五氟硫烷基苯基取代的苯甲醯基胍、其製備方法、其作為藥物或診斷試劑的用途以及包含...的製作方法

2023-05-27 23:06:21 2

專利名稱：五氟硫烷基苯基取代的苯甲醯基胍、其製備方法、其作為藥物或診斷試劑的用途以及包含 ...的製作方法
技術領域：
本發明涉及式I的五氟硫烷基苯基取代的苯甲醯基胍及其可藥用鹽 其中各基團的含義如下R1和R1』各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，F，Cl，Br，I，-CN，NR6R7，-O-(CH2)b-(CF2)c-CF3或-(SOd)e-(CH2)f-(CF2)g-CF3；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；d是0、1或2；b、c、e、f和g各自獨立地是0或1；R2和R2』各自獨立地是氫，F，Cl，Br，I，-CN，-SO2CH3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，NR6R7，-O-(CH2)b-(CF2)c-CF3，-(SOh)k-(CH2)l-(CF2)m-CF3，具有1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，具有3、4、5、6、7或8個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替，未取代的或被1、2或3個選自下列基團的基團取代的-(CH2)n-苯基F，Cl，Br，I，-Oo-(CH2)p-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3，或未取代的或被1、2或3個選自下列基團的基團取代的-(CH2)q-雜芳基F，Cl，Br，I，-Or-(CH2)s-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；b和c各自獨立地是0或1；h是0、1或2；k是0或1；l是0、1、2、3或4；m和o各自獨立地是0或1；p是0、1、2或3；n是0、1、2、3或4；r是0或1；s是0、1、2或3；q是0、1、2、3或4；R3是氫，F，Cl，Br，I，-CN，-SO2CH3，具有1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基或-Ot-(CH2)u-CF3；t是0或1；u是0、1、2或3；R4是氫，F，Cl，Br，I，-CN，-SO2CH3，NR6R7，-(SOv)w-(CH2)x-(CF2)y-CF3，-O-(CH2)aa-(CF2)bb-CF3，具有1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基或具有3、4、5、6、7或8個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；v是0、1或2；x是0、1、2、3或4；w、y、aa和bb各自獨立地是0或1；
或R4是-(CH2)cc-苯基，其為未取代的或被1、2或3個選自下列基團的基團取代F，Cl，Br，I，-Odd-(CH2)ee-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；dd是0或1；ee是0、1、2或3；c是0、1、2、3或4；或R4是-(CH2)ff-雜芳基，其為未取代的或被1、2或3個選自下列基團的基團取代F，Cl，Br，I，-Ogg-(CH2)hh-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；gg是0或1；hh是0、1、2或3；ff是0、1、2、3或4；R5是F、Cl、Br、I、CF3、-SO2CH3或-S(O)OCH3；X是直接的鍵、O、NR8、S(O)kk；R8是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，-(CH2)mm-CF3或-SO2CH3kk是0、1或2；mm是0、1、2或3；其中在R1和R1』以及R2和R2』的定義中，-O-(CH2)b-(CF2)c-CF3可以各自獨立地選擇，其中在R1和R1』、R2和R2』以及R4的定義中，NR6R7可以獨立地選擇。
優選的式I化合物及其可藥用鹽，其中各基團的含義如下R1和R1』各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，甲氧基，乙氧基，F，Cl，NR6R7，-O-CH2-CF3或-(SOd)e-(CH2)f-CF3；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；d是0、1或2；
e和f各自獨立地是0或1；R2和R2』各自獨立地是氫，F，Cl，-SO2CH3，-(SOh)k-(CH2)l-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，具有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替，未取代的或被1-2個選自下列基團的基團取代的苯基F，Cl，-Oo-(CH2)p-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3，或未取代的或被1-2個選自下列基團的基團取代的雜芳基F，Cl，-Or-(CH2)s-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；h是0、1或2；k是0或1；l是0、1、2、3或4；o是0或1；p是0、1、2或3；r是0或1；s是0、1、2或3；R3是氫，F，Cl，-SO2CH3，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，甲氧基，乙氧基或-Ot-(CH2)u-CF3；t是0或1；u是0、1、2或3；R4是氫，F，Cl，-SO2CH3，-(SOv)w-(CH2)x-CF3，-O-(CH2)aa-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，甲氧基，乙氧基或具有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替；v是0、1或2；w、x和aa各自獨立地是0或1；或R4是苯基，其為未取代的或被1-2個選自下列基團的基團取代F，Cl，-Odd-(CH2)ee-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；dd和ee各自獨立地是0或1；
或R4是雜芳基，其為未取代的或被1-2個選自下列基團的基團取代F，Cl，-Ogg-(CH2)hh-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；gg和hh各自獨立地是0或1；R5是F、Cl、CF3、-SO2CH3或-S(O)OCH3；X是直接的鍵、O、NR8或S(O)kk；R8是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，-CH2-CF3或-SO2CH3；kk是0、1或2。
