固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法
2023-06-07 09:58:41 1
專利名稱：固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法
技術領域：
本發明涉及固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，屬於微生物發酵技術領域。
背景技術：
冬蟲夏草屬於子囊菌綱，麥角菌科(C7arici/7iiac￡^e)，蟲草屬(Cbr辦ce/zs)真菌寄生在蝙蝠蛾科幼蟲上的結合體，是一種珍貴的藥用真菌。近年來，經醫學研究證明，冬蟲夏草具有調節人體新陳代謝和免疫系統功能的作用，能用於許多人體系統的疾病，對腎功能衰竭，久咳虛喘，陽痿遺精等都有很好的療效。冬蟲夏草內含多種有效成分，如多糖、核苷、蟲草素、甾醇、多肽類等。由於生長地理的特殊要求，以及嚴格的寄生性，造成其資源極其稀少，兼之採收的不易以及野生環境不斷遭到破壞，更因需求的擴大及連年的濫採濫挖，冬蟲夏草現已處於極度瀕危的境地，極大的限制了他們的應用，而人工培養可彌補現已存在的問題。目前，冬蟲夏草的人工培養方式，主要為固體栽培和液體深層發酵，然而，有關通過固體發酵培養的人工培養方式卻鮮有報導。自上世紀70年代開始，已有很多研究機構開展冬蟲夏草人工栽培的研究，然而，40多年過去了，冬蟲夏草人工栽培技術仍停留在實驗室階段，至今未能實現大規模商品化。中國專利CN201010214791.X (冬蟲夏草菌絲體和子實體的栽培方法)中公開了一種冬蟲夏草菌絲體和子實體的栽培方法，該固體栽培技術生長周期長、受環境條件影響大，規模化生產難度大。液體深層發酵具有生產效率高，勞動強度小等優點，有些企業已經把深層發酵模式生產冬蟲夏草發展為規模化，但是，液體深層發酵設備投資大，技術難控制，菌絲產率低，相對成本很高。固體發酵培養所需要的培養基單純，生產成本低，基質前處理較液體發酵少，對生產設備要求不高，操作簡單；固體發酵能用較小的反應器進行發酵，單位體積的產量高於液體發酵，生產效率高；另外，固體發酵後的培養基處理簡單。因此，採用固態發酵的方式為蟲草菌種的培養以及冬蟲夏草生理活性物質的生成開闢了一條新途徑。通過專利資料庫檢索，極少涉及固體發酵培養冬蟲夏草的專利，其中 CN02111379.3 (一種冬蟲夏草菌粉及其生產工藝)採用了固體發酵的方法，但是，其生產冬蟲夏草菌粉所使用的培養基基質及發酵方法明顯存在不足。CN1650686採用固體培養方式， 是在玻璃瓶中培養北冬蟲夏草，規模化生產受到影響。
發明內容
本發明的目的在於，克服現有技術存在的不足，提供一種生產周期短，效率高，成本低，質量好，且在真菌培養袋中培養，操作簡單，便於規模化生產的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法。本發明的技術方案是固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，包括如下步驟
A、製備冬蟲夏草一級斜面種子先配好的斜面PDA培養基，經滅菌後再將菌種接種到PDA固體斜面中，在一定溫度下靜置培養，獲得一級斜面種子；
B、製備冬蟲夏草二級三角瓶液態種子先配好搖瓶液態種子培養基，混合後滅菌，冷卻後接入A步驟一級斜面種子，搖床培養一定時間，獲得二級三角瓶液態種子；
C、真菌培養袋固態培養固態培養基以麥麩為主基質，先按上述B步驟中的液態種子培養基配方，將蔗糖、酵母浸粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1在水中溶解，再添加麥麩，然後混勻；再將B步驟的二級液態種子接種到裝有已滅菌幹麥麩的真菌培養袋中，混勻，最後將培養袋置於一定溫度的培養箱中培養若干天；
D、收集冬蟲夏草菌絲將發酵好的物品直接置於烘箱中烘乾，然後用攪拌機粉碎，經篩子分離去除培養基，獲得冬蟲夏草菌絲。在上述技術方案基礎上進一步的技術方案是
