一種檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的試劑盒及其應用的製作方法
2023-06-21 22:13:16 1
專利名稱：一種檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的試劑盒及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種試劑盒及其應用，尤其涉及一種檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的試劑盒及其在肝臟功能檢測及評價中的應用。屬醫學檢測技術領域。
背景技術：
在我國，慢性肝病是常見病和多發病，僅B型肝炎病毒攜帶者就高達一億多人，佔我國總人口的10％以上。每年有100萬新生兒由於母嬰垂直傳播，可能會感染B肝病毒。另外，代謝異常、藥物、酗酒以及自身免疫性疾病也是引起肝損壞的常見原因。由於慢性肝損壞主要發生在青壯年，一旦轉變成肝硬化，除誘發肝癌外，其自身也是一種不可逆轉的病理過程，給社會和家庭在經濟和精神上造成極大的負擔和痛苦。因此，在肝功能檢測中，做到肝病早診斷、早預防、早治療很有必要。
目前，臨床上將谷丙轉氨酶(SGPT)、穀草轉氨酶(SGOT)、鹼性磷酸酶-穀氨醯轉肽酶(γ-GT)、乳酸脫氫酶等測定統稱為肝功能檢查，這是不正確的。正如Limd JR等人(Postgrad Med 2003；79307～312)指出的那樣，這些檢查是肝細胞受到損害的指標，並不能反映肝臟的功能。肝臟功能是指肝臟的解毒功能、肝臟的生物轉化功能、肝臟的排洩功能、肝臟的三大物質代謝功能和肝臟在胚胎期的造血功能。而目前與這些功能相關的常規檢查主要有三個指標，即血漿白蛋白含量測定、血清膽紅素含量測定和凝血酶原時間測定。但在臨床工作中，經常遇到這樣一些病人，早期只是B肝病毒攜帶者，與肝臟相關的各項檢查都正常，以後卻發展成肝硬化或肝癌。有些脂肪肝、長期飲酒後慢性肝病的病人，肝臟的組織結構已明顯破壞，但現有肝功能實驗指標卻都正常。一旦接受肝臟手術或介入治療，常出現嚴重肝功能衰弱，甚至死亡。這說明現有的檢測指標靈敏度低，特異性差，不能滿足臨床的需要。因而，正確評價肝臟功能是肝臟疾病早期診斷、早期預防和早期治療的關鍵。
正確評價肝臟功能是國內外臨床和基礎工作者長期關注的一個重點。近年來這一領域的研究取得重大進展，發現非那西丁肝外代謝極少，且不被經典肝藥酶誘導劑苯巴比妥鈉所誘導。說明非那西丁氧位去乙基酶是評價肝臟功能的理想靶點。非那西丁是肝臟乙氨醚氧位去乙基酶的特異性底物，該酶在肝臟呈組成型表達。口服或靜脈注射後，在非那西丁氧位去乙基酶催化下，非那西丁被代謝成醋氨酚。測定血液中非那西丁與醋氨酚比值，能夠準確反映肝臟的生物轉化功能。非那西丁副作用少，不良反應小，人體最小中毒劑量大於5克，是臨床實驗的理想探針藥物。
血清中非那西丁和醋氨酚的含量現在多採用精密儀器分析法(HPLC)測定，該方法雖然準確，精密度高，但成本高，速度慢，實用性差，不易推廣。因此，迫切需要能有一種既簡便又準確、實用的檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的方法及試劑盒。
發明內容
針對現有技術中存在的不足，本發明要解決的問題是提供一種檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的試劑盒及其在肝臟功能檢測及評價中的應用。
本發明的試劑盒可以準確測定血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值，簡便快捷，易操作，成本低，適合於各級醫院的使用。
本發明所述的檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的試劑盒，包括盒體，設在盒體內的應用試劑；其特徵是所述應用試劑分別為體積百分比為20％鹽酸，質量體積百分比為0.02％1，2-萘醌-4-磺酸鈉的水溶液，質量體積百分比為1％十六烷基三甲級溴化銨的水溶液，質量體積百分比為8％碳酸鈉的水溶液，體積百分比為10％三氯乙酸水溶液。
上述的試劑盒在評價肝臟功能中的應用。
上述試劑盒的使用方法如下(1)患者口服1克非那西丁，2小時後抽血，分離血清備用。
(2)取血清1ml，加入10％三氯乙酸1.5ml，進行去蛋白操作，在3000轉/分條件下離心15min，分離出上清液。
(3)取25ml容量瓶加入上述1ml上清液，0.25ml 20％鹽酸，水浴回流45min。
(4)冷卻至室溫後，加入7.5ml 8％碳酸鈉，充分振蕩，然後依次加入6ml 0.02％1，2-萘醌-4-磺酸鈉，1ml 1％十六烷基三甲級溴化銨。
(5)根據雙波長分光光度法的原理，在491nm和539nm波長測定吸光度，根據公式ΔA1＝0.000205C(ΔA1為顯色反應曲線中491nm和539nm的吸光度差值，C的單位為ug/ml)測定非那西丁的含量，測定撲熱息痛的含量方程為ΔA2＝0.000243C(ΔA2為顯色反應曲線中470nm和516nm的吸光度值差，C的單位為ug/ml)。
