一種甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥的製作方法

2023-05-30 00:44:26

本發明涉及農業病蟲害防治領域，具體是一種高效甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥。

背景技術：

用作殺蟲劑的昆蟲病毒主要有屬於杆狀病毒科的核型多角體病毒、顆粒體病毒等。早在19世紀末就已開始了利用昆蟲病毒防治防害的研究。據nancy介紹，早在1892年，德國人gehren就利用昆蟲npv防治舞毒蛾（lymantriamonacha）。迄今世界上已有多種昆蟲杆狀病毒殺蟲劑註冊、商品化生產，並用於農林害蟲的防治。但杆狀病毒在實際應用中最突出的缺陷是殺蟲速度比較緩慢、宿主單一，但與bt不同的是它不易產生抗性，因而具有及重要的應用前景，構建杆狀病毒株，或添加生物、化學物質，擬增強杆狀病毒的毒力和提高殺蟲速度，是這一研究領域的重要課題。昆蟲病毒中npv感染性增效成分最早是由tanada在美洲粘蟲顆粒體病毒上發現的。tanada及其同事採用粘蟲顆粒體病毒和粘蟲核型多角體病毒（punpv）混合感染美洲粘蟲，結果兩種病毒的混合感染效果優於兩種病毒單獨感染，幼蟲對混合感染的敏感性比單一病毒感染高10倍以上，80℃熱失活的gv混合感染後仍對粘蟲核型多角體病毒有增效作用，而熱失活的粘蟲核型多角體病毒（punpv）並不影響pugv的毒力，他們認為pugv中存在增效因子，因此引起了人們的關注。王曉容等發現，用芹菜夜蛾核型多角體病毒和菜粉蝶顆粒體病毒的混合懸液感染3齡期菜粉蝶幼蟲，可顯示出良好的增效作用，菜粉蝶顆粒體病毒和芹菜夜蛾核型多角體病毒的混合懸液的毒力倍數分別為單劑的600倍和400倍以上。兩種病毒不同濃度混合懸液的lt50分別比芹菜夜蛾核型多角體病毒和菜粉蝶顆粒體病毒單劑縮短1.10～2.16d和0.40～1.93d。證明兩種病毒聯合作用能明顯提高殺蟲效果，縮短幼蟲存活時間。郭慧芳等測定了多種病毒組合對斜紋夜蛾和甜菜夜蛾的聯合增效作用，結果表明，八字地老虎顆粒體病毒、銀錠夜蛾質型多角體病毒可明顯提高斜紋夜蛾核型多角體病毒對斜紋夜蛾的殺蟲速度。

甘藍夜蛾核型多角體病毒（mbnpv）是甘藍夜蛾的一種主要病原微生物，1960年首次在日本發現，國內蔡秀玉等（1978）初次報導，俄羅斯和法國利用mbnpv防治甘藍夜蛾均獲得成效，並製成商品製劑用於生產實踐。東北農業大學於1982年在哈爾濱市郊菜地甘藍夜蛾死蟲體中分離出mbnpv多株，經多年篩選測定，明確其殺蟲毒力，作為微生物殺蟲劑有很大發展潛力。

甘藍夜蛾核型多角體病毒（mbnpv）是環境中普遍存在的一種病毒，對環境友好，對多種鱗翅目害蟲有顯著地感染至死亡作用，但是倘若單一使用，它的殺蟲速度與其他杆狀病毒一樣比較緩慢，宿主範圍仍較窄。

本發明以甘藍夜蛾核型多角體病毒（mbnpv）為材料與苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒等其他非同源病毒複合，研究其增效作用，以拓展其殺蟲範圍，提高其殺蟲速度，發明成果可以為高效、生態防治甘藍夜蛾等鱗翅目害蟲提供理論依據。本發明研究具有重要的經濟意義和社會意義，必將產生較大的生態效應、社會效應和經濟效益。

技術實現要素：

本發明為了解決單一使用甘藍夜蛾核型多角體病毒（mbnpv）時，它的殺蟲速度緩慢、宿主範圍窄的問題，而提供了一種以甘藍夜蛾核型多角體病毒（mbnpv）為材料與苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒等其他非同源病毒複合，研究其增效作用，以拓展其殺蟲範圍、提高其殺蟲速度，發明成果可以為高效、生態防治甘藍夜蛾等鱗翅目害蟲，保護農林作物。

本發明是採用如下技術方案實現的：一種甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥，其特徵在於：先從甘藍夜蛾死蟲中分離甘藍夜蛾核型多角體病毒株，飼餵活體增值，分離純化，並與苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒等其它非同源性病毒加工處理，不同條件下接種測定，帥選出有利於擴大甘藍夜蛾核型多角體病毒殺蟲範圍和殺蟲速度的增效因子，並獲得高效甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥。

高效甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥的工藝流程，其特徵在於：（甘藍夜蛾核型多角體病毒＋增效病毒及其他增效因子）→處理→接種→重組或複合病毒→分離→活體試驗→篩選→接種→重組或複合病毒→分離→（樣品＋其它因子）＋活體試驗→篩選純化→防效試驗→篩選→→→→甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥。

防治效果：

複合型體病毒是由甘藍夜蛾核型多角體病毒（mbnpv）與苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒（acnpv）按0.5∶1複合而成的。為了掌握其對甘藍夜蛾的毒殺效果,用蒸餾水將其稀釋成2.0×103、2.0×104、2.0×105、2.0×106、2.0×107pib/ml五個所需的濃度進行測試,甘藍夜蛾核型多角體病毒複合劑處理甘藍夜蛾2齡幼蟲後第2天致死相對死亡率結果見下表：

結果表明：單一的甘藍夜蛾核型多角體病毒對殺滅甘藍夜蛾2齡幼蟲較緩慢，宿主範圍窄；甘藍夜蛾核型多角體病毒（mbnpv）與苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒等其他非同源病毒複合後，殺蟲範圍增大，效果增強，甘藍夜蛾對複合劑較敏感，濃度在2.0×106時，殺蟲效果最好，殺滅率在85%以上。

本發明的創新是，在防治農林害蟲的過程中，能淘汰劇毒農藥，有利於環保，是一個推廣無公害農業的新思路，也是突破了常規防治措施的新思路，達到了環保的新要求；具有重要的經濟意義和社會意義，必將產生較大的生態效應、社會效應和經濟效益；具有一定的新穎性。

具體實施方式

先從甘藍夜蛾死蟲中分離甘藍夜蛾核型多角體病毒株，飼餵活體增值，分離純化，並與苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒等其它非同源性病毒加工處理，不同條件下接種測定，帥選出有利於擴大甘藍夜蛾核型多角體病毒殺蟲範圍和殺蟲速度的增效因子，並獲得高效甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥。

高效甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥的工藝流程，其特徵在於：（甘藍夜蛾核型多角體病毒＋增效病毒及其他增效因子）→處理→接種→重組或複合病毒→分離→活體試驗→篩選→接種→重組或複合病毒→分離→（樣品＋其它因子）＋活體試驗→篩選純化→防效試驗→篩選→→→→甘藍夜蛾核型多角體病毒複合增效型生物農藥。