所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其斜面PDA培養基的配方包括土豆浸汁 15 25%，蔗糖15 25 g/L，瓊脂1. 5 2. 3% (w/v)，pH=5. 8 6. 5 ；滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中，在22 30 °C下靜置培養110 130 h。所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其斜面PDA培養基的配方包括土豆浸汁20%，蔗糖20 g/L，瓊脂1.8% (w/v)，pH=6 ；滅菌後再將菌種接種到PDA固體斜面中， 在25 °C下靜置培養120 h。所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其斜面PDA培養基的配方包括土豆浸汁15%，蔗糖15 g/L，瓊脂1.5% (w/v)，pH=5. 8 ；滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中，在22 °C下靜置培養110 h。所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其斜面PDA培養基的配方包括土豆浸汁25%，蔗糖25 g/L，瓊脂2. 3% (w/v),pH=6. 5 ；滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中， 在30 °C下靜置培養130 h。所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其搖瓶液態種子培養基配方包括 蔗糖1 5%，酵母浸粉1 3 %，磷酸二氫鉀0. 11 0. 18 %，七水硫酸鎂0. 11 0. 18 %,維生素B1O. 0005 0. 002 %，水200 300 Ml ；滅菌溫度為110 120 °C，滅菌時間為 25 35分鐘；所述搖床培養時間為96 125 h。所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其搖瓶液態種子培養基配方包括蔗糖4%，酵母浸粉2%，磷酸二氫鉀0. 15%，七水硫酸鎂0. 15%，維生素B1O. 001%，水250 Ml; 滅菌溫度為115 °C，滅菌時間為30分鐘；所述搖床培養時間為115 h。所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其搖瓶液態種子培養基配方包括蔗糖5%，酵母浸粉3%，磷酸二氫鉀0. 18%，七水硫酸鎂0. 18%，維生素B1O. 002%，水300 Ml; 滅菌溫度為120 °C，滅菌時間為35分鐘；所述搖床培養時間為125 h。所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其真菌培養袋固態培養，是將二級液態種子接種到已滅菌幹麩皮的真菌培養袋中，在22 28 ！的培養箱中培養12 14天。所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其收集冬蟲夏草菌絲步驟，是將發酵好的樣品直接置於40 60 °C的烘箱中烘乾，然後將烘乾的冬蟲夏草固態培養基用攪拌機粉碎，經40 60目篩子分離去除培養基，獲得冬蟲夏草菌絲。本發明的主要優點如下
(1)本發明採用以麥麩為主要原料生產冬蟲夏草菌絲，相對於液體深層培養的方法，價格更低廉，且單位體積的產量高於液體發酵，具有生產成本低。(2)本發明採用真菌培養袋，固態發酵的方式，相對於利用玻璃瓶、罐頭瓶培養冬蟲夏草，操作更簡單，更容易控制，且對設備要求低，可以有效的用於規模化生產、應用，這也是其他研究者沒有用過的。(3)本發明生產冬蟲夏草基質前處理簡單，培養過程中需要控制的因素少，操作簡單，因水份少，可以有效減少雜菌汙染。(4)本發明生產冬蟲夏草的周期短，整個固體發酵培養過程只需要半個月左右，大大縮短了培養周期。(5)本發明生產冬蟲夏草後培養基經粉碎等簡單處理後，可以作為飼料添加劑再利用。
具體實施例方式結合實施例對本發明作進一步說明如下
實施例1 固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，包括如下步驟
A、製備冬蟲夏草一級斜面種子先配好的斜面PDA培養基，經滅菌後再將菌種接種到 PDA固體斜面中，在一定溫度下靜置培養，獲得一級斜面種子；