特別優選的式I化合物及其可藥用鹽，其中各基團的含義如下R1和R1』各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，甲氧基，乙氧基，F，Cl，NR6R7，-O-CH2-CF3或-(SOd)e-(CH2)f-CF3；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；d是0、1或2；e和f各自獨立地是0或1；R2和R2』各自獨立地是氫，F，Cl，-SO2CH3，-(SOh)k-(CH2)l-CF3，甲基，具有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替，未取代的或被選自下列基團的基團取代的苯基F，Cl，-Oo-(CH2)p-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3，或未取代的或被選自下列基團的基團取代的雜芳基F，Cl，-Or-(CH2)s-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；h是0、1或2；k、l、o、p、r和s各自獨立地是0或1；R3是氫、F、Cl、-SO2CH3、甲基、甲氧基、乙氧基或-Ot-(CH2)u-CF3；t和u各自獨立地是0或1；R4是氫，F，Cl，-SO2CH3，-(SOv)w-(CH2)x-CF3，-Oz-(CH2)aa-CF3，甲基，甲氧基，乙氧基或具有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替；v是0、1或2；w、x、z和aa各自獨立地是0或1；R5是F、Cl或-SO2CH3；X是直接的鍵、O、NR8或S(O)kk；R8是氫、甲基、乙基、-CH2-CF3或-SO2CH3；kk是0、1或2。
更特別優選的式I化合物及其可藥用鹽，其中各基團的含義如下R1和R1』各自獨立地是氫、甲基、F、Cl、-CF3或-O-CH2-CF3；R2和R2』各自獨立地是氫、F、Cl、-SO2CH3、-SO2-CF3、-CF3或甲基；R3是氫、F、Cl或甲基；R4是氫、F、Cl或甲基；R5是-SO2CH3；X是O。
另外，在一個實施方案中，優選的式I化合物為其中R1和R1』被定義為各自獨立地是氫、甲基、F、Cl、-CF3或-O-CH2-CF3的式I化合物，並且特別優選的化合物為其中R1和R1』被定義為各自獨立地是氫或甲基的化合物。
在另一個實施方案中，優選的式I化合物為其中R2和R2』被定義為各自獨立地是氫、F、Cl、-SO2CH3、-SO2CF3、-CF3或甲基的化合物，並且特別優選的化合物為其中R2和R2』被定義為各自獨立地是氫或-SO2CH3的化合物。
在另一個實施方案中，優選的式I化合物為其中R3被定義為氫、F、Cl、-SO2CH3、甲基、-CF3或-O-CH2-CF3的化合物，並且特別優選的化合物為其中R3被定義為氫的化合物。
在另一個實施方案中，優選的式I化合物為其中R4被定義為氫、F、Cl、-SO2CH3、-O-CH2-CF3或甲基的化合物，並且特別優選的化合物為其中R4被定義為氫的化合物。
在另一個實施方案中，優選的式I化合物為其中R5被定義為F、Cl、CF3、-SO2CH3或-S(O)OCH3的化合物，特別為-SO2CH3的化合物。
在另一個實施方案中，優選的式I化合物為其中X為直接的鍵或被定義為O、NR8或S(O)kk，其中R8是氫、甲基、乙基、-CH2-CF3或-SO2CH3，優選為氫或甲基，並且其中kk是0、1或2，優選為0或2的化合物；並且特別優選的式I化合物為其中X被定義為O的化合物。
出現一次以上的基團可以是相同的或不同的並且各自獨立地具有特定的含義。
特別優選的是N-[5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基-苯甲醯基]胍及其可藥用鹽。
如果取代基R1、R1』、R2、R2』、R3、R4或R5含有一個或多個不對稱中心，那麼它們可以各自獨立地具有S和R構型。化合物可以是旋光異構體、非對映異構體、外消旋體或它們任意比例的混合物的形式。
本發明包括式I化合物的所有互變異構形式。
烷基可以是直鏈的或支鏈的。如果它們帶有取代基或作為其它基團的取代基出現時，例如在氟烷基、烷氧基、氟烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基和烷基磺醯基中，也同樣適用。烷基的實例為甲基、乙基、正丙基、異丙基(＝1-甲基乙基)、正丁基、異丁基(＝2-甲基丙基)、仲丁基(＝1-甲基丙基)、叔丁基(＝1，1-二甲基乙基)、戊基和己基。優選的烷基為甲基、乙基、正丙基和異丙基，特別優選為甲基和乙基。烷基中的一個或多個(例如1、2、3、4或5個)氫原子可以被氟原子代替。該氟烷基的實例為三氟甲基、2，2，2-三氟乙基和五氟乙基。取代的烷基可以在任何位點取代。
環烷基的實例為環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基或環辛基。環烷基中的一個或多個(例如1、2、3或4個)氫原子可以被氟原子代替。取代的環烷基可以在任何位點取代。
苯基可以是未取代的或被相同的或不同的基團一次或多次取代，例如一次、兩次或三次。這也適用於在以下基團中的苯基例如苯基烷基或苯氧基。在單取代的苯基中的取代基可以在2位、3位或4位。二取代的苯基可以在2，3位、2，4位、2，5位、2，6位、3，4位或3，5位被取代。三取代的苯基中取代基可以在2，3，4位、2，3，5位、2，4，5位、2，4，6位、2，3，6位或3，4，5位。
雜芳基為芳環化合物，其中一個或多個環原子為氧原子、硫原子或氮原子，例如1、2或3個氮原子、1或2個氧原子、1或2個硫原子或多種雜原子的組合。雜芳基可以在所有的位點被連接，例如在1位、2位、3位、4位、5位、6位、7位或8位。雜芳基可以是未取代的或被相同的或不同的基團一次或多次(例如一次、兩次或三次)取代。這也適用於在例如雜芳基烷基中的雜芳基。雜芳基的實例為呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、唑基、異唑基、二唑基、噻二唑基、噻唑基、異噻唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚基、苯並咪唑基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基和噌啉基。
