基於a-m模型的中藥新藥發現策略和藥物及其組合的製作方法

2023-07-01 10:32:31 1

專利名稱：基於a-m模型的中藥新藥發現策略和藥物及其組合的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥新藥研發策略和基於該方法發現的藥物組份及組合物，這些藥物涉及調節胃腸道機能和抗真菌活性，具體講就是基於藥物吸收一代謝模型從中藥方劑金鈴子散、艾葉散和草藥博落回中篩選出有效部位的方法與用途。極大的降低了中藥藥效物質基礎研究的難度，提高了中藥新藥發現的效率。
背景技術：
藥物研究是一個複雜的過程，可以有多種不同方法、技術和策略，但都有一個共同的目標，即開發新的治療疾病的藥物。數千年的臨床實踐已經證實了中藥(包括複方)在臨床上的確切療效，但是由於其化學成份組成複雜性，中藥藥效物質基礎的研究一直以米難獲突破。目前主流的中藥物質基礎研究方法仍以中藥化學、天然藥物化學方法為主，根據成分極性分段對有效成分進行提取、分離，採用現代藥理模型進行體內外活性篩選，對活性物質進行體內實驗，這種方法已經不能高效、便利的發現新藥和新先導化合物。對於中藥新藥開發的難點在於適合中藥自身特點的研發思路和策略，尋找新的研究方法和策略比具體的新技術和方案意義重大影響更加深遠。新藥設計是指先導化合物的發現和優化的過程。新藥的設計是整個新藥創製流程中的關鍵步驟。是否能夠找到合適的候選藥物，則決定著該藥後期開發的風險和最終能否上市註冊為新藥。經典的天然產物設計，尤其是一些中藥有效成分或已上市的天然藥物是通過系統的提取和分離，將組分或單體富集，建立合適的體外活性評價模型系統進行評價， 通過藥物化學技術對其進一步結構改造，以求獲得更高活性、更低毒性的藥物候選物。這一方法曾經推動我國中藥現代化的進程。近百年來國內外科學家從中藥中先後分離報導了幾千個單體化合物，並對其中許多成分進行過生物活性研究，其中一些活性成分已被廣泛用於臨床。在傳統的藥物沒計流程中，對於候選化合物，最關心的往往是對於特定靶點的活性以及對於相關靶點的選擇性。至於這個化合物能否在腸道中溶解，能否通過腸道的黏膜細胞進入循環系統，在肝臟的代謝和轉化情況，能否通過血液循環到達有效部位等問題，人們極少關注。此外，化合物是否能夠在體內對靶點保持足夠長的藥效而不被肝臟和腎臟降解或排出也是值得關注的問題。組分中藥是以中醫藥理論為基礎，遵循方劑的配伍理論與原則，有效組分、有效部位或者提取物配伍而成的現代中藥；是運用植物化學、現代分析技術等，將各種中藥材的有效組分、協同有效組分、有效部位或者定向提取物等都進行分析、研究，基本搞清楚物質基礎，然後按照中醫辨證施治的原則，進行有效成分的組合和配方，成為現代新藥。除少數局部用藥物外，藥物要發生藥效作用，大多數口服藥物要通過胃腸道吸收進入血液循環達到靶組織部位發揮調節作用。因此，中藥藥效作用物質基礎首先是能通被腸道吸收進入血液循環系統的成分，而且這些成分還必須有較好的藥代特性。前期研究表明，中藥成分複雜，單一一味中藥成分多達千種，複方配伍之後成分就更多更加複雜；但是這些成分中能被吸收入血的佔少數，吸收入血的成分中有一些也不具備合適的藥代特性而發揮藥效作用。所以，基於A-M模型的中藥藥效物質基礎研究大大降低了研究的難度艾葉為菊科植物艾的乾燥葉，能散寒止痛，溫經止血。用於少腹冷痛，經寒不調，溫經上血；廣泛用於婦科溫經上痛和止血。艾葉散(《聖惠》卷七十九)主治產後膿血痢久不愈，不思飲食，漸加羸瘦。艾葉散組成艾葉1兩(微炒)，黃柏3分(塗蜜微炙，銼)，赤芍藥3分，黃連3分(去須，微炒)，地榆3分(挫)，甘草半兩(炙微赤，銼)，乾薑半兩(炮裂，銼)，阿膠3分(搗碎，炒令黃燥)。金鈴散(《素問病機氣宜保命集》卷中金鈴子散，金鈴子，玄胡各1兩)疏肝洩熱， 行氣止痛。治肝氣不舒，氣鬱化火，致患心腹脅肋諸痛，臨床上主要用於治療肝鬱化火諸痛證的代表方劑。博落回(Macleaya cordata)是罌粟科博落回屬的一種多年生草本植物，全草帶根入藥，有大毒，可治跌打損傷、惡瘡和蜂螫傷等。由於含有多種生物鹼，博落回提取物還可用為農藥和抗菌消炎藥。上述三者(艾葉散、金鈴子散和博落回)的應用一直以來都是停留在傳統的藥物形態(直接藥材入藥)，藥效物質基礎不清楚，臨床療效尚無大規模的詢證醫學的證據來支持。現代科技的發展要求我們來挖掘和豐富傳統中藥的內涵，三氧化二砷(俗稱砒霜)治療急性早幼粒細胞性白血病(APL)分子機制和臨床循證醫學研究便是一個很好的例證。因此，建立適合於中藥新藥的基於A-M模型的新藥發現策略對於指導新藥發現十分必要，同時在基本搞清藥效物質基礎上進行中藥新藥開發還有利於傳統中藥被國際社會接受、進入國際市場。為了有效的進行中藥藥效物質基礎研究加快中藥新藥開發，本發明人提供了一種新的適合於複雜體系中藥的研究策略利方法，並基於這一方法進行了部分方劑和草藥的研本發明人還發明了針對胃腸機能調節和抗真菌作用的中藥(包括中藥組合物)、 草藥(包括草藥組合物)及有效組份(包括有效組份組合物)。

