蝗蟲微孢子雛蝗株系及其應用的製作方法

2023-06-11 01:49:11 1

蝗蟲微孢子雛蝗株系及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種雛蝗微孢子株系及其應用。本發明所提供的雛蝗微孢子株係為雛蝗微孢子（Paranosema?acridophagus）PA-201301，它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的藏編號為CGMCC?No.7757。本發明所提供的雛蝗微孢子（Paranosema?acridophagus）PA-201301CGMCC?No.7757具有如下優點：對狹翅雛蝗、小翅雛蝗、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗、東亞飛蝗和雲斑車蝗的致死效果明顯大於現有的蝗蟲微孢子的致死效果；抗逆性，特別是抗紫外線能力強，孢子溶液經紫外線照射1h，孢子萌發率仍然超過80%；另外，本發明的微孢子生產技術簡單，繁殖寄主容易得到，勻漿後，離心力6000g左右分離即可，有助於大量生產和應用。
【專利說明】蝗蟲微孢子雛蝗株系及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種蝗蟲微孢子新株系及其應用，特別涉及一種蝗蟲微孢子雛蝗株系及其在防治蝗蟲中的應用
【背景技術】
[0002]蝗災是世界性的自然災害，對農業生產造成了很大的影響。多年來，蝗災曾發生過大面積的頻繁暴發，包括土蝗、飛蝗、稻蝗、棉蝗和竹蝗。僅飛蝗和土蝗每年分別發生2500萬畝次和7000萬畝次，嚴重影響了農牧業生產。
[0003]從20世紀70年代美國採用黑蝗等作為繁殖宿主來培養蝗蟲微孢子，隨後國內外都陸續開展了蝗蟲微孢子的研究。但是現示範應用的蝗蟲微孢子是從美國引進的，屬於外來物種，應用後有一定生態風險；此外，現有的蝗蟲微孢子株系抗逆性較差，特別是抗高溫和紫外線能力弱。因此有必要篩選出適用於本土使用且對蝗蟲等效果好，抗紫外等能力強的株系，能顯著提高防治蝗蟲效果且防效穩定。

