抗spag9抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途的製作方法
2023-05-30 16:03:26
專利名稱：抗spag9抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及抗體在腫瘤診斷中的用途，特別是涉及到抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途。
背景技術：
SPAG9 (Sperm-Associated Antigen 9, SPAG9)蛋白特異性的定位於精子頭部頂體的赤道板區，在精子附著到卵子上以及隨後發生的受精過程中起著重要的作用，採用抗 SPAG9自身抗體進行去透明帶倉鼠卵穿透試驗，發現人精子穿透明顯的被抑制，考慮到頂體囊前部高濃度的SPAG9以及它的赤道定位，這種強烈的抑制精子結合的現象表明SPAG9作為一種精子表面相關抗原在精卵結合中發揮著重要作用。正常情況下SPAG9隻在睪丸的生殖細胞中表達，偶爾在胎盤中表達，在精子附著到卵子上以及隨後發生的受精過程中起著重要的作用，2004年發現SPAG9是癌-睪丸抗原家族的新成員，作為一種支架蛋白與JNK (c-Jun-NH2-knase)結合，參與JNK信號通路， 在細胞的生存、增殖、凋亡和腫瘤的發育等生理過程中扮演重要調節角色。2007年印度學者Manoj Garg等採用逆轉錄PCR、免疫組織化學、Western Blot以及Elisa等方法檢測了 SPAG9在mRNA和蛋白水平在上皮細胞卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer E0C)中的表達以及EOC患者血清中抗SPAG9抗體的表達。他們發現在mRNA和蛋白水平上皮細胞卵巢癌患者中有90%的患者癌症組織中有SPAG9的表達，其中67%的患者血清中有抗SPAG9的抗體存在。次年他們還發現SPAG9也在大多數腎細胞癌(RCC)患者組織中高表達，而且發現 SPAG9與體外培養的RCC細胞的運動力、轉移和入侵有關，另外體外細胞培養以及體內裸鼠實驗也證明採用siRNA敲除SPAG9後有效的阻止了癌細胞(組織)的增殖和生長。2009年 Deepika Kanojia等發現88%的乳腺癌患者在mRNA和蛋白水平有SPAG9的表達，同時有80% 的患者血清中檢測到SPAG9自身抗體；而且他們還發現各種水平的表達早期陽性檢出率大大高於晚期。後來又有學者相繼發現SPAG9在甲狀腺癌、子宮頸癌患者早期以及惡性血液系統疾病等均有較強的表達，這意味著SPAG9有可能作為一種非特異性的廣譜腫瘤早期標誌物應用於臨床腫瘤輔助診斷，尤其是體液免疫反應的存在，容易建立檢測方法，將大幅度提高腫瘤檢測的敏感性。血清標本比組織容易獲得，而且在腫瘤從細胞的改變到實體瘤組織的形成需要一定的時間，如果在腫瘤發生的早期能從患者外周血中檢出SPAG9的表達， 對腫瘤的早期診斷無疑是有幫助的。目前世界上還未見有關於肝癌患者SPAG9的表達以及外周血抗SPAG9抗體的相關報導，也未見肺癌患者外周血抗SPAG9抗體的相關報導。而本實驗室在實驗中的發現是一個有價值的線索。一直以來,血清中腫瘤相關抗原(Tumor-Associated Antigens, TAA)被認為是腫瘤早期診斷的血清學標誌物，為了尋找TAA人們進行了大量的研究工作，但由於其量的微小以及容易降解或在一定時間內經血液循環清除使得能用於臨床診斷的理想的TAA並不是很多。而TAA—旦被免疫系統識別引起了體液免疫反應即是一种放大了的信號，所以人們最近把注意力轉向尋找抗TAA自身抗體作為生物學標誌而不再是瞄準TAA本身，因為這種抗體在正常個體和非癌狀態下不表達或者低表達，其在血清中存在的時間上的持續性及穩定性優於包括TAA在內的其他的標誌物。但大多TAA是自身蛋白質，有可能免疫原性不強，所以，尋找能被自身免疫系統識別的TAA是關鍵。一般而言，腫瘤抗原刺激產生的自身抗體可以在腫瘤確診前一年檢出。比如HCC有一個特徵就是肝硬化、肝炎是其前期改變，當血清中出現自身抗體時提示惡變，這種抗體反應是誘導癌變的細胞蛋白刺激機體的免疫系統產生的。