發明內容
技術問題本發明目的在於提供一種適合中藥新藥發現的方法和策略；以及基於該方法的針對胃腸機能調節和抗真菌作用的中藥(包括中藥組合物)、草藥(包括草藥組合物)及有效組份(包括有效組份組合物)。技術方案本發明提供一種適合中藥新藥發現的方法和策略。其特徵在於基於藥物的吸收和代謝(A-M)從中藥藥效物質基礎出發，以此為突破點和基礎指導中藥新藥開發和設計新藥。簡述如下1.製備A-M模型，並對模型的性能進行驗證2.將傳統中藥方劑或者適合的給藥形式(包括中藥提取物)加到A-M系統中3.分析和定量A-M系統中被吸收和代謝組分4.對吸收和代謝組分進行與方劑功能主治相關聯的活性確認和比較
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5.確定方劑的功能主治相關活性成分的種類及種類間的數量關係、即確定藥效物質群6.以藥效物質群為目標，採用現代化學定向提取、分離純化或其它方法製備7.通過工業化製備藥效物質群後，進行候選藥物新藥系統研究。本發明提供了系列方劑和中草藥在基於上述方法篩選和發現的新中藥組合物 (包括中藥有效組分及組合物、中藥有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)，驗證了基於A-M模型的中藥新藥發現策略和方法的可行性。詳述如下1.按照常規方法製備外翻腸囊和肝微粒體肝微粒體的制各①健康Wistar大鼠禁食Mh，脫頸處死；②打開開腹腔，細塑料管插入肝門靜脈，通過蠕動泵將冰冷的KCL溶液灌洗肝臟至土黃色；③然後摘除肝臟，加入磷酸緩衝液攪勻，勻漿；取肝勻漿組織於4°C，IOOOOXg離心20min，取上清液，105000 Xg離心兩次，分別為60min和20min，分別得沉澱，為微粒體。 將微粒體板重懸於磷酸緩衝液中，分裝於-80°C保存，測定肝微粒體蛋白含量備用。腸外翻球囊的製備參照大鼠經典腸外翻實驗[WilsonT H,Wiseman G. The use of sacs of everted small intestine for the study of the transference of substances from the mucosal to the serosal surface [J]. J Physiol, 1954,123(1) :116]大鼠，實驗前 12h 禁食，自由飲水。脫頸處死，打開腹腔，迅速取出約IOcm長的十二指腸、空腸、迴腸、7cm結腸各段。放入冰Tyrode液中，衝洗，剝離腸繫膜和脂肪。將腸管翻轉，結紮腸段下端，使之形成囊狀腸管。2. A-M體系構建和藥物加入向上述腸囊內注入2mL特定濃度肝微粒體的Tyrode液，作為代謝體系。將其放入已有Tyrode液的麥氏浴槽中，實驗過程中保持37°C恆溫，並向浴槽中通入95% O2/5% CO2. 平衡5min後，注入配製好的不同濃度的藥液(艾葉散、金鈴子散和博落回提取物)50mL，在給藥後不同時間點從腸囊內取樣。腸管球囊作為離體腸吸收體系。3. A-M體系中藥物吸收和代謝組分分析取樣在4°C條件下離心或者其他適當方法處理，HPLC-LC分析吸收成分和代謝成分的種類和數量，並確定主要相關組分的藥代參數。4.對吸收和代謝組分進行與方劑功能主治相關聯的活性確認和比較艾葉散的主要功能散寒止痛、溫經止血，主治少腹冷痛、經寒不調，為婦科痛證之要藥。金鈴子散是治療肝鬱化火諸痛證的代表方劑，疏肝洩熱，活血止痛。用於胸腹脅肋疼痛，也可用於痛經和疝痛以及胃及十二指腸潰瘍、慢性胃炎、慢性肝炎、膽囊炎等屬肝鬱化火者。博落回功能散瘀、祛風、解毒、止痛、殺蟲。臨床曾用於各種致病微生物所致的感染。 艾葉散和金鈴子散在臨床上均有用於胃腸疾病的治療，因此確定調節胃腸機能作為其主要目標活性、進行離體和在體試驗篩選和確認藥效組分群(或部位)。觀察主要艾葉散和金鈴子散有效組分群對離體大鼠胃條平滑肌自發性收縮活動以及賢上腺素、去甲賢上腺素引起離體鼠胃條平滑肌舒張的影響，同時還觀察各藥物對5-羥色胺引起大鼠胃條收縮的影響。 大鼠禁食48h，用鐵棒猛擊枕骨致昏迷後，立即剖開腹腔，取出胃立即放入克氏液中，沿胃小彎剪開胃腔，去除胃黏膜，並在胃底部橫向剪下胃肌條，將胃肌條放入37攝氏度的氏液中並通以C0295 %和5 % 02，穩定20min後，用二道生理記錄儀記錄正常值後，分別加入不同劑量的上述組分，記錄腸道平滑肌在加入藥物後收縮活動。
