一種葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒的製備方法
2023-06-29 06:53:21 2
專利名稱：一種葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種對腫瘤細胞具有明顯靶向作用，粒徑可控、穩定性較 好的、可用作靶向藥物載體的葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒的製備方法。
背景技術：
抗腫瘤藥物往往選擇性不高，在殺傷腫瘤細胞的同時也可能殺死機體 正常細胞，毒副作用較大。葉酸受體是腫瘤選擇性藥物輸送的特異性靶點， 在多種腫瘤細胞(如卵巢癌、結腸直腸癌、肺癌、腎細胞癌等)膜表面的 活性和數量明顯高於一般正常細胞。由於受體與其配體的結合具有特異性、 選擇性、親合力強等特點，利用配體作為藥物載體或與載體偶聯，通過受 體介導作用，可增加藥物在病灶局部的濃度，提高療效，降低毒副作用， 達到靶向治療的目的。因此，作為葉酸受體的配體，葉酸在腫瘤治療及預 防中越來越顯示出其應用價值。殼聚糖是一種帶正電的天然多糖，本身具有無毒、無剌激性、無致敏 性、無致突變的性質，且有良好的生物相容性和生物降解性。將殼聚糖及 其衍生物製備成納米微球或微粒，作為藥物傳遞和控釋載體，具有藥物包 封率高、穩定性強和釋藥時間長等優點，可有效避免藥物濃度的劇烈變化 引起的副作用和治療效果不理想等問題，近年來在緩釋給藥系統中得到了 越來越廣泛的應用。目前，將葉酸分子偶聯到藥物載體上的方法，多是將葉酸製備成葉酸活性酯或者使用大量有機溶劑如二甲基亞碸作為液相，來進行反應。有機 溶劑在人體內不能正常代謝，有一定毒害作用。通過將殼聚糖親水改性， 直接在水溶液中與葉酸偶聯即可避免有機溶劑的使用。發明內容本發明的目的是提供一種葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒的製備方 法，葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒可用作包裹蛋白類藥物的腫瘤靶向載體。本發明是這樣來實現的，其特徵在於將羥丙基殼聚糖配製成濃度為2.0mg/ml的水溶液，以0.22pm濾紙過濾，加入等體積120)ig/mi的葉酸溶 液，持續攪拌條件下加熱至7(TC，避光反應70分鐘，產物冷卻至室溫，透 析24小時，透析過程中每隔2小時取透析液，於紫外分光光度計上測定遊 離葉酸的含量，監測透析效果，透析後產物冷凍乾燥，得到淡黃色葉酸偶 聯羥丙基殼聚糖固體。將葉酸偶聯羥丙基殼聚糖配製成濃度分別為0.8、 1.0、 1..5、 2.0mg/ml的水溶液，調節pH於5-6之間，將多聚磷酸鈉配製成濃度 分別為0.4、 0.8、 1.0mg/ml的水溶液，在持續磁力攪拌下，向葉酸偶聯羥丙 基殼聚糖水溶液中緩慢滴加多聚磷酸鈉溶液，待反應液黃色消退微顯乳光 為止。本發明的技術效果是反應條件溫和，生產工藝簡單，易於工業化生產，得到的葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒對腫瘤細胞具有明顯靶向作用， 粒徑可控、可生物降解，無毒無害，可用於作為蛋白質類藥物的靶向緩釋 載體。
圖1為實施例1製備的葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒的透射電鏡圖； 圖2為實施例2製備的葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒的透射電鏡圖。
具體實施方式
本發明以脫乙醯度大於90%的殼聚糖為原料，在鹼性條件下使其與過量 環氧丙烷發生反應，生成水溶性的羥丙基殼聚糖。將羥丙基殼聚糖配製成濃度為2.0mg/ml的水溶液，以0.22pm濾紙過濾，加入等體積120昭/ml的 葉酸溶液，持續攪拌條件下加熱至70。C，避光反應70分鐘，產物冷卻至室 溫，透析24小時，透析過程中每隔2小時取透析液，於紫外分光光度計上 測定游離葉酸的含量，監測透析效果，透析後產物冷凍乾燥，得到淡黃色 葉酸偶聯羥丙基殼聚糖。量取5ml的1.0mg/ml葉酸偶聯羥丙基殼聚糖水溶 液於三口燒瓶中，調節pH於5-6之間，在持續磁力攪拌條件下，緩慢滴加 0.8mg/ml的多聚磷酸鈉溶液，滴加速度為20-40滴/min，待溶液黃色消退 微顯乳光時停止滴加。由圖1的透射電鏡照片可以看出，該葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒 形狀呈現較規則的球形，且粒徑在140nm左右。 實施例2葉酸偶聯羥丙基殼聚糖的製備同實施例1 。量取5ml的2.0mg/ml葉酸 偶聯羥丙基殼聚糖水溶液於三口燒瓶中，調節pH於5-6之間，在持續磁力 攪拌條件下，緩慢滴加0.8mg/m的多聚磷酸鈉溶液，滴加速度為20-40滴 /min，待溶液黃色消退微顯乳光時停止滴加。由圖2的透射電鏡照片可以看出，該葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒 呈現較規則的球形，且粒徑在360nm左右。實施例2中微粒粒徑比實施例 1中的粒徑有所增大，這主要是由於反應物葉酸偶聯羥丙基殼聚糖濃度增大 造成的。
權利要求
1、一種葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒的製備方法，其特徵在於將羥丙基殼聚糖配製成濃度為2.0mg/ml的水溶液，以0.22μm濾紙過濾，加入等體積120μg/ml的葉酸溶液，持續攪拌條件下加熱至70℃，避光反應70分鐘，產物冷卻至室溫，透析24小時，透析過程中每隔2小時取透析液，於紫外分光光度計上測定游離葉酸的含量，監測透析效果，透析後產物冷凍乾燥，得到淡黃色葉酸偶聯羥丙基殼聚糖固體，將葉酸偶聯羥丙基殼聚糖配製成濃度分別為0.8、1.0、1.5、2.0mg/ml的水溶液，調節pH於5-6之間，將多聚磷酸鈉配製成濃度分別為0.4、0.8、1.0mg/ml的水溶液，在持續磁力攪拌下，向葉酸偶聯羥丙基殼聚糖水溶液中緩慢滴加多聚磷酸鈉溶液，待反應液黃色消退微顯乳光為止。
全文摘要
一種葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒及其製備方法，其製備與法為將羥丙基殼聚糖水溶液與等體積葉酸溶液混合，70℃下避光充分反應；產物透析24小時，透析後產物冷凍乾燥即得到葉酸偶聯羥丙基殼聚糖淡黃色固體；將葉酸偶聯羥丙基殼聚糖水溶液的pH調節至5-6，滴加多聚磷酸鈉溶液，待溶液黃色消退微顯乳光時停止滴加，即得到納米微粒。製備的葉酸偶聯羥丙基殼聚糖納米微粒對腫瘤細胞具有明顯的靶向作用，且粒徑可控、可生物降解，無毒無害，方法溫和，可用於作為蛋白質類藥物的靶向緩釋載體。
文檔編號C08B37/08GK101235102SQ200810046900
公開日2008年8月6日 申請日期2008年2月18日 優先權日2008年2月18日
發明者尚曉嫻, 宇 謝 申請人:南昌航空大學