B、製備冬蟲夏草二級三角瓶液態種子先配好搖瓶液態種子培養基，混合後滅菌，冷卻後接入A步驟一級斜面種子，搖床培養一定時間，獲得二級三角瓶液態種子；
C、真菌培養袋固態培養固態培養基以麥麩為主基質，先按上述B步驟中的液態種子培養基配方，將蔗糖、酵母浸粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1在水中溶解，再添加麥麩，然後混勻；再將B步驟的二級液態種子接種到裝有已滅菌幹麥麩的真菌培養袋中，混勻，最後將培養袋置於一定溫度的培養箱中培養若干天；
D、收集冬蟲夏草菌絲將發酵好的物品直接置於烘箱中烘乾，然後用攪拌機粉碎，經篩子分離去除培養基，獲得冬蟲夏草菌絲。所述的斜面PDA培養基的配方選值範圍為土豆浸汁15 25%，蔗糖15 25 g/ L，瓊脂1. 5 2. 3% (w/v)，pH=5. 8 6. 5 ；滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中，在 22 30 °C下靜置培養110 130 h。所述的搖瓶液態種子培養基配方選值範圍為蔗糖 1 5%，酵母浸粉1 3 %，磷酸二氫鉀0. 11 0. 18 %，七水硫酸鎂0. 11 0. 18 %，維生素B1O. 0005 0. 002 %，水200 300 Ml ；滅菌溫度為110 120 °C，滅菌時間為25 35分鐘；所述搖床培養時間為96 125 h。本實施例所述的斜面PDA培養基的配方土豆浸汁20%，蔗糖20 g/L，瓊脂1.8% (w/v)，pH=6 ；滅菌後再將菌種接種到PDA固體斜面中， 在25 °C下靜置培養120 h。所述的搖瓶液態種子培養基配方蔗糖4%，酵母浸粉2%，磷酸二氫鉀0. 15%，七水硫酸鎂0. 15%，維生素B1O. 001%，水250 Ml ；滅菌溫度為115 °C，滅菌時間為30分鐘；所述搖床培養時間為115 h。所述的真菌培養袋固態培養，是將二級液態種子接種到已滅菌幹麩皮的真菌培養袋中，在25°C，還可以選擇22 28 °C的培養箱中培養12 14天。所述的收集冬蟲夏草菌絲步驟，是將發酵好的樣品直接置於45°C，還可以選擇40 60 °C的烘箱中烘乾，然後將烘乾的冬蟲夏草固態培養基用攪拌機粉碎，經40 60目篩子分離去除培養基，獲得冬蟲夏草菌絲。實施例2 與實施例1不同的是，所述的斜面PDA培養基的配方包括土豆浸汁15%，蔗糖15 g/L，瓊脂1.5% (w/v)，pH=5.8 ；滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中，在 22 °C下靜置培養110 h。實施例3 與實施例1不同的是，所述的斜面PDA培養基的配方包括土豆浸汁 25%，蔗糖25 g/L,瓊脂2. 3% (w/v)，pH=6. 5 ；滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中，在 30 °C下靜置培養130 h。實施例4 與實施例1不同的是，所述的搖瓶液態種子培養基配方包括蔗糖5%， 酵母浸粉3%，磷酸二氫鉀0. 18%，七水硫酸鎂0. 18%，維生素B1O. 002%，水300 Ml ；滅菌溫度為120 °C，滅菌時間為35分鐘；所述搖床培養時間為125 h。本發明權利要求保護範圍不限於上述實施例。
權利要求
1.固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，包括如下步驟A、製備冬蟲夏草一級斜面種子先配好的斜面PDA培養基，經滅菌後再將菌種接種到 PDA固體斜面中，在一定溫度下靜置培養，獲得一級斜面種子；B、製備冬蟲夏草二級三角瓶液態種子先配好搖瓶液態種子培養基，混合後滅菌，冷卻後接入A步驟一級斜面種子，搖床培養一定時間，獲得二級三角瓶液態種子；C、真菌培養袋固態培養固態培養基以麥麩為主基質，先按上述B步驟中的液態種子培養基配方，將蔗糖、酵母浸粉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1在水中溶解，再添加麥麩，然後混勻；再將B步驟的二級液態種子接種到裝有已滅菌幹麥麩的真菌培養袋中，混勻，最後將培養袋置於一定溫度的培養箱中培養若干天；D、收集冬蟲夏草菌絲將發酵好的物品直接置於烘箱中烘乾，然後用攪拌機粉碎，經篩子分離去除培養基，獲得冬蟲夏草菌絲。
