治療眼病的喹諾酮衍生物的製作方法

2024-01-26 12:54:15 1

專利名稱：治療眼病的喹諾酮衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及治療眼科疾病的藥物，其含有喹諾酮衍生物或其鹽作為活性成分。更詳細地說，本發明涉及治療眼科疾病，特別是通常稱為「乾眼」的乾眼病綜合症的藥物，其含有作為活性成分的通式(I)所示的喹諾酮衍生物或其鹽
其中R為滷原子，下式側鏈的取代位置
為喹諾酮骨架的3-或4-位，喹諾酮骨架上3-和4-位間的碳-碳鍵為單鍵或雙鍵，更優選2-(4-氯苯甲醯基氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸或其鹽。
通式(I)所示喹諾酮衍生物及其生產方法記載於日本專利公開號63-35623中，喹諾酮衍生物作為抗胃潰瘍藥的用途記載於日本專利申請公開(Laid Upen)號3-74329中，生產具有光學活性的喹諾酮衍生物的方法記載於日本專利申請公開(laid open)號3-145468中。
另外，本發明喹諾酮衍生物對活性氧代謝產物的抑制作用記載於日本J.pharmacol.，49卷，441-448(1969)，本發明喹諾酮衍生物對胃黏膜保護張力記載於Folia pharmacol.Japon.，97卷，371-380頁(1991)。
而且，喹諾酮衍生物作為治療糖尿病藥的用途記載於國際公開號WO92/21342中，喹諾酮衍生物作為保護疾病腸黏膜的藥物的用途記載於國際公開號WO94/12182中，喹諾酮衍生物作為抑制抑生長素分泌減少的藥物的用途記載於國際公開號WO93/24043中。
「乾眼」症(乾眼病)為眼的病原性疾病，其中由於淚液量短乏眼表面不能保持正常狀態。而且，淚液異常缺乏及淚液性質異常可引起眼表面上的黏膜(角膜和結膜上皮)(參考DORAI-AI(乾眼)，11頁，Kazuo TSUBOTA，NIPPON-HYORONSHA出版)。除上述外，在伴有異常淚液狀態(性質和量)的Sjogren綜合症中可觀察到乾眼症。再者，已知乾眼症可存在於Stevens.Johnson綜合症後期並可觀察到角膜和結膜損傷。
淚液(淚)為具有7μm厚的很薄液層，它覆蓋眼前最外層，並含有脂質層、水層和粘液樣層組成的三層結構。存在於淚液最外表層的脂質層為油狀膜，它主要是由位於眼瞼周圍的瞼板腺產生和分泌的，並覆蓋全部水層。脂質層被認為具有防止水分從水層中蒸發的功能。水層為所謂的「淚」部分，它佔據淚液層大部分厚度，它組成的98％為水。降低該水層量的病理狀態即所謂的「乾眼」症。粘液樣層覆蓋角膜上皮的疏水表面，該粘液樣層改變角膜上皮的疏水表面至親水性以保持和擴展淚液中的水層，以便水層能保持在角膜上皮表面。產生該粘液樣層的有關細胞為含在結膜中的杯狀細胞。
如上所釋，可直接引起「乾眼」症的淚液涉及不同組織細胞。而且「乾眼」症的概念是複雜的，普通類型的滴眼劑僅為暫時的醫療措施，因此在目前階段還未發現治療「乾眼」症的基本方法。所以迫切期望治療「乾眼」症的新方法和新試劑。


圖1為本發明喹諾酮衍生物對由Alcian藍結合方法測定的覆蓋正常兔結膜的黏膜樣物質量的效果圖。
圖2為本發明喹諾酮衍生物對正常兔杯狀細胞數的效果圖。
圖3為本發明喹諾酮衍生物對正常兔分泌淚液量的效果圖。
圖4為本發明喹諾酮衍生物對正常兔角膜上皮細胞增生的效果圖。
圖5為本發明喹諾酮衍生物對由Rose Bengal打分方法測定的正常兔粘液樣囊炎的效果圖。
圖6為本發明喹諾酮衍生物對由避免眨眼引起的正常兔角膜上皮損傷的效果圖。
