛伐他汀(15mg/kg)單獨給藥 組；(4)安理申(0. 5mg/kg)單獨給藥組；(5)辛伐他汀(15mg/kg)和安理申(0. 5mg/kg)並 用給藥組(各組6至9例)。此外，辛伐他汀是從(中國)浙江康裕製藥有限公司(Zhejiang KangyuPharmaceutical Co.，LTD.)購入，供實驗使用。結果如圖2所示。圖2的縱軸表示神經細胞數目(個數/mm)。圖2中的「**」記 號為P <0.01，表示具有顯著性差異。如圖2所示，在溶劑對照組中，與正常組相比較，可觀 察到海馬CAl區域的神經細胞數目顯著減少。與溶劑對照組相比較，在15mg/kg辛伐他汀的單獨給藥組、0. 5mg/kg安理申的單 獨給藥組中，雖然顯示出神經細胞數目有增加的傾向，但無顯著性。此外，與溶劑對照組相 比較，在15mg/kg辛伐他汀與0. 5mg/kg安理申的並用給藥組中，雖然可見到海馬CAl區域 的神經細胞數目有增加的傾向，但與分別單獨給藥的情況相比較，其增加的程度小，無法確 認兩種藥劑並用所產生的作用效果。工業實用性本發明提供了神經細胞死亡抑制劑，即使在所謂大鼠椎骨_總頸動脈結紮(4點缺 血)再開通模型的極嚴苛條件下，該神經細胞死亡抑制劑仍對神經細胞死亡顯示出優異的 抑制作用，可提供作為腦神經保護劑、痴呆性疾病的發展抑制劑、痴呆性疾病的預防和/或 治療劑、腦梗塞的復發預防劑、腦梗塞的預防和/或治療劑的藥劑，在醫藥品產業方面具有 工業實用性。
權利要求
一種神經細胞死亡抑制劑，所述的神經細胞死亡抑制劑由匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽組合而成。
2.如權利要求1所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述匹伐他汀類為匹伐他汀鈣。
3.如權利要求1或2所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述多奈哌齊鹽為鹽酸多奈哌齊。
4.如權利要求1至3中任一項所述的神經細胞死亡抑制劑，所述的神經細胞死亡抑制 劑將含有所述匹伐他汀類的製劑與含有所述多奈哌齊或多奈哌齊鹽的製劑組合後進行給藥。
5.如權利要求1至4中任一項所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述神經細胞死亡抑 製劑為腦神經保護劑。
6.如權利要求1至4中任一項所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述神經細胞死亡抑 製劑為痴呆性疾病的預防和/或治療劑。
7.如權利要求6所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述痴呆性疾病的預防和/或治療 劑為痴呆性疾病的發展抑制劑。
8.如權利要求6或7所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述痴呆性疾病為血管性痴呆 或變性痴呆。
9.如權利要求8所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述變性痴呆為阿爾茨海默病性痴呆。
10.如權利要求1至4中任一項所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述神經細胞死亡 抑制劑為腦梗塞的預防和/或治療劑。
11.如權利要求10所述的神經細胞死亡抑制劑，其中，所述腦梗塞的預防和/或治療劑 為腦梗塞的復發預防劑。
全文摘要
本發明提供一種對神經細胞死亡顯示出優異的抑制作用的藥劑。本發明涉及一種由匹伐他汀類與多奈哌齊或多奈哌齊鹽組合而成的神經細胞死亡抑制劑。
文檔編號A61P43/00GK101815517SQ20088010993
公開日2010年8月25日 申請日期2008年10月2日 優先權日2007年10月3日
發明者佐藤文泰, 吉中康展, 青木太郎 申請人:興和株式會社