一種檢測鈉離子的方法和試劑盒的製作方法
2023-05-29 09:28:31
專利名稱：一種檢測鈉離子的方法和試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物化學領域，具體涉及一種檢測鈉離子的方法和試劑盒。
背景技術：
電解質是指在水溶液中或熔融狀態下能夠導電的化合物。在人體中，電解質廣泛分布在細胞內液和細胞外液中，其中細胞外液的電解質中主要陽離子是鈉離子，主要的陰離子是氯離子和碳酸氫根離子；細胞內液的電解質中主要陽離子是鉀離子和鎂離子，主要的陰離子是磷酸氫根離子。這些電解質離子通過神經、體液調節與水形成動態平衡，兩者共同參與機體的代謝活動等機體重要機能，對正常生命活動的維持起著非常關鍵的作用。電解質離子和水之間的失衡會造成水和電解質紊亂，這對機體的正常生命活動影響極大。許多器官系統的疾病以及一些全身性的病理過程，都可以引起或伴有水和電解質紊亂。此外，外界環境的某些變化、某些醫原性因素如藥物使用不當，也常可導致水和電解質紊亂。如果得不到及時的糾正，水和電解質紊亂本身又可使全身各器官系統特別是心血管系統、神經系統的生理功能和機體的物質代謝發生相應的障礙，嚴重時常可導致死亡。因此，在糾正水和電解質紊亂的過程中，必須先檢測機體內電解質離子的濃度，然後進行針對性的治療。水和電解質紊亂在臨床上最常見的是水和鈉的紊亂。現有檢測鈉離子的方法有很多，常用的有火焰光度法、離子選擇電極法和酶法。離子選擇電極法採用靈敏的特定專用電極，在專用儀器上進行血清和尿液等體液的鈉離子測定，其專用儀器是通過離子選擇電極與參比電極組合浸泡在待測標本中進行檢測的。但是，該法中的電極在使用一定時間後會自動老化，壽命較短，需要經常更換，檢測成本較大，不利於各基層醫院的廣泛使用。火焰光度法分為內標準法和外標準法兩種。由於外標準法操作誤差較大，一般不採用。現在主要使用內部標準法，即標本及標準液採用加進相同濃度的內部標準元素鋰或銫進行測定。操作時，將含鋰的溶液作為稀釋液，同時測定鈉離子的濃度，以標本與標準液的Na/Li比值，計算Na+的濃度。但是火焰光度法儀器受使用燃料的限制，並且測定步驟繁瑣，存在一定誤差，限制了其在鈉離子檢測中的應用。隨著各種半、全自動生化分析儀的普遍應用，酶法檢測鈉離子濃度也越來越普遍。 其中一種酶法利用的原理是，在340nm波長下每分鐘NADH的吸光度下降的速度與鈉離子濃度成正比，由此測算出鈉離子的濃度大小。但是，該方法中的試劑穩定性較差，影響檢測結果。此外還有一種酶法是基於半乳糖苷酶在鈉離子的促進下，使0-硝基酚-β-D-吡喃糖苷半乳糖分解，生成產物0-硝基酚在405nm波長下的吸光度變化率與鈉離子濃度成正比，但是這種酶法由於0-硝基酚-β -D-吡喃糖苷半乳糖穩定性較差，使檢測結果同樣會出現誤差。鑑於上述原因，現有技術有利用比濁法對鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應生成的懸濁液進行吸光度檢測，從而計算出鈉離子的濃度。但是，鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應時間過長，無法準確判斷反應終點，因此會使結果出現誤差。此外，鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應生的小顆粒沉澱還易聚合成大小不同的結晶體，無法得到均勻的乳濁度，也會使檢測結果出現較大誤差。
發明內容