圖7為本發明喹諾酮衍生物對由Alcian藍結合方法測定的覆蓋除去黏膜樣層正常兔結膜的粘液樣物質增量的效果圖。
本發明人廣泛研究後發現通式(I)所示喹諾酮衍生物，尤其是其中的2-(4-氯代苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸及其鹽具有提高杯狀細胞數作用，增加眼瞼粘液分泌作用，促進角膜上皮增生作用以及增加淚液分泌作用，因此所述喹諾酮衍生物用作治療乾眼病綜合症的藥物，最後完成本發明。
通式(I)所示喹諾酮衍生物，尤其是其中2-(4-氯代苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸及其鹽通過增加杯狀細胞數增加眼粘蛋白的產生，因此在「乾眼」綜合症時該化合物防止粘蛋白量降低，同時本發明的該化合物增加眼粘液量以維持淚液中的水層。另外，該化合物顯示出增加淚液量的效果，因此該化合物用作治療「乾眼」綜合症的藥物。另外，該化合物不僅用作治療顯示乾眼症的Sjo-gren綜合症和Stevens-Johnson綜合症的藥物，而且用作預防和/或治療由「乾眼」症引起的繼發病或由杯狀細胞數降低及粘液量降低的引起的各種眼病。「乾眼」症時，因為眼球表面乾燥，所以眼對受損非常敏感。關於此點，因本發明化合物有促進角膜上皮細胞增生效能，所以該化合物用作含在治療眼表面外傷的藥劑，尤其是治療角膜上皮外傷的藥劑或眼內輸注藥劑和在眼科手術(白內障、玻璃體及青光眼手術)中用於清洗的藥劑中的活性成分。
通過配製作為有效成分的通式(I)所示喹諾酮衍生物或其鹽可將本發明治療眼病的藥物製成不同形式的常用藥物製劑。通過配製喹諾酮衍生物(I)和常用稀釋劑或賦形劑，例如填充劑，增容劑，粘合劑，潤溼劑，崩解劑，表面活性劑，潤滑劑等製備這些藥物製劑形式。
根據治療目的，可將藥物製劑製成不同形式，典型實例形式為可眼用藥物製劑如滴眼劑和眼膏等。
除了滴眼劑和眼膏外，藥物製劑可製成片劑、丸劑、粉末劑、液體藥劑、混懸劑、乳濁劑、顆粒劑、膠囊、栓劑、注射劑(液體、混懸液等)、氣霧劑、糖漿劑、外用製劑等。另外，通過與合適的樹脂一起配製也可製成持續釋放的製劑。
在將藥物製劑配成滴眼劑，眼膏等時，用可眼科藥用的常用載體(稀釋劑)按常規方法製備。因此，通過將有效成分與適當稀釋劑混合，然後將混合物滅菌來製備他們。
例如，製備眼膏時，可使用在該領域廣泛應用的各種基料如乳劑型軟膏基質，水溶型軟膏基質，懸浮型軟膏基質等。至於這些基料的典型實例，可舉出白凡士林、精煉羊毛脂、液體石蠟等。製備滴眼劑時，可用滅菌蒸餾水作為典型的稀釋劑。
如果必要，用於眼科的藥物製劑可與溶解添加劑、緩衝劑、抗氧劑、防腐劑、等滲劑、pH控制劑等一起配製。至於溶解添加劑，可舉例的有羧甲基纖維素鈉；聚氧乙二醇醚如聚氧乙烯十二烷基醚，聚氧乙烯油醚等；聚乙二醇高級脂肪酸酯如聚乙二醇單月桂酸酯，聚乙二醇單油酸酯等；聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯；聚氧乙烯脂肪酸酯等。至於緩衝劑，可舉例的有磷酸鈉、磷酸氫鈉，磷酸氫鉀，硝酸，硝酸鈉，檸檬酸，檸檬酸鈉，酒石酸，酒石酸鈉，乙酸，乙酸鈉，ε-氨基己酸，谷酸酸鈉等。至於抗氧劑，可舉例的有亞硫酸鈉，焦亞硫酸鈉，連二亞硫酸鈉，硫代亞硫酸鈉，抗壞血酸等。至於防腐劑，可舉例的有氯丁醇，氯苄烴銨，氯苄乙銨(benzethonium Chloride)，苯基汞鹽，乙基汞硫代水楊酸鈉，苯乙醇，對羥基苯甲酸甲酯，對羥基苯甲酸丙酯等。至於等滲劑，可舉例的有氯化鈉，葡萄糖，D-甘露糖醇，甘油等。至於溶解劑，可用N-甲基穀氨醯胺。至於pH控制劑，可舉例的有氫氧化鈉，鹽酸等。