雜芳基特別為2-或3-噻吩基，2-或3-呋喃基，1-、2-或3-吡咯基，1-、2-、4-或5-咪唑基，1-、3-、4-或5-吡唑基，1，2，3-三唑-1-、-4-或-5-基，1，2，4-三唑-1-、-3-或-5-基，1-或5-四唑基，2-、4-或5-唑基，3-、4-或5-異唑基，1，2，3-二唑-4-或-5-基，1，2，4-二唑-3-或-5-基，1，3，4-二唑-2-基或-5-基，2-、4-或5-噻唑基，3-、4-或5-異噻唑基，1，3，4-噻二唑-2-或-5-基，1，2，4-噻二唑-3-或-5-基，1，2，3-噻二唑-4-或-5-基，2-、3-或4-吡啶基，2-、4-、5-或6-嘧啶基，3-或4-噠嗪基，2-或3-吡嗪基，1-、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基，1-、2-、4-或5-苯並咪唑基，1-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基，2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異喹啉基，2-、4-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基，3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基，2-、3-、5-、6-、7-或8-喹喔啉基，1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基。也包括這些化合物相應的N-氧化物，即例如1-氧基-2-、3-或4-吡啶基。特別優選的雜芳基為2-或3-噻吩基，2-或3-呋喃基，1-、2-或3-吡咯基，1-、2-、4-或5-咪唑基，2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，1-、3-、4-或5-吡唑基，2-、3-或4-吡啶基，2-或3-吡嗪基，2-、4-、5-或6-嘧啶基和3-或4-噠嗪基。
本發明也涉及下面描述的製備式I化合物的方法。
本發明涉及製備式I化合物和/或其可藥用鹽的方法，其中X為氧(流程

圖1)，該方法包括a)將式III的苯酚與式IV的芳族化合物反應以製得式V化合物，b)通過親電芳族取代將R5引入並且轉化為式VI化合物以及c)將式VI化合物與胍反應以製得式Ia的醯基胍，
流程圖1其中R1、R1』、R2、R2』、R3、R4和R5具有以上說明的含義，並且其中各基團的含義如下Hal是F、Cl、Br或I，R9是氫或具有1、2、3或4個碳原子的烷基。
式III的苯酚在適當的溶劑中脫質子，優選為在偶極非質子溶劑(例如乙腈、DMF、NMP或DMSO)中，在無機鹼(例如K2CO3或Cs2CO3)的輔助下，或在有機鹼(例如三乙胺或TBTMG)的輔助下，在溫度為0℃至所用溶劑的沸點之間進行，然後在親核芳族取代中與親電的式IV芳族化合物在溫度為0℃至所用溶劑的沸點之間，優選為在室溫和150℃之間反應，以製得式V化合物。
將式V化合物轉化為式VI化合物是通過親電芳族取代發生的，優選為通過硝化，例如在Houben-Weyl，Methoden der organischen Chemie 4thedition，Organo-Stickstoff-Verbindungen IV，Part 1，Georg Thieme VerlagStuttgart 1992，pp.262-341及其引用的文獻中描述的。硝化優選為用90％HNO3在溫度為-80℃至室溫之間、特別優選為在-60℃至0℃之間進行。
可以從式VI化合物(R5＝NO2)製備相應的苯胺(R5＝NH2)，如在R.C.Larock，Comprehensive Organic TransformationsA Guide to FunctionalGroup Preparations，VCH Publishers，New York，Weinheim，1999，821-828及其引用的文獻中描述的。具有另外的R5含義的式VI化合物通過技術人員熟知的方法通過重氮鹽自這些苯胺合成，例如在Houben-Weyl，Methoden der organischen Chemie 4th edition，Organo-Stickstoff-Verbindungen I，Part2，Georg Thieme Verlag Stuttgart1990，pp.1060-1136及其引用的文獻中描述的。
由式VI化合物製得式Ia的醯基胍的反應或者與游離胍鹼發生或者優選為與氯化胍發生，該反應的反應物最初在惰性溶劑、優選為在DMF或NMP中與KOtBu一起攪拌，然後在溫度為0℃和溶劑的沸點之間、優選為在室溫和100℃之間與酯一起攪拌。
其中R9為烷基的式V的酯也可以先進行水解製得羧酸，然後優選為在活化劑的存在下，與胍反應以製得式Ia的醯基胍。
起始的式III和IV化合物可以通過商購獲得或通過類似技術人員熟知的方法或文獻中描述的方法製備獲得。
對於起始化合物的官能團也可能是以保護形式存在或以前體形式存在，然後轉化為通過以上描述的方法製備的式I化合物中的需要基團。適合的保護基團技術是技術人員熟知的。
產物和/或中間體的處理以及純化(如果需要)通過常規的方法，例如萃取、色譜或結晶以及常規的乾燥進行。
本發明也包括式VI的前體及其鹽以及其用作例如用於製備活性藥物成分(例如通過與胍反應製備的式I化合物和/或其可藥用鹽)的合成中間體 其中R1、R1』、R2、R2』、R3、R4、R5和X具有以上提及的含義，並且R9是氫或具有1、2、3或4個碳原子的烷基。
式I的五氟硫烷基苯基取代的苯甲醯基胍通常為弱鹼並且能夠與酸結合形成鹽。適合的酸加成鹽特別為所有可藥用酸的鹽，例如滷化物，特別是鹽酸鹽、乳酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽。
式I化合物是取代的醯基胍並且抑制細胞鈉-質子反向轉運蛋白(Na+/H+交換劑，NHE)，特別是NHE-1亞型。
與已知的NHE抑制劑相比，本發明的化合物的特點是在抑制Na+/H+交換中具有極高的活性並且改善ADMET的性能，例如延長S9穩定性(肝穩定性，對酶攻擊的穩定性)並且提高與hERG鉀通道相關的選擇性。另外，它們顯示很好的吸收特性和很高的生物利用度。
由於具有抑制NHE的性質，所以式I化合物和/或其可藥用鹽適用於預防和治療由活化或激活的NHE引起的疾病以及由NHE相關損傷間接引起的疾病。
因為NHE抑制劑主要通過其對細胞pH調節的影響而起作用，所以它們通常可以有利地與其它調節細胞內pH的化合物組合，適合的組合成分為碳酸酐酶(carbonic anhydratase)抑制劑、系統轉運碳酸氫根離子(例如碳酸氫鈉協同轉運蛋白(NBC)或鈉依賴型氯離子-碳酸氫根交換(NCBE))抑制劑，以及對其它NHE亞型具有抑制作用的NHE抑制劑，由於其可以通過它們加強或調節本文中描述的NHE抑制劑的藥理學相關的pH調節作用。
本發明的化合物的用途涉及在獸醫學和人類醫學中預防和治療急性和慢性疾病。
因此，本發明的NHE抑制劑適用於治療由局部缺血和再灌注引起的疾病。
由於其藥理學性質，本文中描述的化合物適合作為抗心律失常藥物。
由於它們的心臟保護性能，NHE抑制劑顯著適用於梗死預防和梗死治療並且適用於治療心絞痛，在此種情況中它們也預防性抑制或大大簡化與局部缺血誘導的損傷的發展相關的病理生理過程，特別在局部缺血誘導的心律失常的觸發中。由於它們對病理學缺氧和局部缺血的情況的保護作用，根據本發明應用的式I化合物和/或其可藥用`鹽(由於其抑制細胞Na+/H+交換機制)可以用作治療所有急性或慢性局部缺血誘導的損傷或由其直接或間接誘導的疾病的藥物。