有鑑於此，本發明的目的在於提供一種檢測鈉離子的方法和試劑盒，使得該試劑盒和方法能夠提高檢測鈉離子的準確度。為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案一種檢測鈉離子的方法，將瓊脂膠、阿拉伯膠或聚乙二醇20000中的一種與6-氫氧化銻鉀組成混合液，在PH7. 2-7. 5的緩衝體系中，與待測樣品和複合醇反應得到6-氫氧銻酸鈉懸濁液，然後在630nm波長下檢測吸光度，與經上述相同處理的標準溶液比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，所述複合醇由95%的乙醇和5%的其他醇組成。其中，樣品鈉離子濃度(mmol/L)=標準溶液濃度XA#/Afe，所述待測樣品、混合液和複合醇的體積比為1 15 10。本發明所述混合液中瓊脂膠的濃度為200_300mg/L，所述混合液中阿拉伯膠的濃度為1000-1500mg/L，所述混合液中聚乙二醇20000的濃度為5_10g/L，優選為瓊脂膠；所述混合液中6-氫氧化銻鉀的濃度為12-15g/L，所述其他醇為乙二醇、異丙醇或兩者任意比例的混合物。在現有技術中，鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應生成6-氫氧銻酸鈉小顆粒沉澱，但反應時間過長，無法準確判斷反應終點，因此會使結果出現誤差。本發明在鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應同時加入了複合醇，可使反應加速，快速達到反應終點，析出全部沉澱顆粒，由此實現快速測定和準確測定。除上述問題外，6-氫氧化銻鈉小顆粒沉澱容易聚合成晶體，同樣影響檢測的準確度。而本發明在鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應前，將瓊脂膠、阿拉伯膠或聚乙二醇20000提前與6-氫氧化銻鉀混合，這三者均能提高和改善固體或液體物料分散性能，它們能夠促使小顆粒沉澱均勻分散於溶液中，形成穩定、均一的懸濁液，使其在檢測吸光度時更加準確，避免懸濁液不均一而帶來的誤差。同時，本發明所述複合醇也具有衝散聚合的小顆粒沉澱的作用，進一步促進懸濁液呈均勻的乳濁度。本發明所述緩衝體系由80-100mmol/L 的 Tris、20-40mmol/L 的 Tris-HCl、 20-26mmol/L的磷酸氫二鉀和3-5mmol/L的磷酸二氫鉀組成，所述標準溶液由40_60g/L的牛血白蛋白和HOmmo 1/L的疊氮鈉組成。Tris, Tris-HCl、磷酸氫二鉀以及磷酸二氫鉀作為緩衝體系，防止檢測過程中pH 值的較大波動，能夠給檢測樣品提供一個穩定的檢測環境。在標準溶液中，牛血白蛋白能夠給疊氮鈉一個模擬的體內環境，避免在進行吸光度檢測時產生基質效應，影響待測樣品鈉離子濃度的計算。在作為鈉離子標準液的同時，疊氮鈉還可以作為防腐劑，確保牛血白蛋白不易變質。本發明還提供了一種檢測鈉離子的試劑盒，包括200-300mg/L 的瓊脂膠、1000-1500mg/L 的阿拉伯膠、5-10g/L 的聚乙二醇 20000 三者中的一種以及12-15g/L的6-氫氧化銻鉀和複合醇，所述複合醇由95%的乙醇和5%的其他醇組成。
其中，所述其他醇為乙二醇、異丙醇或兩者任意比例的混合物。此外，本發明所述試劑盒還包括80-100mmol/L 的 Tris、20_40mmol/L 的 Tris-HCl、20-26mmol/L 的磷酸氫二鉀、 3-5mmol/L的磷酸二氫鉀和標準溶液，所述標準溶液由40_60g/L的牛血白蛋白和HOmmol/ L的疊氮鈉組成。本發明試劑盒可以配製成雙試劑，即由200_300mg/L的瓊脂膠、1000_1500mg/L的阿拉伯膠、5-10g/L 的聚乙二醇 20000 三者中的一種、80-100mmol/L 的 Tris、20-40mmol/L 的Tris-HCl、20-26mmol/L的磷酸氫二鉀、3-5mmol/L的磷酸二氫鉀以及12_15g/L的6-氫氧化銻鉀組成的試劑1，由複合醇組成的試劑2，由40-60g/L的牛血白蛋白和140mmol/L的疊氮鈉組成的標準溶液。本發明所述方法檢測鈉離子濃度具有較高準確度和精密度，試驗結果顯示，本發明所述方法檢測的結果在質控品的士2SD範圍內。此外，本發明對同一樣品進行重複性檢測，各結果之間的標準差率(變異係數)為1. 48%，小於標準的3%。上述試驗結果表明本發明具有很高的準確度和精密度。由以上技術方案可知，本發明所述方法能夠促使鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應生成的小顆粒沉澱快速析出，並且避免小顆粒沉澱的聚合，使溶液形成均一的懸濁液，提高檢測鈉離子濃度的準確性，同時實現快速檢測，可以廣泛應用於鈉離子濃度檢測。