為了製成片劑，可使用廣泛用於該領域的任何已知載體，例如，賦形劑如乳糖，白糖，氯化鈉，葡萄糖，尿素，澱粉，碳酸鈣，高嶺土，結晶纖維素，矽酸等；粘合劑如水，乙醇，丙醇，單糖漿，葡萄糖溶液，澱粉溶液，明膠溶液，羧甲基纖維素，蟲膠，甲基纖維素，磷酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮等。崩解劑如幹澱粉，藻酸鈉，瓊脂粉，海帶多糖粉，碳酸氫鈉，碳酸鈣，聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯，十二烷基硫酸鈉，硬脂酸單甘油酯，澱粉，乳糖等；崩解抑制劑如白糖，硬脂精，可可脂，氫化油等；吸附促進劑如季銨基質，十二烷基硫酸鈉等；溼潤劑如甘油，澱粉等；吸附劑如澱粉，乳糖，高嶺土，膨潤土，膠體矽酸等；潤滑劑如細滑石粉，硬脂酸鹽，硼酸粉，聚乙二醇等。如果必要，可將片劑製備成常用的包衣片劑形式，例如糖衣片劑，明膠膜包衣片劑，腸膜包衣片劑，膜包衣片劑，或雙層片劑，多層片劑等形式。
為了製成丸劑，可使用廣泛用於該領域的任何已知載體，例如，賦形劑如葡萄糖，乳糖，澱粉，可可脂，氫化植物油，高嶺土，滑石等；粘合劑如阿拉伯膠粉，黃蓍膠粉，明膠，乙醇等；和崩解劑如海帶多糖，瓊脂等。
為了製成栓劑，可用廣泛用於該領域的任何已知載體，例如聚乙二醇，可可脂，高級醇，高級醇酯，明膠，半合成甘油酯等。
為了製成注射劑，可把它們製成溶液，乳濁劑或混懸劑。一般將其滅菌並優選製成與血液等滲。在製備溶液、乳濁劑或混懸劑形式的注射劑時，可使用廣泛用於該領域的任何已知稀釋劑，例如，水，乙醇，丙二醇，乙氧基化異硬脂醇，聚氧基化異硬脂醇，聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯等。在製備與血等滲的注射劑時，可在其中含足量氯化鈉，葡萄糖或甘油。另外，常用的可溶輔劑、緩衝液、止痛藥等可含在其中。如果必要，調色劑，防腐劑，香料，調味劑，甜味劑及其它藥物可含在其中。
外用製劑製成普通外用藥物製劑。普通的外用藥物製劑例如包括液體藥物，藥油，洗劑，擦劑，油脂性軟膏，乳濁劑型軟膏，如油/水型親水軟膏和水/油型吸水軟膏，水溶性軟膏，糊劑，硬膏劑，貼劑，軟膏，乳劑等，這些外用形式藥物製劑不限於所舉例範圍內。可用普通方法製備這些外用藥物製劑中任一個。
在製備這些外用製劑時，也可使用廣泛用於該領域的各種基料。例如，可單獨使用至少一種油脂性基質，或可更寬地使用其兩種或多種的混合物；或可單獨使用至少一種水溶性軟膏基質，或可更寬地使用其兩種或多種的混合物。這些軟膏的確實例子為脂肪和油如花生油，芝麻油，豆油，紅花油，鱷梨油，向日葵油，玉米油，菜子油，棉子油，蓖麻油，山茶油，椰子油，橄欖油，罌粟子油，可可酯，牛油，獵脂，羊毛脂等；通過將這些脂肪和油進行化學改變如氫化而得到的修飾基質；無機油如凡士林，石蠟，矽油，角鯊烷等；高級脂肪酸酯如肉豆蔻酸異丙酸酯，肉豆蔻酸正丁酯，亞油酸異丙酯，蓖麻醇酸乙酯，蓖麻醇酸硬酯基酯，蓖麻醇酸丙酯，蓖麻醇酸異丙酯，蓖麻醇酸異丁酯，蓖麻醇酸庚酯，癸二酸二乙酯和己二酸二異丙酯；高級脂肪醇如十六烷醇和十八烷醇；蠟如漂白蜂蠟，鯨蠟，日本蠟，羊毛脂，巴西棕櫚蠟，蟲膠蠟等；高級脂肪酸如硬脂酸，油酸，軟酯酸等；含12-18個碳原子的飽和或不飽和脂肪酸單一、二-和三-甘油酯的混合物；多羥基醇如乙二醇，聚乙二醇，丙二醇，聚丙二醇，甘油，鯊肝醇，季戊四醇，山梨醇，甘露糖醇等；膠狀物如阿拉伯膠，苯甲酸膠，愈創木脂，黃蓍膠等；水溶天然高分子化合物如明膠，澱粉，酪蛋白，糊精，果膠，果膠酸鈉，藻酸鈉，甲基纖維素，乙基纖維素，羧甲基纖維素，羥乙基纖維素，羥丙基纖維素，結晶纖維素等；水溶合成高分子化合物如聚乙烯基醇，聚(乙烯基甲基醚)，聚乙烯吡咯烷酮，聚丙烯酸鈉，羧乙烯基聚合物，聚乙烯亞胺等；非離子，陰離子，兩性和陽離子表面活性劑；乙醇，異丙醇和水。