本發明也涉及它們用作手術介入的藥物的用途。因此，該化合物可以在器官移植過程中應用，在移植前和移植期間在供體中應用該化合物保護器官，例如在處理或在生理體液中貯存期間以及在移入受體體內期間保護上述移植器官。
本發明的化合物也是例如在心臟以及在外周器官和血管上進行血管成形手術介入時具有保護作用的有價值的藥物。
另外，在進行搭橋手術時，例如在冠狀血管搭橋手術期間和在冠狀動脈搭橋移植(CABG)中可以應用本發明的化合物。
根據它們對局部缺血誘導的損傷的作用，本發明的式I化合物也可以用於心臟停搏後的復甦。
引人關注的是本發明的化合物是用於危機生命的心律失常的藥物。停止心室纖維性顫動並且恢復心臟的竇性心律。
因為人類組織或器官、特別是心臟的NHE1抑制劑不僅有效保護其免受由局部缺血和再灌注引起的損傷，而且也有效保護其免受如特別用於癌症治療和自身免疫疾病治療的那些藥物的細胞毒性作用，這些藥物與式I化合物和/或其可藥用鹽組合施用適用於抑制所述藥物的細胞毒性，特別是心臟毒性、副作用。由於與NHE1抑制劑聯合治療引起的細胞毒性作用(特別是心臟毒性)的降低使該化合物另外可能增加細胞毒性治療劑的劑量和/或延長用該藥物的治療。該細胞毒性治療的治療益處可以通過與NHE抑制劑的組合顯著增加。
另外，當心臟損傷過量產生甲狀腺激素、甲狀腺毒症或外部提供甲狀腺激素時可以應用本發明式I和/或其可藥用鹽的NHE1抑制劑。因此，式I化合物和/或其可藥用鹽適用於改善心臟毒性藥物的治療。
由於它們對局部缺血誘導的損傷的保護作用，本發明的化合物也適合用作治療神經系統、特別是中樞神經系統的局部缺血的藥物，它們適用於例如治療中風或腦水腫。
式I化合物和/或其可藥用鹽也適用於治療和預防中樞神經系統過度興奮引起的疾病或障礙，特別是用於治療癲癇障礙、中樞性陣攣性和強直性痙攣、心理抑鬱狀態、焦慮障礙以及精神病。在這些情況中，可以單獨或與其它具有抗癲癇活性的物質或抗精神病活性組成分，或碳酸酐酶抑制劑(例如與乙醯唑胺)，以及與其它的NHE或鈉依賴型氯離子-碳酸氫根交換(NCBE)抑制劑組合應用本文中描述的NHE抑制劑。
另外，根據本發明應用的式I化合物和/或其可藥用鹽也適用於治療多種類型的休克，例如過敏性、心源性、低血容量性和細菌性休克。
式I化合物和/或其可藥用鹽也可以用於預防和治療血栓形成障礙，因為它們作為NHE抑制劑本身能夠抑制血小板凝集。另外，它們能夠在局部缺血和再灌注後，抑制或預防炎性和凝固介質、特別是維勒布蘭德因子和血栓形成選擇蛋白的過量釋放。因此，其可能降低和減輕顯著的血栓形成因子的致病作用。因此，本發明的NHE抑制劑可以與其它的抗凝血和/或血栓溶解活性成分組合，例如與如重組或天然的組織血纖溶酶原激活物、鏈球菌激酶、尿激酶、乙醯水楊酸、凝血酶拮抗劑、因子Xa拮抗劑、具有溶解纖維蛋白活性的藥物、血栓烷受體拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑、因子VIIa拮抗劑、氯吡格雷、噻氯匹定等組合。本發明的NHE抑制劑與NCBE抑制劑和/或與碳酸酐酶抑制劑，例如與乙醯唑胺的組合應用特別有益。
另外，NHE1抑制劑引人注目的特點是對細胞增殖、例如成纖維細胞增殖和平滑血管肌細胞的增殖的強抑制作用。因此，式I化合物和/或其可藥用鹽適合作為細胞增殖代表直接或間接原因的疾病的有價值的治療劑，並且因此可以用作抗動脈粥樣硬化、慢性腎衰竭、癌症藥物。
細胞遷移可能被NHE抑制劑抑制。因此，式I化合物和/或其可藥用鹽適合作為細胞遷移代表直接或間接原因的疾病、例如具有明顯轉移傾向的癌症的有價值的治療劑。
另外，NHE1抑制劑引人注目的特點是對纖維變性障礙的延遲或預防。因此，式I化合物和/或其可藥用鹽適合作為心肌纖維化和肺纖維化、肝纖維化、腎纖維化以及其它纖維變性障礙的治療劑。因此，它們可以用於治療器官肥大和增生，例如心臟和前列腺的肥大和增生。因此，它們適用於預防和治療心力衰竭(充血性心力衰竭＝CHF)以及治療和預防前列腺增生或前列腺肥大。
因為在原發性高血壓中NHE顯著提高，所以式I化合物和/或其可藥用鹽適用於預防和治療高血壓以及治療心血管障礙。在這些情況中，它們可以單獨應用或與適合的組合和製劑配伍一起應用，用於治療高血壓以及心血管障礙。因此，例如一種或多種具有噻嗪類活性的利尿劑、袢利尿劑、醛固酮和假醛固酮拮抗劑，例如氫氯噻嗪、吲達帕胺、多噻嗪、呋喃苯胺酸、吡咯他尼、託拉塞米、布美他尼、阿米洛利、氨苯蝶啶、螺內酯或依普利酮(eplerone)可以與之組合。另外，本發明的NHE抑制劑可以用於與鈣通道阻斷劑，例如維拉帕米、地爾硫、氨氯地平或硝苯地平組合，以及與ACE抑制劑例如雷米普利、依那普利、賴諾普利、福辛普利或卡託普利組合。其它有益的組合配伍也可以是β-阻斷劑(例如美託洛爾、沙丁胺醇等)，血管緊張素受體及其受體亞型的拮抗劑(例如洛沙坦、依貝沙坦、纈沙坦、奧馬曲拉、gemopatrilat)，內皮素拮抗劑，腎素抑制劑，腺苷受體激動劑，鉀通道抑制劑和活化劑(例如格列本脲、格列美脲、二氮嗪、色滿卡林、長壓定及其衍生物)，線粒體ATP-敏感鉀通道(mitoK(ATP)通道)活化劑，Kv1.5抑制劑等。
NHE1抑制劑已經表現出具有顯著的抗炎作用並且因此可以用作抗炎藥物。就此而言，對炎性介質釋放的抑制值得關注。因此該化合物可以單獨或與抗炎藥物組合用於預防或治療慢性和急性炎性障礙。有利地應用的組合配伍為類固醇和非類固醇抗炎藥物。
本發明的化合物也可以用於治療由原生動物引起的疾病，例如瘧疾或家禽的球蟲病。
另外，已經發現NHE1抑制劑顯示了對於血清脂蛋白的有益作用。通常認為過高的血脂水平，即高脂蛋白血症，代表動脈硬化血管損害、特別是冠狀心臟疾病的發展的重要危險因素。因此，高血清脂蛋白的降低對於動脈粥樣硬化損害的預防和恢復非常重要。除了降低總血清膽固醇，特別重要的是降低該總膽固醇的特定致粥樣化的脂類部分的比例，特別是低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)的比例，因為這些脂類部分代表致粥樣化危險因素。相反，對冠狀心臟疾病的保護功能歸因於高密度脂蛋白。因此，低脂血症應該能夠不僅降低總膽固醇而且特別可以降低VLDL和LDL血清膽固醇部分。現在已經發現NHE1抑制劑顯示了關於影響血清脂類水平的有價值的治療上可利用的性質。因此，如觀察到的，它們顯著降低例如由增加富含膽固醇和脂類食物的飲食攝入或在發生病理代謝改變的情況下(例如遺傳相關的高脂血症)引起的LDL和VLDL的高血清濃度。因此它們可以通過消除偶然的危險因素用於預防和消退動脈硬化損害。本文中不僅包括原發性高脂血症，也包括某些發生的繼發性高脂血症，例如與糖尿病相關的繼發性高脂血症。另外，NHE1抑制劑引起代謝異常誘導的梗死顯著降低，特別是引起誘導的梗死大小和嚴重程度的顯著降低。