具體實施例方式本發明公開了一種檢測鈉離子的方法和試劑盒，本領域技術人員可以借鑑本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明所述方法及試劑盒已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和範圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。以下就本發明所提供的一種檢測鈉離子的試劑盒和方法做進一步說明。實施例1 本發明所述方法將瓊脂膠和6-氫氧化銻鉀組成混合液(瓊脂膠濃度為250mg/L，6_氫氧化銻鉀濃度為 14g/L)，在 pH7. 2 的 100mmol/L Tris、30mmol/L Tris-HCU6mmol/L 磷酸氫二鉀、 4mmol/L的磷酸二氫鉀緩衝體系中，與待測樣品和複合醇(95%的乙醇和5%的乙二醇)按體積比，待測樣品混合液複合醇=1 15 10的比例反應，得到的懸濁液在630nm 波長下檢測吸光度A#，然後與經上述相同處理的標準溶液(由50g/L的牛血白蛋白和 140mmol/L的疊氮鈉組成)的Afe比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，公式為樣品鈉離子濃度 (mmol/L)=標準溶液濃度(HOmmol/DXA^/A^。實施例2 本發明所述方法將阿拉伯膠和6-氫氧化銻鉀組成混合液(阿拉伯膠濃度為1250mg/L，6_氫氧化銻鉀濃度為 15g/L)，在 pH7. 3 的 90mmol/L Tris、40mmol/L Tris-HCl、23mmol/L 磷酸氫二鉀、3mmol/L的磷酸二氫鉀緩衝體系中，與待測樣品和複合醇(95%的乙醇和5%的異丙醇)按體積比，待測樣品混合液複合醇=1 15 10的比例反應，得到的懸濁液在 630nm波長下檢測吸光度A#，然後與經上述相同處理的標準溶液(由60g/L的牛血白蛋白和140mmol/L的疊氮鈉組成)的Afe比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，公式為樣品鈉離子濃度(mmol/L)=標準溶液濃度(140πιπιΟ1/ ΧΑ#/Αβ。實施例3 本發明所述方法將聚乙二醇20000和6-氫氧化銻鉀組成混合液(聚乙二醇20000濃度為7. 5g/L， 6-氫氧化銻鉀濃度為 12g/L)，在 pH7. 5 的 80mmol/L Tris、20mmol/LTris-HCl、20mmol/L 磷酸氫二鉀、5mmol/L的磷酸二氫鉀緩衝體系中，與待測樣品和複合醇(95%的乙醇、3%的乙二醇和2%的異丙醇)按體積比，待測樣品混合液複合醇=1 15 10的比例反應， 得到的懸濁液在630nm波長下檢測吸光度A#，然後與經上述相同處理的標準溶液(由40g/ L的牛血白蛋白和140mmol/L的疊氮鈉組成)的Afe比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，公式為樣品鈉離子濃度(mmol/L)=標準溶液濃度(140mmOl/L) XA#/Afe。實施例4 本發明所述方法的準確度分析試驗儀器CB171半自動生化分析儀；檢測樣品中生北控質控血清(鈉離子靶值為132. 18mmol/L, X ±2SO為 128.6-137. Ommo1/L)；CB171半自動生化分析儀設定溫度為37°C，反應方法為終點法，測定波長為 630nm，反應方向為正反應，延遲時間為2s，測量時間為2s。採用實施例1至實施例3的檢測方法對上述質控血清分別進行檢測。