【發明內容】

[0004]本發明的目的是提供一種雛蝗微孢子株系及其應用。
[0005]本發明所提供的幢蟲微孢子雛幢株系(Paranosema acridophagus (Locustae))具體簡稱為雛幢微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301,是從野外感病狹翅雛蟲皇(Chorthippus dubius Zub)中分離篩選得到的，已於2013年6月19日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所)，保藏`登記號為CGMCC N0.7757。
[0006]所述雛幢微抱子(Paranosemaacridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757在如下任一中的應用也屬於本發明的保護範圍:
[0007](I)防治蝗蟲；
[0008](II)製備蝗蟲防治劑。
[0009]在本發明中，所述蝗蟲具體可為狹翅雛蝗、小翅雛蝗、飛蝗(如東亞飛蝗)、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗和雲斑車蝗中的至少一種。
[0010]本發明的再一個目的是提供一種蝗蟲防治劑。
[0011]本發明所提供的蝗蟲防治劑，其活性成分為所述雛蝗微孢子(Paranosemaacridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0012]在本發明中，所述蝗蟲防治劑具體為如下(a)或(b):
[0013](a)由所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757、水和蝗蟲引誘劑，按照0.4±0.02億孢子:1±0.1mL: 30±5 μ g (如0.4億孢子:ImL: 30 μ g)的比例混合而成的蝗蟲防治劑I ;
[0014](b)由所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757、粒徑為1.5-2mm的大麥麩皮和蝗蟲引誘劑，按照0.4±0.02億孢子:10±0.8g: 30±5μ g(如0.4億孢子:IOg: 30 μ g)的比例混合而成的蝗蟲防治劑2。
[0015]其中，所述蝗蟲引誘劑為環己醇。
[0016]在本發明中，作為所述蝗蟲引誘劑的環己醇具體為百靈威科技有限公司產品，其產品目錄號為CAS: 108-93-0。
[0017]在本發明中，所述蝗蟲具體可為狹翅雛蝗、小翅雛蝗、飛蝗(如東亞飛蝗)、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗和雲斑車蝗中的至少一種。
[0018]本發明的還一個目的是提供一種製備所述蝗蟲防治劑的活性成分的方法。
[0019]本發明所提供的製備所述蝗蟲防治劑的活性成分的方法，具體可包括如下步驟:
[0020](I)將所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus (Locustae))PA-20130ICGMCCN0.7757接種於蝗蟲，接種後正常飼喂，直至所述蝗蟲死亡；
[0021](2)從死亡蟲體中分離得到所述雛幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757，即為所述蝗蟲防治劑的活性成分。
[0022]在上述方法中，步驟(I)中，所述「將所述雛幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757接種於蝗蟲」的接種量為2 X IO4孢子(如接種20 μ L濃度為I X IO6孢子/mL的孢子液)；所述蝗蟲具體可為4-5齡期的蝗蟲，更加具體的所述蝗蟲可為4-5齡期的狹翅雛蝗、小翅雛蝗、東亞飛蝗、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗和雲斑車蝗中的至少一種。
[0023]在上述方法中，步驟(I)中，所述飼餵的條件為:溫度26_35°C，相對溼度60_70%，光照時間12小時/天。
[0024]在上述方法中，步驟(I)中，所述飼餵為飼餵禾本科植物葉片，如玉米葉片等。
[0025]在上述方法中，步驟(3)中，所述「從死亡蟲體中分離得到所述雛蝗微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757」 具體可通過如下方法實現:將所述死亡蟲體的腹部勻漿(如放入勻漿器內勻漿)，用40-60目的濾網過濾(如用40-60目的醫用尼龍紗網過濾)，用6000g-8000g的離心力離心12分鐘，取沉澱，即為所述雛蝗微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0026]本發明的又一個目的是提供一種蝗蟲防治方法。
[0027]本發明所提供的蝗蟲防治方法，是使用所述蝗蟲防治劑對蝗蟲進行防治。
[0028]在所述方法中，當採用所述蝗蟲防治劑I對蝗蟲進行防治時，所述蝗蟲防治劑I的用量為:每畝植物施用10-12.5mL (如12.5mL)所述蝗蟲防治劑I。
[0029]在所述方法中，當採用所述蝗蟲防治劑2對蝗蟲進行防治時，所述蝗蟲防治劑2的用量為:每畝防治區施用100-125g (如125g)所述蝗蟲防治劑2。
[0030]在上述方法中，所述蝗蟲可為狹翅雛蝗、小翅雛蝗、寬須蟻蝗、短星翅蝗、白邊痂蝗、東亞飛蝗和雲斑車蝗中的至少一種。
[0031 ] 在本發明中，所述防治區為草地、林地或農田等。
[0032]與現有技術相比，本發明所提供的雛幢微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757具有如下優點:對蝗蟲的致死效果明顯大於現有的蝗蟲微孢子株系的致死效果；抗逆性，特別是抗紫外線能力強，孢子溶液經紫外線照射lh，孢子萌發率仍然超過80% ;另外，本發明的微孢子生產技術簡單，繁殖寄主容易得到，勻漿後，離心力6000g左右分離即可，有助於大量生產和應用。本發明的社會及經濟效益如下:1、經濟效益:在本發明的基礎上可生廣出聞效無害有機農藥，減少殘留，提供綠色食品。本發明有利於加快微孢子防蝗生物製劑的開發應用進程，完善應用技術，在近幾年內可開發出適於大面積推廣應用的純生物製劑並實現產業化生產，能產生巨大經濟效益。2、生態效益:本發明所提供的防蝗微孢子製劑屬於純天然生物製劑，害蟲對其不易產生抗藥性，對害蟲天敵沒有殺傷作用，對高等動物無害，不汙染環境，能保護生態平衡，具有較好的生態效益。3、社會效益:本發明能大大促進防蝗微孢子製劑的開發應用和草原植被恢復，促進地區畜牧業的發展和農牧民生活水平的提高，具有很大的社會效益。在貧瘠地區建立微孢子防蝗示範區，可幫助農牧民脫貧致富，其社會效益十分顯著。並解決一部分人員的就業問題，對維護社會的穩定和經濟發展，提高當地人民生活水平，具有巨大的社會和經濟效益。
[0033]保藏說明
[0034]微孢子:雛蝗微孢子
[0035]拉丁名:(Paranosemaacridophagus)
[0036]菌株編號:PA-201301 [0037]保藏機構:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0038]保藏機構簡稱:CGMCC
[0039]地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號
[0040]保藏日期:2013年06月19日
[0041]保藏中心登記入冊編號:CGMCC N0.7757
【專利附圖】