觀察艾葉散和金鈴子散主要有效組分群對小鼠鎮痛和抗炎作用。。抗炎實驗小鼠按體重隨機分成正常對照組，艾葉散和金鈴子散有效組分群大、中、 小3個劑量組(相當於6. 8g生藥/kg，3. 4g生藥/kg和1. 7g生藥/kg)，各組每日經口給予相應的藥物一次(0.2mL/10g)，空白組給予相同劑量的生理鹽水。連續給藥3天。並於第3 天藥後40min，各鼠由尾靜脈注入0. 5%伊文斯藍0. lml/10g,隨即腹腔內注射0. 6%的HAc 溶液0. lml/10g, 30min後將小鼠脫頸椎處死，腹腔內注入生理鹽水5mL，輕揉數下，剪開腹部，用吸管吸出洗滌液，3000r. min離心15min，取上清液於590nm處測定吸光度，以OD值高低表示抗炎作用的強弱。鎮痛實驗動物分組與給藥與上相同，在對小鼠腹腔內注射0. 6 %的HAc溶液 0. lml/10g以後，觀察20分鐘內各組小鼠出現扭體反應的次數，以腹腔內凹，伸展後肢，臀部抬高為陽性指標。並計算藥物對扭體反應得抑制率。
權利要求
1.基於藥物吸收-代謝(A-M)模型的適合中藥新藥發現和新藥設計的方法和策略。
2.基於權利要求1所述的方法的川楝子提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、延胡索提取物(有效組分及組合物、 有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、金鈴子散提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)之一新藥或者新藥組合物。
3.基於權利要求1所述的方法的艾葉提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、黃柏提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、黃連提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、地榆提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、赤芍提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)艾葉散提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)之一新藥或者新藥組合物。
4.基於權利要求1所述的方法的博落回提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
5.用於預防和治療胃腸疾病的組合物，其中所含權利要求2和3任何一項或幾項所述的活性提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
6.用於預防和治療真菌感染相關疾病的組合物，其中所含權利要求4所述任一的活性提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
全文摘要
本發明涉及一種中藥新藥研發策略和基於該方法發現的藥物組份及組合物，這些藥物涉及調節胃腸道機能和抗真菌活性，具體講就是基於藥物吸收一代謝模型從中藥方劑金鈴子散、艾葉散和中草藥博落回中篩選出有效部位的方法與用途。基於本發明的中藥新藥具有藥效物質基礎基本明確的特點，因此質量控制就有針對性很，能被國際市場廣泛接受。
文檔編號A61P31/10GK102445513SQ201110282220
公開日2012年5月9日 申請日期2011年9月22日 優先權日2011年9月22日
發明者成龍 申請人:成龍