一種測定普魯卡因青黴素G含量的方法與流程
2023-05-28 13:16:41 1
本發明屬於分析化學領域，具體地，涉及一種測定普魯卡因青黴素G含量的方法，更具體地，涉及牛奶中普魯卡因青黴素G含量的測定方法。
背景技術：
：普魯卡因青黴素G是內醯胺類抗生素，主要用於革蘭氏陽性菌感染，亦用於放線菌及鉤端螺旋體等感染。為了儘量降低藥物在乳品中的殘留，杜絕其對人類健康的危害，所以需要檢測這類化合物的使用。目前，檢測的方法在一定程度上也存在不足之處。對於傳統檢測方法來說，其檢測方法複雜、檢測時間長、靈敏度不高、不易定量、重現性不好，進而導致其應用領域受限。技術實現要素：針對上述缺陷，本發明提供的方法解決了測定待測物(牛奶)中普魯卡因青黴素G的問題。實現了分析待測物(牛奶)中，是否存在有普魯卡因青黴素G的檢測。本發明提供了一種測定普魯卡因青黴素G含量的方法，其特徵在於：採用萃取溶劑超聲萃取待測物中的普魯卡因青黴素G,經淨化基質淨化後，採用超高壓液相色譜-串聯質譜法測定其含量。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、具體檢測方法如下所示：步驟一、於待測物中加入萃取溶劑，混勻，超聲萃取15-60分鐘，離心1-15分鐘；優選超聲萃取0.5-1.5分鐘，離心3-6分鐘。在步驟一中，該混勻、和/或提取、和/或離心的過程可以為一次或多次，優選為2-3次。步驟二、於步驟一處理後的待測物中，加入淨化基質，均質0.5-5分鐘後，離心1-15分鐘；在本步驟二中，取處理後的待測物的總量的50-90％進行淨化的工序。優選均質0.5-1.5分鐘，離心3-6分鐘。步驟三、取上清液，於20-60℃，用保護氣乾燥(如：氮氣等保護氣吹乾等方式)；在本步驟三中，該上清液的取用量為總量的50-90％。步驟四、用溶劑溶解步驟三獲得的乾燥產物，過濾後，採用超高壓液相色譜-串聯質譜法進行化學分析。溶劑的用量，按檢測的需要進行配置，或按濃度比例進行配置。其中，上述步驟一的過程為至少一次；上述步驟二的過程為至少一次。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、步驟一中，上述萃取溶劑為乙腈；每5g待測物中加入20-40ml的萃取溶劑；上述離心的轉速>6000r/min。在本發明中，針對目標物質，乙腈的提取性極佳，遠優於其他萃取劑，且提取率高，試驗的回收率高。同時，乙腈具有沉澱蛋白的作用，在實驗操作中可以除去試驗樣品中的蛋白，滿足目前實驗的需要。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、步驟二中，上述淨化基質選自C18粉、納米級的淨化材料等可實現淨化效果的基質；其中，C18粉具有淨化基質作用的同時，還可以吸附脂肪，且效果好。上述淨化基質的添加量為100-300mg/每10ml處理後的待測物；上述離心的轉速>6000r/min。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、步驟四中，上述溶劑為酸和乙腈的混合液；過濾為過有機相濾膜。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、步驟四中，步驟四中，上述酸選自質量百分比濃度為0.01-1％的甲酸、乙酸、丙酸的水溶液；上述酸和乙腈的體積比為1:0.1-1。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、上述超高壓液相色譜-串聯質譜法中，離子源為電噴霧離子源，正離子模式，多反應檢測；離子源溫度為150℃；毛細管電壓為2.0kV；霧化溫度為400℃；霧化氣流速為800L/h。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、上述超高壓液相色譜-串聯質譜法中，色譜柱選用ACQUITYUPLCBEHC18柱；流動相為含有0.1％甲酸的水溶液-乙腈；上述錐孔電壓和碰撞能量為52V和36eV。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、上述超高壓液相色譜-串聯質譜法中，定性離子對為237.1/100.2和237.1/119.9；定量離子對為237.1/119.996。進一步地，本發明提供的測定普魯卡因青黴素G含量的方法，還具有這樣的特點：即、上述待測物為乳製品；上述待測物優選為牛奶。本發明的作用和效果本發明首次採用了超高效液相色譜—串聯質譜法來實現待測物質(牛奶)中的普魯卡因青黴素G含量的測定。此外，本發明提供的乙腈超聲萃取，C18粉淨化的方法快速，回收率高，操作簡便，準確度和精確度好，對儀器不造成汙染，檢測限低的特點。附圖說明附圖1、普魯卡因青黴素G總離子流圖。具體實施方式實施例一、牛奶中普魯卡因青黴素G殘留量的測定。1.樣品的製備：稱樣品(5g±0.05)於50mL離心管中，加30mL乙腈(根據樣品溶解程度的不同，乙腈的加入量可以為20ml、25ml、35ml、40ml不等，此外，該步驟還可以為少量多次的萃取方案)，混勻，超聲30min(根據樣品溶解程度的不同，該超聲萃取的時間可以為15min、20min、40min、50min、60min不等)，8000r/min離心5min(根據樣品濃度和溶解程度的不同，該高速離心的時間可以為1min、10min、15min不等)。取10ml於另一試管中，加入200mgC18粉(根據脂肪含量的差異，可加入100mg、300mg不等的基質)，漩渦混勻1min(根據基質淨化程度和能力的不同，該均質的時間可以為0.5min、1.5min不等)，後8000r/min離心5min(根據基質加入的量的不同，該高速離心的時間可以為1min、10min、15min不等)。取6ml上清液於羅馬管中，氮氣吹乾。加1mL0.1％甲酸水溶液-乙腈(根據溶解度的不同，該酸和乙腈的體積比為10/90、20/80、30/70、40/60、50/50、60/40、70/30、80/20、90/10不等)溶解乾物，過0.22μm有機相濾膜後，待測定。2.設定儀器參數1)液相色譜儀條件：色譜柱選用ACQUITYUPLCBEHC18柱；流動相為含有0.1％甲酸的水溶液-乙腈；流速為300μL/min；進樣量為5.0μL。流動相梯度洗脫條件為：時間/min0.1％甲酸水溶液/％乙腈/％2.090103.590104.010905.010902)質譜條件：離子源為電噴霧離子源，正離子模式，多反應檢測；離子源溫度為150℃；毛細管電壓為2.0kV；霧化溫度為400℃；霧化氣流速為800L/h。3.定性和定量定性離子對為237.1/100.2和237.1/119.9，定量離子對為237.1/119.996。4.精密度試驗(如下表一所示)表一、精密度數據表5.檢出限根據儀器信噪比，普魯卡因青黴素G的儀器檢出限為2.0μg/kg，在該濃度下儀器信噪比為9.6，定量限為10μg/mL；由圖1可知，在儀器檢出限條件下，符合定性分析要求。6.回收率試驗由表二可知，普魯卡因青黴素G的平均回收率為92.2％,其RSD分別為1.3％。表明該方法回收率符合定量分析要求。表二、普魯卡因青黴素G回收率數據表當前第1頁1 2 3