【附圖說明】
[0042]圖1 為雛蝗微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757 的培育
工藝流程圖。
[0043]圖 2 為雛蝗微孢子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757 在不同
寄主中的增殖效果比較。
[0044]圖3為不同微孢子株系對不同蝗蟲的毒力測定結果。其中，「雛蝗微孢子」即為雛蟲皇微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.77570
[0045]圖4為不同微孢子株系對不同蝗蟲的感染能力測定結果。其中，「雛蝗微孢子」即為雛幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0046]圖5為不同微孢子株系的紫外穩定性檢測結果。其中，「雛蝗微孢子」即為雛蝗微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757。
[0047]圖6為蝗蟲防治劑的對蝗蟲的草地防治效果。
【具體實施方式】
[0048]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0049]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0050]下述實施例中所涉及的幾種現有微孢子如下:
[0051]幢蟲微孢子蟲東亞飛幢株系(Nosema 1custae),簡稱飛幢微孢子:從感病的東亞飛蝗體內分離純化得到(王麗英，曹春.我國蝗蟲微孢子蟲超顯微結構與致病特性研究.草地學報，1994年01期)。[0052]家蠶微孢子蟲(Nosema bombycis):從感病的家蠶體內分離純化得到(周成，潘國慶，萬永繼等.家蠶微孢子蟲N.bombycis分離純化方法的優化.蠶學通訊，2002年01期)。
[0053]實施例1、雛幢微孢子(Paranosema acridophagus) PA-201301的獲得及鑑定
[0054]一、雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)株系 PA-201301 的獲得
[0055]將從青藏高原野外採集到的感病的雛蝗等進行解剖，檢測被微孢子感染情況，將腸道放入勻漿器內勻漿，用醫用尼龍紗網(40-60目)過濾，用6000g-8000g的離心力離心12分鐘，得到不同微孢子株系。將其中一株分離自狹翅雛蝗的微孢子株系記為PA-201301株系O
[0056]二、雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)株系 PA-201301 的鑑定
[0057]在微孢子的系統分類上，孢子的形態、大小、病原性、極絲圈數和極絲角等特徵是鑑別的主要特徵，本發明的發明人比較測試了步驟一獲得的PA-201301株系與當前的不同種(株)微孢子(見表I)形態和大小、病原性、極絲圈數和極絲角等特性，
[0058]以確定步驟一獲得的PA-201301株系是否是一個新的株系。
[0059]1、孢子形態和大小的測定
[0060]使用通用的顯微測微計測定分析如下:
[0061]表I不同種(株)微孢子形態和大小
[0062]
【權利要求】
1.雛幢微孢子(Paranosemaacridophagus)PA_201301,它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的藏編號為CGMCC N0.7757。
2.權利要求1 所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757在如下任一中的應用: (I)防治蝗蟲； (II)製備蝗蟲防治劑。
3.—種蝗蟲防治劑，其特徵在於:所述蝗蟲防治劑的活性成分為權利要求1所述的雛蟲皇微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.77570
4.根據權利要求3所述的蝗蟲防治劑，其特徵在於:所述蝗蟲防治劑為如下(a)或(b): Ca)由權利要求1 所述的雛幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCCN0.7757、水和蝗蟲引誘劑，按照0.4±0.02億孢子:1±0.ImL: 30±5μ g的比例混合而成的蝗蟲防治劑I ; (b)由權利要求1 所述的雛幢微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCCN0.7757、粒徑為1.5-2mm的大麥麩皮和蝗蟲引誘劑，按照0.4 + 0.02億孢子:10±0.8g: 30±5μ g的比例混合而成的蝗蟲防治劑2。
5.根據權利要求4所述的`蝗蟲防治劑，其特徵在於:所述蝗蟲引誘劑為環己醇。
6.製備權利要求3-5中任一所述蝗蟲防治劑的活性成分的方法，包括如下步驟: (1)將權利要求1所述雛幢微抱子(Paranosema acridophagus)PA-201301CGMCCN0.7757接種於蝗蟲，接種後正常飼喂，直至所述蝗蟲死亡； (2)從死亡蟲體中分離得到權利要求1所述雛幢微孢子(Paranosemaacridophagus)PA-201301CGMCC N0.7757，即為權利要求3或4所述蝗蟲防治劑的活性成分。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於:步驟(I)中，將權利要求1所述雛蝗微抱子(Paranosema acridophagus) PA-201301CGMCC N0.7757 接種於所述幢蟲的接種量為2X IO4孢子;或 所述蝗蟲為4-5齡期蝗蟲。
8.根據權利要求6或7所述的方法，其特徵在於:步驟(I)中，所述飼餵的條件為:溫度26-35°C，相對溼度60-70%，光照時間12小時/天。
9.一種蝗蟲防治方法，為使用權利要求3-5中任一所述蝗蟲防治劑對蝗蟲進行防治。
10.根據權利要求9所述的方法，其特徵在於:在所述方法中，當採用所述蝗蟲防治劑I對蝗蟲進行防治時，所述蝗蟲防治劑I的用量為:每畝防治區施用10-12.5mL所述蝗蟲防治劑I ;或 在所述方法中，當採用所述蝗蟲防治劑2對蝗蟲進行防治時，所述蝗蟲防治劑2的用量為:每畝防治區施用100-125g所述蝗蟲防治劑2。
【文檔編號】A01P7/04GK103451100SQ201310381475
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月28日 優先權日:2013年8月28日
【發明者】張英霞 申請人:河北晟普生物科技有限公司