臨床檢驗凝血酶原時間(pt)測定體外診斷試劑盒的製作方法
2023-06-27 18:04:01
專利名稱：臨床檢驗凝血酶原時間(pt)測定體外診斷試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及體外診斷試劑盒，特別是一種臨床檢驗凝血酶原時間(PT)測定體外診斷試劑盒。
背景技術：
凝血實驗對於臨床各科的疾病診斷具有很大的意義，除了對出血性疾病的篩選與診斷外，還用於對各種血栓性疾病與血栓前狀態的檢查和預測；彌散性血管內凝血(DIC)的實驗診斷以及對各種抗凝治療患者的用藥指導和預後估計等。血栓與止血不僅涉及基礎醫學，且與多個臨床學科(包括血液科、呼吸消化科、心血管科、神經科、婦產科、普通外科等)的疾病密切相關1)所有手術前檢查外科手術、骨科手術、婦科手術等；檢查病人出凝血機能，以免術中發生危險。2)監測抗凝及溶栓治療如換瓣手術後、肝素治療、口服抗凝劑、華法令、香豆素等，減少臨床治療出血發生率。3)彌散性血管內凝血診斷。4)先天及後天性凝血因子缺乏。5)纖維蛋白原缺乏所致的出血傾向。6)動脈粥樣硬化。7)中醫活血化瘀的診療研究。總之，在血液病、糖尿病、高脂血症、心腦血管病、外科手術治療等領域的研究、診斷與治療方面，血栓與止血檢驗均有重要意義。
傳統的出血時間測定採用Duke氏法、IVY氏法和出血時間測定器法。Duke氏法雖操作簡單，但穿刺深度、寬度難以標準化，且受穿刺部位毛細血管分布及血管收縮程度的影響致使實驗的敏感性很差，不能達到診斷要求。文獻記載，血小板低於3×109/L的患者陽性率僅為42％，vWD患者陽性率為32％。IVY氏法雖較Duke氏法敏感，但操作繁瑣，又是損傷性的，且切口難以標準化，也不易推廣。出血時間測定器法的靈敏度比前兩者高，可操作複雜、費時，也不適合常規使用。凝血時間測定常規採用的玻片法、毛細血管法，操作也較簡單，但都過於粗糙，重複性及敏感性較差，血友病漏檢率高達90％，對臨床難以提供可信的結果；而通常使用的試管法，也只是檢查內在凝血系統某些因子的過篩試驗，敏感性、準確性均比較差，僅能作為凝血障礙性疾病初篩時參考。此法對抗凝物質的監測效果較好，但對凝血物質缺乏的測定比較差。以前用於測定個別因子缺乏的一些糾正試驗以及所謂的凝血活酶生成試驗，因操作繁瑣，敏感性也不高而趨於淘汰。而凝血酶原時間(PT)測定方法自創建以來，迄今為止仍然是檢查外源性凝血因子及相關抑制物的重要篩選試驗，是用來證實先天性或獲得性纖維蛋白原、凝血酶原和凝血因子V、VII、X的缺陷或抑制物存在的重要項目，同時用於監測口服抗凝劑的用量和療效的主要手段。
凝血酶原時間(PT)主要由肝臟合成的凝血因子I、II、V、VII、X的水平決定，在肝病中的作用尤為重要。急性肝炎PT異常率10％～15％，慢性肝炎為15％～51％，肝硬化為71％，重症肝炎為90％，是反映肝臟合成功能、儲備功能、病變嚴重程度及預後的一個非常重要的指標。PT與血小板計數常用於評價進行肝活檢與外科手術患者的出血傾向，如血小板＜50×109/L，PT延長超過正常4s是肝活檢、外科手術包括肝移植的禁忌症。
由於實驗室使用PT試劑質量上的不同，使得同一個患者在不同醫院測定的結果相差懸殊，造成檢測結果的不一致，影響對疾病的正確、及時診斷。因此，PT試劑的質量成了獲得準確結果及診斷的關鍵。同時，由於試劑復溶後的穩定性差，增加浪費，導致醫療單位成本增加，患者負擔加重。所以研製一種安全、可靠、準確、穩定的PT試劑，無疑將對臨床診斷疾病有重要作用。
發明內容
本發明的目的是為了提供一種檢測凝血因子缺乏症和監控口服抗凝劑治療，且安全、可靠、重複性好、穩定性佳的體外診斷試劑。
為解決上述技術問題，本發明是這樣實現的一種臨床檢驗凝血酶原時間(PT)測定體外診斷試劑盒，其特徵在於它是由凝血活酶、緩衝液體系組成。
緩衝液體系由下述原料製成甘氨酸2～8％ 聚乙二醇-80000.4～1.0％氯化鈣8～20mM 氯化鈉 85～110mMTAPSO 20～45mMNaN3 1‰該緩衝液體系中甘氨酸的最適含量應選為5％。
該緩衝液體系中聚乙二醇-8000的最適含量應選為0.6％。