發明內容
本發明的目的是提供一種抗SPAG9抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途。特別涉及到肺癌、肝癌患者的診斷。本實驗室對16例初診肺癌、32例初診肝癌和其他腫瘤患者外周血中IgG型抗 SPAG9自身抗體的表達進行了研究，同時檢測健康對照組、肝炎、肝硬化患者組循環血中 IgG型抗SPAG9自身抗體的水平。發現未經過任何治療措施處理的初診肝癌和肺癌患者血清中抗SPAG9抗體陽性率高達68. 8%，但經過各種手段治療的癌症患者血清抗SPAG9抗體陽性率僅29. 0%，肝炎患者血清抗SPAG9抗體陽性率為27. 3%，肝硬化患者血清抗SPAG9抗體陽性率為25. 0%，健康對照人群為8%。從OD值來分析，各組均有OD值很高的樣本，如8例肝硬化患者中的2例陽性的OD值均大於1.0，這兩例患者很有可能為高風險癌變患者，這說明由SPAG9引起的體液免疫反應在腫瘤發生的早期就已經存在，並可以通過檢測抗SPAG9 抗體來發現，便於及時跟蹤觀察。因此，該指標在腫瘤早期診斷中的意義是其他任何手段無法相提並論的。本發明通過檢測健康對照組、肝炎、肝硬化患者組、初診肝癌、初診肺癌、複診肝癌、複診肺癌循環血中IgG型抗SPAG9自身抗體的水平，發現癌症患者血清以及癌前病變患者血清中抗SPAG9抗體陽性率高於健康人，且未經任何治療措施處理的初診肝癌和肺癌患者血清中抗SPAG9抗體陽性率遠高於經過各種手段治療的癌症患者血清抗SPAG9抗體陽性率。因此本發明可用於肺癌、肝癌及其他腫瘤的早期血清學輔助診斷，在腫瘤發生的早期進行預測，尤其對於健康人群腫瘤風險預測有著良好的應用前景。本發明在腫瘤治療中的作用有待進一步研究。
具體實施例方式下面給出一種根據本發明製備的用於抗SPAG9抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途的非限定性的實施例。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的實驗材料，如無特殊說明，均自生物試劑公司購買所得。一、材料
血清標本血清標本共270例，來源於湖南省腦科醫院及湖南省腫瘤醫院，男性201例， 女性69例，年齡19歲 80歲，具體研究對象分布見表I。所有病例標本的診斷都經過臨床病理學、影像學或血清學檢查綜合分析證實。表I.研究對象分布情況
權利要求
1.抗SPAG9抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途。
2.根據權利要求I所述的抗SPAG9抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途，所述的腫瘤來自於肺癌患者。
3.根據權利要求I所述的抗SPAG9抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途，所述的腫瘤來自於肝癌患者。
全文摘要
本發明公開了抗SPAG9抗體在腫瘤的早期輔助診斷中的用途，所述的腫瘤來自於肺癌患者，肝癌患者及其他腫瘤患者；本發明可用於肺癌、肝癌及其他腫瘤的血清學診斷，在腫瘤發生的早期能對患者的腫瘤進行早期輔助診斷，尤其對於健康人群腫瘤風險預測有著良好的應用前景，在判斷疾病進程和預後，以及對腫瘤的診斷和治療具有較大的潛在價值。
文檔編號G01N33/574GK102590510SQ20121002258
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月2日 優先權日2012年2月2日
發明者任碧瓊 申請人:任碧瓊