因此，式I化合物和/或其可藥用鹽有利地用於製備治療高膽固醇血症的藥物，用於製備預防動脈粥樣化形成的藥物，用於製備預防和治療動脈粥樣硬化的藥物，用於製備預防和治療由高膽固醇水平誘導的疾病的藥物，用於治療預防和治療由內皮功能障礙誘導的疾病的藥物，用於製備預防和治療動脈粥樣硬化誘導的高血壓的藥物，用於製備預防和治療動脈粥樣硬化誘導的血栓形成的藥物，用於製備預防和治療高膽固醇血症誘導的和內皮功能障礙誘導的局部缺血性損傷和局部缺血後再灌注損傷的藥物，用於製備預防和治療高膽固醇血症誘導的和內皮功能障礙誘導的心臟肥大和心肌病以及充血性心力衰竭(CHF)的藥物，用於製備預防和治療高膽固醇血症誘導的和內皮功能障礙誘導的冠狀血管痙攣和心肌梗死的藥物，用於製備與高血壓藥物(優選為與血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑)組合治療所述障礙的藥物。式I和/或其可藥用鹽的NHE抑制劑與降低血脂水平的活性成分、優選為與HMG-CoA還原酶抑制劑(例如洛伐他汀或普伐他汀)的組合，後者引起低脂血作用並且因此增加式I和/或其可藥用鹽的NHE抑制劑的低脂血性質，證明了其為加強活性成分的作用並且降低活性成分的應用的有利組合。
因此，式I化合物和/或其可藥用鹽對多種起源的內皮損傷具有有效的保護作用。該對內皮功能障礙症候群的血管保護意味著式I化合物和/或其可藥用鹽是預防和治療冠狀血管痙攣、外周血管疾病，特別是間歇性跛行、動脈粥樣化形成和動脈粥樣硬化、左心室肥大和擴張型心肌病以及血栓形成障礙的有價值的藥物。
另外，已經發現NHE1抑制劑適合用於治療胰島素抗性被抑制的非胰島素依賴的糖尿病(NIDDM)。就此而言，其可以有利於加強抗糖尿病活性和本發明的化合物的作用效果，有利於將其與雙胍(例如二甲雙胍)、抗糖尿病的磺醯脲(例如格列本脲、格列美脲、甲磺丁脲等)、葡萄糖苷酶抑制劑、PPAR激動劑(例如羅格列酮、吡格列酮等)、不同施用形式的胰島素產品、DB4抑制劑、胰島素敏化劑或美格列奈組合。
除了急性抗糖尿病作用，式I化合物和/或其可藥用鹽阻礙糖尿病晚期併發症的發展並且因此可以用作預防和治療糖尿病的晚期損傷(例如糖尿病腎病、糖尿病性精神病、糖尿病性視網膜病變、糖尿病性心肌病和其它作為糖尿病的結果而發生的障礙)的藥物。就此而言，它們可以有利地與在NIDDM治療中描述的抗糖尿病藥物組合。就此而言，與胰島素有益的劑型的組合應特別重要。
除了對急性局部缺血問題以及隨後相等的急性壓力再灌注問題的保護作用外，NHE1抑制劑也直接對完整的哺乳動物機體的疾病或障礙具有治療作用，該疾病或障礙與慢性進行性老化過程的表現相關並且其獨立於急性局部缺血狀態並且在正常、非局部缺血條件下發生。這些病理的、年齡相關的表現(經長期老化，例如疾病、無活力以及死亡誘導的，如今可以對用NHE抑制劑的治療作出響應)是基本上由年齡相關的改變(在重要器官及其功能方面)引起的疾病和障礙並且在老化的機體中越來越重要。
與年齡相關的功能損傷或年齡相關的器官磨損表現相關的障礙是例如血管對收縮和放鬆反應的不適當的應答和反應。該血管對收縮和放鬆刺激的反應的年齡相關的降低(其為心血管系統的重要過程並且因此是生命和健康的重要過程)可以被NHE抑制劑顯著消除或降低。保持血管反應的重要功能和方法是在內皮功能障礙中阻止或延遲年齡相關進程，該進程可以極其顯著地被NHE抑制劑消除。因此，式I化合物和/或其可藥用鹽顯著適用於治療和預防內皮功能障礙中的年齡相關的進程，特別是間歇性跛行。
另外多種表現老化過程特徵的實例是心臟收縮的降低以及心臟對需要的心臟的輸出量的適應性降低。該心臟效力的降低作為老化過程的結果在大多數情況下與心臟功能障礙(由在心肌組織中結締組織的沉積引起)相關。該結締組織的沉積的特徵在於心臟重量的增加、心臟擴大以及心功能的限制。令人驚奇的是幾乎可以完全抑制該心臟器官的老化。因此，式I化合物和/或其可藥用鹽顯著適合治療和預防心力衰竭、充血性心力衰竭(CHF)。不僅可以通過NHE抑制劑治癒癌症(已經通過抑制增殖發生)，也可以通過NHE抑制劑降低和極其顯著延遲年齡相關的癌症發生。特別值得注意的發現是由於老化的結果發生的所有器官的障礙以及不僅是某些類型的癌症被抑制或顯著地延遲發生。因此，式I化合物和/或其可藥用鹽顯著適用於治療並且特別是預防年齡相關類型的癌症。
現在發現，NHE抑制劑不僅在研究的所有器官(包括心臟、血管、肝等)的年齡相關障礙的發生中使其延遲、在時間上極其顯著地推移並且超越了正常的統計學範圍，而且也極其顯著地延遲了老年人癌症的發生。相反，同樣令人驚奇的是將生命延長至如今為止其它藥物或任何天然產物不可獲得的程度。NHE抑制劑的獨特作用也使其除了在人類和動物中作為活性成分的單獨用途外，還可以將這些NHE抑制劑與其它的活性成分、方法、物質以及天然產物組合用於老年學，其基於不同的作用機制。該種用於老年病治療的活性成分是特別是維生素和具有抗氧化活性的物質。因為熱量負荷或食物攝取與老化過程相關，與飲食方法的組合可以例如通過食慾抑制劑進行。也可以考慮與下列藥物組合降血壓藥物(例如ACE抑制劑)、血管緊張素受體拮抗劑、利尿藥、Ca2+通道阻斷劑等，或使代謝正常化的藥物(例如降低膽固醇的藥物)。
因此，式I化合物和/或其可藥用鹽顯著適用於預防年齡相關的組織改變並且在保持生命高質量的同時延長生命。
本發明的化合物是細胞鈉-質子反向轉運蛋白(Na/H交換劑)的有效抑制劑，該轉運在大量的障礙(原發性高血壓、動脈粥樣硬化、糖尿病等)中也在對測量響應的細胞，例如紅細胞、血小板或白細胞中增加。因此，根據本發明應用的化合物適合作為顯著並且簡單的科學工具，例如其用作診斷試劑以確定並區分不同類型的高血壓，以及動脈粥樣硬化、糖尿病和糖尿病晚期併發症、增殖障礙等。
本文中也要求保護用於人、獸或植物保護性用途的藥物，該藥物包括有效量的式I化合物和/或其可藥用鹽，以及可藥用載體和輔料，單獨或與其它的藥用活性成分或藥物組合。
就此而言，包含式I化合物和/或其可藥用鹽的藥物可以例如經口服施用、非腸道施用、靜脈內施用、直腸施用、經皮施用或通過吸入施用，優選的施用途逕取決於障礙的具體特徵。另外，式I化合物可以單獨或與藥物賦形劑一起用於獸用藥物和人用藥物中。藥物通常包含式I化合物和/或其可藥用鹽的活性成分的劑量為每劑量單位0.01mg至1g。
適合預期的藥物製劑的賦形劑是技術人員基於其專業知識所熟知的。除了溶劑、凝膠形成劑、栓劑基質、片劑賦形劑以及其它活性成分的載體，也可以應用例如抗氧化劑、分散劑、乳化劑、消泡劑、矯味劑、防腐劑、增溶劑或著色劑。
對於口服施用的形式，將活性化合物與適於該目的的添加劑(例如載體、穩定劑或惰性稀釋劑)混合，並且通過常規的方法轉化為適合的劑型，例如片劑，包衣片，硬明膠膠囊，水、醇或油溶液。可以應用的惰性載體的實例為阿拉伯膠、氧化鎂、碳酸鎂、磷酸鉀、乳糖、葡萄糖或澱粉，特別是玉米澱粉。另外，可以通過幹法制粒和溼法制粒進行製備。適合的油性載體或溶劑的實例為植物或動物油，例如葵花籽油或魚肝油。
對於皮下、肌內或靜脈內施用，將所應用的活性化合物(如果需要，與用於該目的的常規物質，例如增溶劑、乳化劑或其它賦形劑一起)轉化為溶液劑、混懸劑或乳劑。
適合的溶液的實例為水、生理鹽水或醇，例如乙醇、丙醇、丙三醇，以及糖溶液(例如葡萄糖或甘露醇溶液)，或多種上述溶劑的混合物。
適合作為以氣霧劑或噴霧劑的形式施用的藥物製劑是式I和/或其可藥用鹽的活性成分在可藥用溶劑(例如特別是乙醇或水，或該溶劑的混合物)中的例如溶液劑、混懸劑或乳劑。如果需要，製劑也可以包含其它藥用賦形劑例如表面活性劑、乳化劑和穩定劑，以及拋射氣體。該製劑通常包含活性成分的濃度為約0.1％至10％，特別是約0.3％至3％(重量)。