對外用藥物製劑來說，可加入普通添加劑如凝膠劑，保存劑，抗氧劑，緩衝劑，pH控制劑，潤溼劑，防腐劑，調色劑，調味劑，色料，增稠劑，金屬螯合劑等。
氣霧型製劑一般可通過將本發明式(I)喹諾酮衍生物的滅菌溶液或懸浮液與推進劑一起配製而製備。在製備溶液劑或混懸劑時，也可使用本領域常用的任何一種已知稀釋劑，因此可使用在配製注射劑中列舉的稀釋劑。至於推進劑，也可使用本領域常用的任一種推進劑，因此，可列舉的有液化氣推進劑如象二氯二氟甲烷或三氟二氯乙烷之類的氯氟烴；壓縮氣推進劑如氮氣，二氧化碳氣等。氣霧型製劑還可含普通的增溶輔劑，緩衝劑等，如果必要，也可加入調色劑，保存劑，香料，調味劑，甜味劑。
含在本發明治療眼病藥劑中的有效成分量不受特定限制，可在寬的範圍內選擇，一般該量可在0.005-5％重量份，優選0.01-3％重量份的範圍內選擇。
本發明藥劑給藥方法不受特定限制。因此，依據製劑形式，患者年齡，性別及其它條件不同，患者病情程度可通過常用眼用藥物製劑中使用的類似方法給藥。
至於本發明藥劑的典型給藥方法，例如，眼膏通過在眼睛上塗覆給藥。滴眼劑可通過常用滴眼劑中使用方法的類似方法給藥，例如，1-2滴滴眼劑從適當的滴眼容器中滴到眼內。另外，可用噴霧裝置將滴眼劑給入眼內。
至於本發明藥劑的其它給藥方法，例如，片劑，丸劑，液體製劑，混懸劑，乳劑，顆粒劑，糖漿劑和膠囊劑口服給藥。注射劑單獨或結合常用輔助溶液如葡萄糖溶液和/或胺基酸溶液靜脈注射給藥。如果必要，注射劑單獨肌內、皮內、皮下或腹內給藥。栓劑直腸內給藥。
取決於給藥方法，患者年齡，性別和其它狀況，以及患者病情和其它相關因素，本發明劑量可適當選擇，一般可眼用藥劑如滴眼液或眼膏每天給藥1-15次，優選每天給藥1-10次。實施例本發明治療眼病藥劑通過藥物製劑及藥理實驗實例詳細解釋。2-(4-氯苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸0.20g氯苄烴銨0.01g磷酸二氫鈉 0.56g磷酸二氫鉀 0.80g蒸餾水 足量共100.00ml上述各成分溶於蒸餾水，然後把所得溶液滅菌並適當濾紙過濾，製備本發明滴眼劑形式的藥劑。藥理試驗1(1).試驗液至於本發明治療眼病藥劑有效成分的具體實例，使用2-(4-氯苯甲醯基氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸(以後稱為本發明化合物)，並製備下面溶解液和懸浮液，用它們作試驗液體。a).3％溶解液本發明化合物3.00g甲基葡胺(N-甲基穀氨醯胺)2.64g濃縮甘油1.80g鹽酸足量10％氯苄烴銨0.10ml水(加足量調整到總體積至)100mlpH(pH值調在下面範圍內) 8.3-9.3b).3％懸浮液本發明化合物3.00g磷酸二氫鈉 0.40g磷酸氫二鈉 0.47g氯化鈉 0.50g羧甲基纖維素鈉 0.20g多乙氧基醚800.16g10％氯苄烴銨0.10ml水(加至)100mlpH(調至)6.5-7.5另一方面，生理鹽水代替試驗液用作對照試驗。(2).實驗方法和結果向3隻正常兔雙眼中經眼滴入上述試驗液，每次每隻眼睛滴50μl。每個試驗組和對照組由3隻兔組成，因此，每組用6隻眼睛。給藥每天進行4次，連續2周。之後，殺死每隻兔，進行下面3項試驗。(i).結膜表面黏膜樣物質量的測量