該緩衝液體系中氯化鈣的最適濃度應選為13.7mM。
該緩衝液體系中氯化鈉的最適濃度應選為100mM。
該緩衝液體系中TAPSO的最適濃度應選為30mM。
該凝血活酶的來源是兔腦粉。
本發明相比現有技術具有如下優點本發明通過兔腦粉提取凝血活酶，並用獨特的緩衝液體系調節和穩定凝血活酶活性，與市售產品相比，在重複性和穩定性方面較好。經多家醫院臨床試驗結果證實，本產品確實對臨床疾病診斷起到了相當重要的作用。
具體實施例方式本發明的設計是由凝血活酶、緩衝液體系、使用說明書組成。
該緩衝液體系是由下述含量的原料製成甘氨酸2～8％ 聚乙二醇-80000.4～1.0％氯化鈣8～20mM 氯化鈉 85～110mMTAPSO 20～45mMNaN3 1‰其中，該緩衝液體系中甘氨酸的最適含量應選為5％，聚乙二醇-8000的最適含量應選為0.6％，氯化鈣的最適濃度應選為13.7mM，氯化鈉的最適濃度應選為100mM，TAPSO的最適濃度應選為30mM。本發明還將結合實例作進一步詳述實施例一與市售PT試劑重複性比較將1g用丙酮脫水的兔腦粉加入20ml提取液中(含硫酸鋇0.6g、0.63％氯化鈉、0.25％曲拉通X-100)，45℃水浴振蕩15min，提取混合液再以2500rpm，離心10分鐘，以提取凝血活酶，提取液經過分裝，冷凍乾燥。緩衝液體系由下述含量的原料製成2～8％甘氨酸、0.4～1.0％聚乙二醇-8000、8～20mM CaCl2、85～110mM NaCl、20～45mM TAPSO、1‰ NaN3。
使用時，凝血活酶凍幹品用一定體積的緩衝液復溶，同一正常質控血漿(PT值10～14秒)凝血酶原時間(PT)在太平洋TS400C血凝儀上測得。(表1)表1表明，本發明所講的PT試劑與市售試劑相比，變異係數(CV)較小，重複性較好。
表1
實施例二與市售PT試劑穩定性比較如例一所述凝血活酶凍幹品用一定體積的緩衝液復溶，然後將復溶後試劑置於2～8℃保存。每天吸取一定體積的試劑，在太平洋TS400C血凝儀上測定同一正常質控血漿(PT值10～14秒)，市售試劑同步進行測定。(結果見表2)表2表明，本發明的PT試劑在復溶後的七天內測定結果穩定，到第八天時才變化，而市售試劑在第二天時就開始變化，這一結果對臨床檢驗科來說，尤其是中小醫院來說非常重要，因為它可以減少浪費，從而降低成本。
表2
綜上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並非用來限定本發明的實施範圍。即凡依本發明申請專利範圍的內容所作的等效變化與修飾，都應為本發明的技術範疇。
權利要求
1.一種臨床檢驗凝血酶原時間(PT)測定體外診斷試劑盒，其特徵在於它是由凝血活酶、緩衝液體系組成。
2.按權利要求1所說的試劑盒，其特徵在於緩衝液體系由下述原料製成甘氨酸2～8％ 聚乙二醇-8000 0.4～1.0％氯化鈣8～20mM氯化鈉85～110mMTAPSO 20～45 mM NaN31‰
3.按權利要求2所說的試劑盒，其特徵在於緩衝液體系中甘氨酸的但最適含量應選為5％。
4.按權利要求2所說的試劑盒，其特徵在於緩衝液體系中聚乙二醇-8000的最適含量應選為0.6％。
5.按權利要求2所說的試劑盒，其特徵在於緩衝液體系中氯化鈣的最適濃度應選為13.7mM。
6.按權利要求2所說的試劑盒，其特徵在於緩衝液體系中氯化鈉的最適濃度應選為100mM。
7.按權利要求2所說的試劑盒，其特徵在於緩衝液體系中TAPSO的最適濃度應選為30mM。
8.按權利要求1所說的試劑盒，其特徵在於凝血活酶的來源是兔腦粉。
全文摘要
本發明涉及一種臨床檢驗凝血酶原時間(PT)測定體外診斷試劑盒。它是由凝血活酶、緩衝液體系組成，用於凝血因子缺乏的篩選試驗和口服抗凝劑治療的監控。其優點是安全簡便、重複性好、穩定性佳，為臨床診斷治療提供可靠的實驗數據，降低成本和減輕患者負擔，提高血栓與止血基礎研究的效率和水平。
文檔編號G01N33/50GK1952169SQ20051003062
公開日2007年4月25日 申請日期2005年10月18日 優先權日2005年10月18日
發明者謝永華, 朱美萍 申請人:上海太陽生物技術有限公司