待施用的式I的活性成分的劑量以及施用頻率取決於所用化合物作用的藥力和持續時間；另外也取決於待治療的障礙的性質和嚴重程度以及待治療的哺乳動物的性別、年齡、體重和個體響應。
對於體重約75kg的患者，式I化合物和/或其可藥用鹽的平均日劑量至少為0.001mg/kg(體重)，例如0.01mg/kg(體重)，至最大為10mg/kg(體重)，例如1mg/kg(體重)。對於障礙的急性發作，例如在剛剛患有心肌梗死後，也需要較高劑量，例如每天至多4個單劑量。每天可以需要至多700mg，特別是對於靜脈注射施用，例如對於重症監護的梗死的患者，並且可以通過輸注施用本發明的化合物。
縮略語表ADMET吸收-分布-代謝-排洩-毒理DIP 二異丙醚
DMFN，N-二甲基甲醯胺DMSO 二甲亞碸EA 乙酸乙酯HEP正庚烷hERG 人ether-a-go-go-相關基因HOAc 乙酸KOtBu 2-甲基丙-2-醇鉀MeOH 甲醇mp 熔點MTB叔丁基甲基醚NMP1-甲基吡咯烷-2-酮RT 室溫TBTMG N」-叔丁基-N，N，N』，N』-四甲基胍THF四氫呋喃實施例1N-[5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲醯基]胍 a)五氟硫烷基苯酚
將5.0g的3-五氟硫烷基苯胺混懸於50mL35％的H2SO4水溶液中。然後，在0℃下，歷經10分鐘滴加1.57g NaNO2的5mL水溶液。將混合物在0℃下攪拌40分鐘。然後將冷卻至0℃的8.56g Cu(NO3)2的50mL水溶液加至混懸液中。然後立即加入3.26g Cu2O，於是可觀察到顯著的氣體釋放。每次用100mL CH2Cl2萃取三次，有機相用100mL飽和的NaCl水溶液洗滌並且經MgSO4乾燥，在真空下除去溶劑。經短矽膠柱色譜(DIP洗脫)得到3.5g苯酚，為無色油狀物。
Rf(EA/HEP1∶10)＝0.15 MS(EI)220b)5-甲磺醯基-2-甲基-4-(3-五氟硫烷基苯氧基)-苯甲酸甲酯 在100℃下，將600mg4-氟-5-甲磺醯基-2-甲基苯甲酸甲酯、700mg3-五氟硫烷基苯酚和1.6g Cs2CO3在4mL無水DMF中攪拌3小時。然後，將混合物冷卻至室溫，用100mL EA稀釋並且每次用20mL水洗滌三次。殘留物經MgSO4乾燥並且在真空下除去溶劑後，經矽膠色譜(DIP洗脫)得到300mg無色油狀物。
Rf(DIP)＝0.27 MS(ES+)446c)5-甲磺醯基-4-(4-硝基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯 在-40℃下，將3.50g5-甲磺醯基-2-甲基-4-(3-五氟硫烷基苯氧基)-苯甲酸甲酯溶於100mL90％HNO3中。將反應混合物在該溫度下攪拌10分鐘，然後將其傾倒至800g冰中。將該混合物攪拌10分鐘，然後將產物抽濾。獲得3.89g淺黃色固體，mp145-148℃(分解)。
Rf(DIP)＝0.09d)4-(4-氨基-3-五氟硫烷基苯氧基)-5-甲磺醯基-2-甲基苯甲酸甲酯 將3.80g5-甲磺醯基-4-(4-硝基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯溶於30mL HOAc和30mL MeOH中，加入200mg Pd/C(10％)，並且在6bar氫氣壓力下進行氫化24小時。因為反應仍未完成，所以再加入300mg Pd/C(10％)、30mL HOAc和30mL MeOH，並且繼續在6bar氫氣壓力下進行氫化24小時。然後過濾除去催化劑並且在真空下除去溶劑。得到3.4g淺灰色固體，mp175℃(分解)。
Rf(MTB)＝0.44e)4-(4-氯磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-5-甲磺醯基-2-甲基苯甲酸甲酯 將3.4g4-(4-氨基-3-五氟硫烷基苯氧基)-5-甲磺醯基-2-甲基苯甲酸甲酯溶於30mL HOAc中，加入30g冰，然後加入30mL飽和的HCl水溶液。在0℃下，歷經5分鐘將0.56g NaNO2的5mL水溶液滴加至該溶液中。將混合物在0℃下攪拌10分鐘。然後，分批將該溶液加至冷卻至0℃的12.4mg CuCl和125.6mg CuCl2(二水合物)的100mL SO2-飽和的HOAc的混懸液中。將混合物在室溫下攪拌2小時，然後用300mL水稀釋並且每次用200mL EA萃取三次。經MgSO4乾燥後，在真空下除去溶劑。得到3.5g粘稠油狀物並且無需純化可以進一步反應。
f)4-(2-甲磺醯基-4-甲氧基羰基-5-甲基苯氧基)-2-五氟硫烷基苯亞磺酸鈉 在70℃下，將3.5g4-(4-氯磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-5-甲磺醯基-2-甲基苯甲酸甲酯分批加至8.10g Na2SO3的75mL水溶液中，在此期間用10摩爾的NaOH水溶液使pH保持在約pH＝10。然後，將混合物在70℃下攪拌45分鐘，使其冷卻後，用鹽酸水溶液將pH調節至pH＝2。每次用200mL EA萃取三次。經MgSO4乾燥後，在真空下除去溶劑。將殘留物混懸於100mL水中並且用2摩爾NaOH水溶液調節pH＝10，在真空下除去揮發物。然後，先用每次100mL甲苯進行兩次共蒸發，再用100mL無水DMF進行共蒸發，殘留物(3.0g)無需純化可以進一步反應。
g)5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯和5-甲磺醯基-4-(4-甲氧基亞磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯 將3.0g4-(2-甲磺醯基-4-甲氧基羰基-5-甲基苯氧基)-2-五氟硫烷基苯亞磺酸鈉溶於100mL無水DMF中，加入4.0g CH3I，將混合物在45℃下攪拌9小時。然後，將反應混合物在室溫下放置2天。在真空下除去溶劑，將殘留物溶於100mL水和100mL EA中。然後，加入50mL5％NaHSO4水溶液，相分離。然後，每次用100mL EA萃取三次。經MgSO4乾燥後，在真空下除去溶劑，殘留物經矽膠色譜(MTB/DIP 1∶1洗脫)。得到0.59g 5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯和0.49g 5-甲磺醯基-4-(4-甲氧基亞磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯Rf(MTB/DIP 1∶1)＝0.135-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯Rf(MTB/DIP 1∶1)＝0.325-甲磺醯基-4-(4-甲氧基亞磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯h)N-[5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲醯基]胍 在室溫下，將546mg氯化胍和535mg KOtBu在20mL無水DMF中攪拌30分鐘。然後加入500mg 5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯，將混合物在室溫下放置16小時。將反應混合物傾倒至20mL水中，用HCl水溶液調節pH＝8.0並且每次用50mL EA萃取3次。然後，將合併的EA相用20mL5％NaHCO3水溶液洗滌並且經MgSO4乾燥，在真空下除去溶劑。得到420mg無定形固體。