(由Alcian藍結合方法測量)殺死上述正常兔，摘出所有兔結膜。之後，用0.25M蔗糖冰冷水溶液洗摘出的結膜，測量每個結膜組織的重量。
室溫下在10ml 0.1％Alcian藍溶液中孵育這樣處理的結膜1.5小時，然後用0.25M蔗糖水溶液洗15分鐘，再用同樣溶液洗45分鐘。因此得到的結膜再孵育在10ml 0.5M MgCl2水溶液中2小時，以便萃取與結膜粘液樣層結合的著色劑。用10ml乙醚洗這樣得到萃取液，於605nm測量水層光密度，計算單位組織重量的光密度(0.D單位/克組織)，(平均值±S.E.，n＝4眼)。結果示於圖1。
從圖1可看出，與對照組兔測量值相比，試驗組正常兔結膜上黏膜樣物質結合的著色劑(Alcian藍)量更大，試驗組中滴眼給藥3％溶解液和3％懸浮液(其兩者分別含本發明化合物)。因此，本發明化合物顯示出增大覆蓋在結膜表面粘液樣物質量的效果。(ii)含在結膜中杯狀細胞數測量(用壓遮法測量)輕微乾燥球結膜部分，其位於用上述試驗液處理的兔眼上部，與鼻淚管很近，然後在其上放一個微孔濾片，壓濾片以收集結膜上皮細胞樣品及杯狀細胞。收集的細胞用70％乙醇固定，並定期用Schiff酸反應(PAS)和蘇木精染色，隨後用二甲苯將這樣染色的微孔濾膜變成透明，並將濾膜放在製備玻璃室。在製備玻璃室內得到的樣品進行光學觀察，計算每單位面積(0.09mm2)杯狀細胞數(平均值±S.E.，n＝4隻眼)。結果示於圖2。
從圖2可看出，與對照組兔測量結果相比，向其中滴入3％溶解液和3％懸浮液(兩者分別含本發明化合物)的試驗組正常兔的結膜中所含杯狀細胞數測量值更高。因此，本發明化合物顯示出增大粘液樣物質量也增大淚液量的效果。(iii)淚液量測量(用修改的Schirmer試驗I方法測量)在隨後測量淚液量試驗前5分鐘經眼睛向用上述試驗液處理的試驗組正常兔滴入30μl Benoxil(眼用0.4％氧布吡卡因鹽酸鹽的商品名，Santen藥物有限公司生產)。讓兔自由站立4分鐘，除去眼表面淚液。1分鐘後，Schirmer試驗紙片放在下眼皮內和眼表面之間(開始測量淚液)。讓兔隨意站立5分鐘，然後測量滲透到Schirmer試紙上淚液長度(mm)(平均質±S.E.，n＝4隻眼睛)。結果示於圖3。
從圖3可以看出，與對照組兔測量值相比，經眼滴入3％溶解液和3％懸浮液(兩者分別含本發明化合物)的試驗組正常兔的淚液量測量值更高。因此，本發明化合物顯示出與對照組兔所示值相比增大淚液量的效果。藥理試驗2(1).實驗方法從紐西蘭白雌兔中摘出眼球，製備鞏角膜樣品片。在用立體顯微鏡觀察下從該樣品片中除去Descemet膜及內皮細胞，然後用磷酸鹽緩衝的生理鹽水洗鞏角膜樣品片4-5次以製備無菌狀態(無菌)樣品。之後，該鞏角膜的無菌樣品片浸泡在Dulbecco修改的Eagle培養介質F12(DME/F12)(1∶1)中，用剃刀從每個角膜樣品切下大約20片角膜邊為2-3mm的樣品小方塊。這些小樣品角膜塊中7-8片在直徑約為60mm的組織培養皿中，將小塊下面粘到盤的底部以保持角膜上皮朝上，於37℃在5％CO2-95％空氣的氣氛下在含100％FCS，10ng/ml hEGF-DME/F12(1∶1)的培養基中培養。培養2天後，從培養基中拿出角膜上皮的小樣品塊，換培養基。