具體結果為 實施例1檢測結果為132. 7mmol/L ；實施例2檢測結果為134. 2mmol/L ；實施例3檢測結果為134.0mmol/L。3次檢測結果表明，本發明所述方法的檢測結果位於質控血清的士2SD範圍內，具有較高準確性。實施例5 本發明所述方法的精密度分析試驗儀器CB171半自動生化分析儀；檢測樣品任意一血清樣品；CB171半自動生化分析儀設定溫度為37°C，反應方法為終點法，測定波長為 630nm，反應方向為正反應，延遲時間為2s，測量時間為2s。採用實施例1至實施例3的檢測方法分別對同一待測樣品重複檢測10次，其中， 實施例1檢測方法的檢測結果見表1。表1檢測樣品鈉離子濃度(10次)及標準差率(變異係數)
權利要求
1.一種檢測鈉離子的方法，其特徵在於，瓊脂膠、阿拉伯膠或聚乙二醇20000中的一種與6-氫氧化銻鉀組成混合液，在pH7. 2-7. 5的緩衝體系中，與待測樣品和複合醇反應得到 6-氫氧銻酸鈉懸濁液，然後在630nm波長下檢測吸光度，與經上述相同處理的標準溶液比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，所述複合醇由95%的乙醇和5%的其他醇組成。
2.根據權利要求1所述方法，其特徵在於，所述待測樣品、混合液和複合醇的體積比為 1 15 10。
3.根據權利要求1所述方法，其特徵在於，所述混合液中瓊脂膠的濃度為200-300mg/L0
4.根據權利要求1所述方法，其特徵在於，所述混合液中阿拉伯膠的濃度為 1000-1500mg/L。
5.根據權利要求1所述方法，其特徵在於，所述混合液中聚乙二醇20000的濃度為 5-10g/L。
6.根據權利要求1所述方法，其特徵在於，所述混合液中6-氫氧化銻鉀的濃度為 12-15g/L。
7.根據權利要求1所述方法，其特徵在於，所述其他醇為乙二醇、異丙醇或兩者任意比例的混合物。
8.根據權利要求1所述方法，其特徵在於，所述標準溶液由40-60g/L的牛血白蛋白和 140mmol/L的疊氮鈉組成。
9.根據權利要求1所述方法，其特徵在於，所述緩衝體系由80-100mmol/L的Tris、 20-40mmol/L 的 Tris-HCl、20-26mmol/L 的磷酸氫二鉀和 3_5mmol/L 的磷酸二氫鉀組成。
10.一種檢測鈉離子的試劑盒，其特徵在於，包括200-300mg/L的瓊脂膠、1000-1500mg/L的阿拉伯膠、5_10g/L的聚乙二醇20000三者中的一種以及12-15g/L的6-氫氧化銻鉀和複合醇，所述複合醇由95%的乙醇和5%的其他醇組成。
11.根據權利要求10所述試劑盒，其特徵在於，所述其他醇為乙二醇、異丙醇或兩者任意比例的混合物。
12.根據權利要求10或11所述試劑盒，其特徵在於，還包括80-100mmol/L 的 Tris、20_40mmol/L 的 Tris-HCl、20-26mmol/L 的磷酸氫二鉀、 3-5mmol/L的磷酸二氫鉀和標準溶液，所述標準溶液由40_60g/L的牛血白蛋白和HOmmol/ L的疊氮鈉組成。
全文摘要
本發明涉及生物化學領域，公開了一種檢測鈉離子的方法和試劑盒。該方法將瓊脂膠、阿拉伯膠或聚乙二醇20000中的一種與6-氫氧化銻鉀組成混合液，在pH7.2-7.5緩衝體系中，與待測樣品和複合醇反應得到6-氫氧銻酸鈉懸濁液，然後在630nm波長下檢測吸光度，與經上述相同處理的標準溶液比濁，計算待測樣品鈉離子濃度。本發明所述試劑盒包括200-300mg/L瓊脂膠、1000-1500mg/L阿拉伯膠、5-10g/L聚乙二醇20000中的一種及12-15g/L 6-氫氧化銻鉀和複合醇。本發明所述方法能使Na+與6-氫氧化銻鉀反應快速沉澱，且避免沉澱聚合，提高檢測的準確性，可廣泛用於鈉離子濃度檢測。
文檔編號G01N21/31GK102297844SQ201110132290
公開日2011年12月28日 申請日期2011年5月20日 優先權日2011年5月20日
發明者董理 申請人:董理