低聚寡糖混合物在抗應激腦損傷中的用途的製作方法

2023-06-09 15:00:41

專利名稱：低聚寡糖混合物在抗應激腦損傷中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及衍生自中藥巴戟天的低聚寡糖混合物在抗應激腦損傷中的用途。
中藥巴戟天(mrinda officinalis How)具有補腎壯陽、強筋骨、抗風溼功效。中國專利申請No．94103414．3披露了一種活性成分為巴戟天的抗精神性疾病的藥物。中國專利申請No．94103415．1披露了從巴戟天萃取得到的式(Ⅰ)低聚寡糖及其作為抗精神病藥物，其中n=1-8。 但式Ⅰ低聚寡糖在抗應激腦損傷方面的活性還未見報導。
發明目的本發明的目的是尋找式Ⅰ低聚寡糖混合物的新用途。
發明簡述本發明人經研究現已出人意料發現，式Ⅰ的低聚寡糖混合物具有優良的抗應激腦損傷作用。
因此，本發明第一方面涉及式Ⅰ低聚寡糖混合物在製備用於治療應激腦損傷藥物中的用途。
本發明再一方面涉及的是治療應激腦損傷的方法，其包括將上述定義的式Ⅰ低聚寡糖混合物給予需治療的應激腦損傷患者。
詳細描述本發明涉及式Ⅰ的低聚寡糖混合物在製備用於治療應激腦損傷藥物 中的用途，其中n=1-8。
本發明還涉及治療激腦損傷的方法，其包括將式Ⅰ低聚寡糖 混合物給予需治療的應激腦損傷患者，n=1-8。
根據本發明，本發明作用的式Ⅰ低聚寡糖混合物是通過萃取植物巴戟天得到的。萃取中所用溶劑為有機溶劑，含水有機溶劑或水。有機溶劑為醇類如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇等，滷代烷類如二氯甲烷或三氯甲烷等，酯類如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯等，或醚類如石油醚或乙醚等。
根據本發明，式Ⅰ低聚寡糖混合物在用於治療應激腦損傷中可以單獨或以組合物形式使用。給藥方式可以是口服或非腸道途徑。給藥劑型可以是口服劑型如片劑或膠囊等，非腸道給藥劑型如無菌注射劑、滴注液等。
本發明將通過下面的實施例及生物活性試驗做進一步說明，但這並不意味著對本發明的任何限制。
實施例1式Ⅰ低聚寡糖的製備取巴戟天1KG粉碎過50目篩，篩過物用石油醚提取。每次用石油醚5升，提取三次。合併，減壓蒸發乾，得到石油醚提取物100g；藥渣用乙醇提取。每次用乙醇8升，提三次，合併，減壓蒸發乾，得到乙醇提取物160g。提取物再用水溶解，過濾，濾過液在正丁醇和水中分配提取，得到可溶於正丁醇的提取物120g和水溶部分300g。將水溶部分100g用活性碳柱層析進行分離，展開劑是10％-70％的乙醇。得到式Ⅰ低聚寡糖混合物，重26g(純度幾乎100％)。取其部分進行高壓液相色譜(柱Spherisorb C18(4．5×250mm)，檢測RI Waters DifferentialRefractometer 410(US)，泵WatersTM600，洗脫5％甲醇水，流速1．0ml／分鐘)，測得式Ⅰ低聚寡糖的保留時間為n保留時間(分鐘)12．3923．0533．4344．2754．5366．3477．4888．47生物活性實驗實施例2、式Ⅰ低聚寡糖混合物對慢性應激大鼠血中皮質酮及睪酮水平的調節1．方法與結果Wistar雄性大鼠，體重160±20g，隨機分為4組，每組8隻，應激對照組動物每日給予電擊、強迫遊泳、高速振蕩、固定、禁食(水)等不良刺激，時程14天，使動物處於慢性應激狀態。給藥組則在應激的同時腹腔注射(ip)式Ⅰ低聚寡糖混合物，正常組則不接受任何應激刺激，第15天斷頭取血並分離血清，利用皮質酮、睪酮試劑盒進行測定。結果用單因素方差分析進行統計。
表1．式Ⅰ低 聚寡糖混合物對慢性應激大鼠血中皮質酮及睪酮水平的影響。##P＜0．01，###P＜0．001 vs正常對照，**P＜0．01，***P＜0．001，vs應激對照，n=8。
2．討論慢性應激的關鍵特徵之一就是血中皮質酮水平顯著升高、睪酮水平降低，而式Ⅰ低聚寡糖混合物二個劑量組可以逆轉這一結果，表示可以拮抗慢性應激。
實施例3、式Ⅰ低聚寡糖混合物對皮質酮損傷的PC12細胞的保護作用1．方法用含5％胎牛血清及5％馬血清的DMEM培養液(含青黴素鈉200kU·L-1，鏈黴素100mg·L-1，pH7．4)將細胞稀釋為約2×108．L-1接種於預先用多聚賴氨酸(0．1g．L-1)處理過的96孔培養板，每孔100μL，放入CO2孵箱(美國Napco公司生產)37℃，5％CO2條件下培養3～4天，待細胞長滿孔底後即可用於實驗，參照文獻(劉景根等，藥學學報1998，33(3)165)方法，稍加改進，吸去細胞液，換上含有相應濃度藥物及0．2mmol．L-1皮質酮(corticosterone，Cort)的無血清DMEM(對照組不含任何藥品)，37℃5％CO2培養48小時，吸去培養液，用D-Hanks液洗2遍，每孔加入含0．5g．L-1MTT的無血清DMEM培養4小時後吸去培養液，每孔加入10％十二烷基硫酸鈉100μL，待藍色顆粒完全溶解(約12～16小時)，利用多孔掃描分光光度計(型號MCC／340)測定標本在570nm的吸光度(A)值，用於定量反映活細胞數並計算藥物對皮質酮損傷的PC12細胞損傷的抑制率。
表2．式Ⅰ低聚寡糖混合物對皮質酮損傷的PC12細胞的保護作用
***P＜0．001 vs皮質酮損傷對照。
2．結果PC12細胞經0．2mmol．L-1皮質酮處理48小時後，對MTT攝取能力下降，A值顯著低於正常對照組，表明細胞受到損傷或部分細胞已死亡，但當式Ⅰ低聚寡糖混合物存在時，PC12細胞對MTT攝取能力明顯增強，表明PC12細胞損傷明顯減弱，活細胞明顯增多，具有濃度依賴關係。此結果表明式Ⅰ低聚寡糖混合物可以對抗應激導致的腦神經細胞的損傷。
權利要求
1．式Ⅰ低聚寡糖混合物在製備用於治療應激腦損傷藥物中的用途， 其中n=1-8。
2．根據權利要求1的用途，其中所述藥物可以片劑或膠囊形式使用。
3．根據權利要求1的用途，其中所述藥物可以無菌注射劑或滴注液形式使用。
全文摘要
本發明涉及式Ⅰ低聚寡糖混合物在製備用於治療應激腦損傷藥物中的用途。
文檔編號A61P25/00GK1289593SQ99120249
公開日2001年4月4日 申請日期1999年9月24日 優先權日1999年9月24日
發明者李雲峰, 羅質璞, 趙毅民, 楊明 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所