培養持續4-5天(培養基換1-3次)，然後除去培養基，用磷酸鹽緩衝液洗角膜上皮的小樣品塊，細胞漂浮在0.1％胰蛋白酶-0.02％EDTA的溶液中，並懸浮在含10％FCS的DME/F12(1∶1)培養基中，隨後在含12孔的多孔培養皿中以1×104細胞/孔的數孵育懸浮液。大約12小時後，培養基換成含10％FCS的DME/F12的另一培養基，與藥理試驗1所用相同的本發明化合物溶於DMSO中，並以10-4-10-6M濃度加入。
加入本發明化合物後48小時，換含本發明化合物的培養基。加本發明化合物後96小時，細胞漂浮在0.1％胰蛋白酶-0.02％ED-TA的溶液中，用庫爾特計算器計算細胞數(平均值±S.E.，n＝6隻眼睛)。
作為對比試驗，透明質酸鈉(1mg/ml)用於替代本發明化合物。對於對照試驗，使用不含本發明化合物的DMSO。(2).試驗結果結果示於圖4。從圖4可看出，用本發明化合物處理角膜上皮時，與用被認為具有增加角膜上皮增生活性的透明質酸鈉的對比試驗中所示結果相比顯示出提高角膜上皮增生的極佳效果。在圖4中，符號「*」表示與對照相比，P＜0.05，符號「**」表示與對照相比，P＜0.01。藥理試驗3(通過強制吹風得到的乾眼模型試驗)(1)試驗液至於本發明治療眼病藥劑有效成分的具體實例，使用2-(4-氯苯甲醯氨基7-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸(此後稱為本發明化合物)，並製備下面1％滴眼液，用它作試驗液。1％滴眼液本發明化合物0.50g甲基葡胺(N-甲基穀氨醯胺)1.32g濃甘油 0.45g10％氯苄烴銨50μl生理鹽水(加至) 50mlpH(調至)8.8-9.3滲透壓(調到)290-300mOsm至於對照試驗，不含本發明化合物的滴眼用上述溶解劑用作對照。(2).製備乾眼模型(黏膜樣囊炎及角膜上皮損傷)的方法紐西蘭白色雌性兔用於試驗。試驗前切除兔眨眼膜。
向兔雙眼中肌內注射200mg氯胺酮/體重和滴入每眼2滴劑量為4％氧布比卡因鹽酸鹽溶液作為麻醉藥。
乾燥劑和角膜間的距離保持10釐米，從乾燥劑向角膜前方向吹風10分鐘。蒸發淚液，乾燥角膜表面，誘發粘液樣囊炎及角膜上皮損傷。(3).試驗化合物用法自乾燥劑吹風前2周，給予1％滴眼液。通過從乾燥劑吹風製備乾眼模型後，給予1％滴眼液2周。給藥前後以2.5小時間隔每天4次給予1％滴眼液。
至於對照試驗，不含本發明化合物的滴眼溶解劑用作對照。(4).評價方法和結果給予1％滴眼液前，吹風前，吹風后1，4，7，10和14天參考下2項評價試驗結果(i)用Rose Bengal著色劑活體染色的方法打分評價損傷角膜用Rose Bengal著色劑活體染色法染色不覆蓋粘液樣物質的角膜細胞，基於下面打分按照角膜染色程序評價試驗組兔角膜上粘液樣囊炎(平均質±S.E.，n＝10隻眼睛)，打分評價(滿分3分)0分角膜根本未染色1分所有角膜面積不到1/3均勻染色，或角膜面積不到2/3染成色斑2分1/3-2/3的角膜面積均勻染色，或2/3以上的角膜面染成色斑，或不到1/3的角膜面均勻染色，也觀察到染色斑點。
3分2/3以上角膜面均勻染色，或1/3-2/3角膜面均勻染色，也觀察到染色斑點。
結果示於圖5，從圖5可以看出，滴入1％滴眼液的試驗組紐西蘭白兔的角膜，用Rose Bengal著色劑活體染色分數低於對照組所示的分數。因此，本發明化合物明顯抑制和治療由吹風法引起的粘液樣囊炎。(ii)用螢光素鈉著色劑活體染色法打分評價損傷的角膜用螢光素鈉活體染色法染色細胞缺陷部分和細胞間異常部分，以根據類似於上述用Rose Bengal著色劑活體染色中所用的角膜的染色程度所得分數計評價試驗組兔角膜上粘液樣囊炎(平均質±S.E.，n＝10隻眼)。