2.如權利要求1所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，斜面PDA培養基配方包括土豆浸汁15 25%，蔗糖15 25 g/L，瓊脂1. 5 2. 3% (w/v)，pH=5. 8 6. 5 ；滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中，在22 30 °C下靜置培養110 130 h。
3.如權利要求1所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，斜面PDA培養基配方包括土豆浸汁20%，蔗糖20 g/L，瓊脂1.8% (w/v)，pH=6;滅菌後再將菌種接種到 PDA固體斜面中，在25 °C下靜置培養120 h。
4.如權利要求1所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，斜面PDA培養基配方包括土豆浸汁15%，蔗糖15 g/L，瓊脂1.5% (w/v)，pH=5.8;滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中，在22 °C下靜置培養110 h。
5.如權利要求1所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，斜面PDA培養基配方包括土豆浸汁25%，蔗糖25 g/L,瓊脂2. 3% (w/v)，pH=6. 5 ；滅菌後，再將菌種接種到PDA固體斜面中，在30 °C下靜置培養130 h。
6.如權利要求1至5任一權利要求所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，搖瓶液態種子培養基配方包括蔗糖1 5%，酵母浸粉1 3 %，磷酸二氫鉀 0. 11 0. 18 %，七水硫酸鎂 0. 11 0. 18 %，維生素 B1O. 0005 0. 002 %，水 200 300 Ml ；滅菌溫度為110 120 °C，滅菌時間為25 35分鐘；所述搖床培養時間為96 125 h。
7.如權利要求1至5任一權利要求所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，搖瓶液態種子培養基配方包括蔗糖4%，酵母浸粉2%，磷酸二氫鉀0.15%，七水硫酸鎂0. 15%，維生素B1O. 001%，水250 Ml ；滅菌溫度為115 °C,滅菌時間為30分鐘；所述搖床培養時間為115 h。
8.如權利要求1至5任一權利要求所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，搖瓶液態種子培養基配方包括蔗糖5%，酵母浸粉3%，磷酸二氫鉀0.18%，七水硫酸鎂0. 18%，維生素B1O. 002%，水300 Ml ；滅菌溫度為120 V，滅菌時間為35分鐘；所述搖床培養時間為125 h。
9.如權利要求1中所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，所述真菌培養袋固態培養，是將二級液態種子接種到已滅菌幹麩皮的真菌培養袋中，在22 28 0C 的培養箱中培養12 14天。
10.如權利要求書1所述的固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，其特徵在於，所述收集冬蟲夏草菌絲步驟，是將發酵好的樣品直接置於40 60 0C的烘箱中烘乾，然後將烘乾的冬蟲夏草固態培養基用攪拌機粉碎，經40 60目篩子分離去除培養基，獲得冬蟲夏草菌絲。
全文摘要
本發明涉及固態發酵生產冬蟲夏草菌絲的方法，包括如下步驟A、製備冬蟲夏草一級斜面種子；B、製備冬蟲夏草二級三角瓶液態種子；C、真菌培養袋固態培養；D、收集冬蟲夏草菌絲。本發明優點是生產周期短，效率高，成本低，質量好，且在真菌培養袋中培養，操作簡單，利用農副產品培養冬蟲夏草，便於規模化生產。
文檔編號C05G3/00GK102342218SQ201110116928
公開日2012年2月8日 申請日期2011年5月7日 優先權日2011年5月7日
發明者彭楠, 梁運祥, 塗飛, 王玢, 王績, 葛向陽, 趙述淼 申請人:華中農業大學