Rf(EA/MeOH 10∶1)＝0.29 MS(ES+)551k)N-[5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲醯基]胍，鹽酸鹽
將400mg N-[5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲醯基]胍溶於稀釋的HCl水溶液中，然後在真空下除去揮發物。殘留物從水中重結晶以得到200mg淺灰色固體。mp275℃。
NHE抑制的確定對NHE-1抑制的抑制濃度IC50可以通過以下方法進行測定在FLIPR試驗中，通過在表達人NHE-1的轉染的細胞系中的pHi恢復率的測定來確定NHE-1抑制的IC50。
該試驗在具有透明底板的黑壁96孔微量滴定板的FLIPR(螢光成像讀板儀)上進行。在實驗的前一天，以～25000細胞/孔的密度接種表達多種NHE亞型(由於突變發生和隨後的選擇，親代細胞系LAP-1不顯示內源性NHE活性)的轉染的細胞系。
另外，轉染的細胞的生長介質(Iscove+10％胎小牛血清)含有G418作為選擇抗生素以確保轉染的序列的存在。
實際的試驗開始於除去生長介質並且每孔加入100μL上樣緩衝液(5μM BCECF-AM[2』，7』-二(羧基乙基)-5-(和-6-)羧基螢光素，乙醯氧基甲基酯]於20mM NH4Cl、115mM膽鹼鹽酸鹽、1mM MgCl2、1mMCaCl2、5mM KCl、20mM HEPES、5mM葡萄糖；pH7.4[用KOH調節]中)。然後，將細胞在37℃下培養20分鐘。該培養使細胞與螢光染料(其螢光強度取決於pHi)和NH4Cl(其使細胞為弱鹼性)共同上樣。非螢光染料前體BCECF-AM作為酯是可透過膜的。實際的染料BCECF是不可透過膜的，但通過酯酶在細胞內釋放。
培養20分鐘後，通過在細胞洗滌器(Tecan Columbus)中每次用400μL洗滌緩衝液(133.8mM膽鹼鹽酸鹽、4.7mM KCl、1.25mM MgCl2、1.25mM CaCl2、0.97mM K2HPO4、0.23mM KH2PO4、5mM HEPES、5mM葡萄糖；pH7.4[用KOH調節])洗滌三次將含有NH4Cl和游離BCECF-AM的上樣緩衝液除去。每孔中剩餘的殘留物體積為90μL(可能為50-125μL)。該洗滌步驟除去了游離BCECF-AM並且由於除去了外部NH4+離子，結果導致細胞內發生酸化(～pHi6.3-6.4)。
因為細胞內NH4+與NH3和H+的平衡被細胞外NH4+的除去和隨後的NH3瞬間通過細胞膜所打破，所以洗滌過程引起H+在細胞內剩餘，這是細胞內發生酸化的原因。如果其持續時間足夠長可能最終引起細胞死亡。
確保洗滌緩衝液中不含有鈉(＜1mM)是很重要的，因為細胞外鈉離子將通過克隆的NHE同種型的活性引起pHi的瞬間恢復。
確保所有應用的緩衝液(上樣緩衝液、洗滌緩衝液、恢復緩衝液)中不含有任何HCO3-離子也是很重要的，因為碳酸氫根的存在將引起存在於親代LAP-1細胞系中的幹擾碳酸氫根依賴型pHi調節系統發生活化。
然後，將含有酸化的細胞的微量滴定板(至多在酸化後20分鐘)轉移至FLIPR中。在FLIPR中，細胞內的螢光染料被波長為488nm的光(由氬雷射器產生)激發，選擇測定參數(FLIPR中的雷射能量、照射時間以及CCD照相機孔徑)以便每孔的平均螢光信號在30000和35000(相對螢光單位)之間。
在FLIPR中的實際測量開始於CCD照相機在軟體的控制下每2秒鐘拍攝照片。10秒鐘後，通過加入90μL恢復緩衝液(133.8mM NaCl、4.7mM KCl、1.25mM MgCl2、1.25mM CaCl2、0.97mM K2HPO4、0.23mM KH2PO4、10mM HEPES、5mM葡萄糖；pH7.4[用NaOH調節])使細胞內pH開始恢復，該緩衝液通過FLIPR中的96孔移液器加入。
陽性對照孔(100％NHE活性)是那些加入純的恢復緩衝液的孔，而陰性對照(0％NHE活性)為洗滌緩衝液。
將恢復緩衝液(濃度為試驗物質的二倍)加入到其它所有孔中。FLIPR中的測量在60次測量(2分鐘)後終止。
將原始數據輸出至ActivityBase程序中。該程序首先計算每個試驗物質濃度的NHE活性並且從中計算出該物質的IC50值。因為整個試驗中pHi恢復過程不是線性的，但最終降低(由於在較高的pHi值時NHE活性的降低)，所以選擇在陽性對照的螢光增加為線性的部分進行評價是很重要的。
權利要求
1.式I的五氟硫烷基苯甲醯基胍及其可藥用鹽 其中各基團的含義如下R1和R1』各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，F，Cl，Br，I，-CN，NR6R7，-O-(CH2)b-(CF2)c-CF3或-(SOd)e-(CH2)f-(CF2)g-CF3；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；d是0、1或2；b、c、e、f和g各自獨立地是0或1；R2和R2』各自獨立地是氫，F，Cl，Br，I，-CN，-SO2CH3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，NR6R7，-O-(CH2)b-(CF2)c-CF3，-(SOh)k-(CH2)l-(CF2)m-CF3，具有1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，具有3、4、5、6、7或8個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替，未取代的或被1、2或3個選自下列基團的基團取代的-(CH2)n-苯基F，Cl，Br，I，-Oo-(CH2)p-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3，或未取代的或被1、2或3個選自下列基團的基團取代的-(CH2)q-雜芳基F，Cl，Br，I，-Or-(CH2)s-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；b和c各自獨立地是0或1；h是0、1或2；k是0或1；l是0、1、2、3或4；m和o各自獨立地是0或1；p是0、1、2或3；n是0、1、2、3或4；r是0或1；s是0、1、2或3；q是0、1、2、3或4；R3是氫，F，Cl，Br，I，-CN，-SO2CH3，具有1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基或-Ot-(CH2)u-CF3；t是0或1；u是0、1、2或3；R4 