結果，與吹風后1天螢光數分數相比，對照組分數為2或更高，而試驗組紐西蘭白名義(向其滴入10％滴眼液)分數幾乎為1。因此，本發明化合物明顯抑制和治療由吹風法引發的粘液樣囊炎。藥理試驗4(由防止眨眼製作的乾眼模型試驗)(1)試驗液1％滴眼液(含1％本發明化合物滴眼液)，其類似於藥理試驗3中所用的，用作試驗液。
至於對照試驗，使用不含本發明化合物的滴眼溶解劑。(2)製備乾眼模型的方法紐西蘭雌性白兔用於試驗。試驗前切除兔的眨眼膜。
向兔雙眼給予麻醉藥，方法是腹腔注射2g尿烷/體重。用眼擴張器強迫兔眼皮睜開，並於25℃讓其保持2小時。淚液蒸發，角膜表面乾燥，待到乾眼膜型——損傷角膜上皮。(3)試驗化合物用法避免眨眼前兩周，以2.5小時時間間隔每天4次給予1％滴眼液。在避免眨眼前最後一次給予滴眼液持續5分鐘。
至於對照試驗，不含本發明化合物的滴眼溶解劑用作對照。(4)評價方法和結果避免眨眼結束後，向試驗組兔眼滴入50μl 1％亞甲基藍溶液，用生理鹽水徹底洗眼。
然後，靜脈注射過量戊巴比妥溶液將兔殺死，摘出角膜。用丙酮∶硫酸鈉飽和水溶液7∶3的混合物從摘出的角膜中萃取亞甲基藍過夜。於660nm處測量由此得到萃取液的光密度，計算染色劑角膜上皮損傷部分的亞甲基藍(平均質±S.E.，n＝8隻眼)。
結果示於圖6。從圖6可以看出，本發明的化合物抑制由避免眨眼引起的角膜上皮損傷。藥理試驗5(通過從結膜上除去粘液樣層得到乾眼模型試驗)(1)試驗液1％滴眼液(含1％本發明化合物的滴眼液)，其類似於藥理試驗3中所用的，用作試驗液。
關於對照實驗，使用不含本發明化合物的滴眼溶解劑。(2)製備乾眼模型的方法以2小時間隔1天滴眼6次，滴注10％濃度的N-乙醯基半胱氨酸溶液，溶解並從紐西蘭雌性白兔結腸中除去粘液樣層，製備乾眼模型。(3)試驗化合物的用法以2.5小時間隔每天4次給予1％滴眼液，持續2周。
至於對照實驗，不含本發明化合物的滴眼溶解劑用作對照。(4)評價方法和結果開始給予1％滴眼液後兩周，靜脈注射過量戊巴比妥注射液，將兔殺死，然後摘出角膜。用類似於藥理試驗1，(2)(i)中的Alcian藍結合法測量結膜粘液樣物質的量(平均質±S.E.，n＝6隻眼)。
結果示於圖7。從圖7可看出，結合到試驗組紐西蘭白兔(滴入1％滴眼液)結膜上粘液樣物質上的著色劑量，結膜上粘液樣物質量比對照組高。因此，本發明化合物增加結膜上粘液樣物質量至幾乎與正常狀態眼表面上的具有相同水平。
圖7中，符號「#」表示P＜0.05，對正常狀態眼睛(+-試驗)；符號「**」表示P＜0.01，對對照組眼睛(+-試驗)。
權利要求
1.一種治療眼病的藥劑，其含通式(I)所示的喹諾酮衍生物或其鹽作為活性成分
其中R為滷原子，下式側鏈的取代位
為喹諾酮骨架的3-或4-位，喹諾酮骨架中3-和4-位間的碳-碳鍵為單鍵或雙鍵。
2.權利要求1的治療眼病的藥劑，其為促進眼內杯狀細胞增生的藥物。
3.權利要求1的治療眼病的藥劑，其為增加眼內分泌的粘液樣物質的藥物。
4.權利要求1的治療眼病的藥劑，其為增加眼內分泌淚液量的藥物。
5.權利要求1的治療眼病的藥劑，其中眼病為乾眼症。
6.權利要求1的治療眼病的藥劑，其為治療眼損傷的藥物。
7.權利要求6的治療眼病的藥劑，其中眼損傷為角膜上皮損傷。
8.權利要求1-7中任一個的治療眼病的藥物，其中有效成分為2-(4-氯苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸或其鹽。