(6)根據非那西丁和醋氨酚的濃度比作為評價肝臟功能的指標，其中健康人群中二者的比值小於或等於1，肝功能異常者的比值大於1。
本發明提供的試劑盒優點是(1)檢測速度快。除去樣品前期處理時間，使用液相色譜測量單一成分的在機運行時間大於20分鐘，在本實驗測量兩種成分在機運行時間大於40分鐘，一天按8小時工作時間算，每天檢測樣品小於12例，而使用本試劑盒在機運行時間小於2分鐘，可以滿足臨床大量檢測樣品的需要。
(2)操作簡便，成本低。液相色譜法需要液相色譜儀，儀器昂貴，對操作人員要求高，而本試劑盒所用試劑為普通化學試劑，所用儀器也是各級醫療機構都有的普通的分光光度計，使用成本低，便於推廣應用。
具體實施例方式
實施例1單人份試劑盒製備10cm×15cm×10cm盒體，在盒體內設置五個成裝應用試劑的槽孔，分別成裝一號塑料瓶(容積5ml)，含10％三氯乙酸2ml；二號玻璃瓶(容積2ml)，含20％鹽酸1ml；三號瓶塑料瓶(容積10ml)，含8％碳酸鈉8ml；四號棕色玻璃瓶(容積10ml)，含0.02％1，2-萘醌-4-磺酸鈉7ml；五號塑料瓶(容積5ml)，含1％十六烷基三甲級溴化銨2ml；即製成檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的單人份試劑盒。
實施例2依據實施例1所述應用試劑的量及其試劑瓶容積量，可放大製備成檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的10人份試劑盒，檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的百人份試劑盒，檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的300人份試劑盒，檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的500人份試劑盒。
實施例3應用實施例1所述檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的單人份試劑盒進行肝硬化病人的肝臟功能檢測(1)患者口服1克非那西丁，2小時後抽血，分離血清備用。
(2)取血清1ml，加入10％三氯乙酸1.5ml，進行去蛋白操作，在3000轉/分條件下離心15min，分離出上清液。
(3)取25ml容量瓶加入上述1ml上清液，0.25ml 20％鹽酸，水浴回流45min。
(4)冷卻至室溫後，加入7.5ml 8％碳酸鈉，充分振蕩，然後依次加入6ml 0.02％1，2-萘醌-4-磺酸鈉，1ml 1％十六烷基三甲級溴化銨。
(5)根據雙波長分光光度法的原理，在491nm和539nm波長測定吸光度，根據公式ΔA1＝0.000205C(ΔA1為顯色反應曲線中491nm和539nm的吸光度差值，C的單位為ug/ml)測定非那西丁的含量，測定撲熱息痛的含量方程為ΔA2＝0.000243C(ΔA2為顯色反應曲線中470nm和516nm的吸光度值差，C的單位為ug/ml)。
(6)根據非那西丁和醋氨酚的濃度比作為評價肝臟功能的指標，肝功能異常者的比值大於1。
檢測得所述肝硬化病人非那西丁和醋氨酚的濃度比是4.6，可診斷為肝功能異常。
實施例4同樣方法，應用實施例1的試劑盒評價了20例正常人和12例肝硬化病人的肝臟功能，結果發現正常人口服非那西丁2小時後，其血液中非那西丁與醋氨酚的比值全部小於1，而肝硬化病人大於4。
權利要求
1.一種檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的試劑盒，包括盒體，設在盒體內的應用試劑；其特徵是所述應用試劑分別為體積百分比為20％鹽酸，質量體積百分比為0.02％ 1，2-萘醌-4-磺酸鈉的水溶液，質量體積百分比為1％十六烷基三甲級溴化銨的水溶液，質量體積百分比為8％碳酸鈉的水溶液，體積百分比為10％三氯乙酸水溶液。
2.權利要求1所述的試劑盒在評價肝臟功能中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種檢測血液中非那西丁與醋氨酚濃度比值的試劑盒，包括盒體，以及設在盒體內的應用試劑；所述應用試劑分別為體積百分比為20％鹽酸，質量體積百分比為0.02％1，2－萘醌－4－磺酸鈉的水溶液，質量體積百分比為1％十六烷基三甲級溴化銨的水溶液，質量體積百分比為8％碳酸鈉的水溶液，體積百分比為10％三氯乙酸水溶液。本發明還公開了所述試劑盒在評價肝臟功能中的應用。本發明的試劑盒具有檢測速度快，操作簡便，成本低的特點。
文檔編號G01N33/50GK1844923SQ20061004356
公開日2006年10月11日 申請日期2006年4月11日 優先權日2006年4月11日
發明者汪運山, 蓋中濤, 王慶西, 高勝春, 劉濤, 李棟, 曹麗君 申請人:汪運山, 曹麗君