9.權利要求8的治療眼病的藥物，其為適於眼用的藥物製劑形式。
10.一種適於眼用的藥物製劑，其含有2-(4-氯苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸或其鹽和藥用的眼用常用載體(稀釋劑或賦形劑)。
11.用治療眼病的藥物治療眼病的方法，該藥物含通式(I)所示喹諾酮衍生物或其鹽作為活性成分
其中R為滷原子，下式側鏈的取代位
為喹諾酮骨架的3-或4-位，喹諾酮骨架中3-和4-位間的碳碳鍵為單鍵或雙鍵。
12.根據權利要求11的用治療眼病藥物治療眼病的方法，其為促進眼內gollet細胞增生的藥物。
13.根據權利要求11的用治療眼病藥物治療眼病的方法，其為增加眼內分泌粘液樣物質量的藥物。
14.根據權利要求11的用治療眼病藥物治療眼病的方法，其為增加眼內分泌淚液量的藥物。
15.根據權利要求11的用治療眼病藥物治療眼病的方法，其為治療眼損傷的藥物。
16.根據權利要求11的用治療眼病的藥物治療乾眼症的方法。
17.根據權利要求16的用治療眼病的藥物治療角膜上皮損作的方法。
18.根據權利要求11-17中任一個的用治療眼病的藥物治療眼病的方法，其中有效成分2-(4-氯苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸或其鹽。
19.根據權利要求18的用治療眼病的藥物治療眼病的方法，其為適於眼用的藥物製劑。
20.用適於眼用的藥物製劑治療眼病的方法，藥物製劑含有2-(4-氯苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸、或其鹽和眼用藥物製劑可接受的常用載體(稀釋劑或賦形劑)。
21.組合物製備治療眼病藥物的用途，其含通式(I)所示喹諾酮衍生物或其鹽作為活性成分，
其中R為滷原子，下式側鏈的取代位
為喹諾酮骨架的3-或4-位，喹諾酮骨架中3-和4-位間的碳碳鍵為單鍵或雙鍵。
22.權利要求21組合物製備治療眼病藥物的用途，其為促進眼內杯狀細胞增生的藥物。
23.權利要求21組合物製備治療眼病藥物的用途，其為增加眼內分泌粘液物質量的藥物。
24.權利要求21組合物製備治療眼病藥物的用途，其為增加眼內分泌淚液量的藥物。
25.權利要求21組合物製備治療眼病藥物的用途，其為治療眼損傷的藥物
26.權利要求21組合物製備用於治療乾眼病藥物的用途。
27.權利要求25組合物製備用於治療眼病藥物的用途，其為治療角膜上皮損傷的藥物。
28.權利要求21-27中任一個組化合物製備治療眼病藥物藥物的用途，其中有效成分為2-(4-氯苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸或其鹽。
29.權利要求28組合物製備用於治療眼病藥物的用途，其為適於眼用的藥物製劑。
30.適於眼用的藥物製劑的用途，藥物製劑含有2-(4-氯苯甲醯氨基)-3-(2-喹諾酮-4-基)丙酸或其鹽和眼用藥物製劑可接受的常用載體(稀釋劑或賦形劑)。
全文摘要
本發明提供了治療眼病的藥物,其含有其中R為滷原子的通式(Ⅰ)所示喹諾酮衍生物或其鹽作為活性成分,特別是,本發明提供治療乾眼症有效的藥物。
文檔編號A61K31/4704GK1202108SQ96198194
公開日1998年12月16日 申請日期1996年10月1日 優先權日1995年10月12日
發明者浦島博樹, 竹治康廣, 筱原久司, 藤澤茂樹 申請人:大製藥株式會社