是氫，F，Cl，Br，I，-CN，-SO2CH3，NR6R7，-(SOv)w-(CH2)x-(CF2)y-CF3，-O-(CH2)aa-(CF2)bb-CF3，具有1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基或具有3、4、5、6、7或8個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；v是0、1或2；x是0、1、2、3或4；w、y、aa和bb各自獨立地是0或1；或R4是-(CH2)cc-苯基，其為未取代的或被1、2或3個選自下列基團的基團取代F，Cl，Br，I，-Odd-(CH2)ee-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；dd是0或1；ee是0、1、2或3；cc是0、1、2、3或4；或R4是-(CH2)ff-雜芳基，其為未取代的或被1、2或3個選自下列基團的基團取代F，Cl，Br，I，-Ogg-(CH2)hh-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；gg是0或1；hh是0、1、2或3；ff是0、1、2、3或4；R5是F、Cl、Br、I、CF3、-SO2CH3或-S(O)OCH3；X是直接的鍵、O、NR8、S(O)kk；R8是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，-(CH2)mm-CF3或-SO2CH3kk是0、1或2；mm是0、1、2或3；其中在R1和R1』以及R2和R2』的定義中，-O-(CH2)b-(CF2)c-CF3可以各自獨立地選擇，其中在R1和R1』、R2和R2』以及R4的定義中，NR6R7可以獨立地選擇。
2.權利要求1中所述的式I化合物及其可藥用鹽，其中各基團的含義如下R1和R1』各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，甲氧基，乙氧基，F，Cl，NR6R7，-O-CH2-CF3或-(SOd)e-(CH2)f-CF3；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；d是0、1或2；e和f各自獨立地是0或1；R2和R2』各自獨立地是氫，F，Cl，-SO2CH3，-(SOh)k-(CH2)l-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，具有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替，未取代的或被1-2個選自下列基團的基團取代的苯基F，Cl，-Oo-(CH2)p-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3，或未取代的或被1-2個選自下列基團的基團取代的雜芳基F，Cl，-Or-(CH2)s-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；h是0、1或2；k是0或1；l是0、1、2、3或4；o是0或1；p是0、1、2或3；r是0或1；s是0、1、2或3；R3是氫，F，Cl，-SO2CH3，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，甲氧基，乙氧基或-Ot-(CH2)u-CF3；t是0或1；u是0、1、2或3；R4是氫，F，Cl，-SO2CH3，-(SOv)w-(CH2)x-CF3，-O-(CH2)aa-CF3，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，甲氧基，乙氧基或具有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替；v是0、1或2；w、x和aa各自獨立地是0或1；或R4是苯基，其為未取代的或被1-2個選自下列基團的基團取代F，Cl，-Odd-(CH2)ee-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；dd和ee各自獨立地是0或1；或R4是雜芳基，其為未取代的或被1-2個選自下列基團的基團取代F，Cl，-Ogg-(CH2)hh-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；gg和hh各自獨立地是0或1；R5是F、Cl、CF3、-SO2CH3或-S(O)OCH3；X是直接的鍵、O、NR8或S(O)kk；R8是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，-CH2-CF3或-SO2CH3；kk是0、1或2。
3.權利要求1或2中所述的式I化合物及其可藥用鹽，其中各基團的含義如下R1和R1』各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基，甲氧基， 乙氧基，F，Cl，NR6R7，-O-CH2-CF3或-(SOd)e-(CH2)f-CF3；R6和R7各自獨立地是氫，具有1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；d是0、1或2；e和f各自獨立地是0或1；R2和R2』各自獨立地是氫，F，Cl，-SO2CH3，-(SOh)k-(CH2)l-CF3，甲基，具有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替，未取代的或被選自下列基團的基團取代的苯基F，Cl，-Oo-(CH2)p-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3，或未取代的或被選自下列基團的基團取代的雜芳基F，Cl，-Or-(CH2)s-CF3，甲氧基，乙氧基，具有1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3；h是0、1或2；k、l、o、p、r和s各自獨立地是0或1；R3是氫、F、Cl、-SO2CH3、甲基、甲氧基、乙氧基或-Ot-(CH2)u-CF3；t和u各自獨立地是0或1；R4是氫，F，Cl，-SO2CH3，-(SOv)w-(CH2)x-CF3，-Oz-(CH2)aa-CF3，甲基，甲氧基，乙氧基或具有3、4、5、6或7個碳原子的環烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子代替；v是0、1或2；w、x、z和aa各自獨立地是0或1；R5是F、Cl或-SO2CH3；X是直接的鍵、O、NR8或S(O)kk；R8是氫、甲基、乙基、-CH2-CF3或-SO2CH3；kk是0、1或2。
4.權利要求1、2或3中一項或多項所述的式I化合物及其可藥用鹽，其中各基團的含義如下R1和R1』各自獨立地是氫、甲基、F、Cl、-CF3或-O-CH2-CF3；R2和R2』各自獨立地是氫、F、Cl、-SO2CH3、-SO2-CF3、-CF3或甲基；R3是氫、F、Cl或甲基；R4是氫、F、Cl或甲基；R5是-SO2CH3；X是O。
5.權利要求1-4中任意一項所述的式I化合物，其選自N-[5-甲磺醯基-4-(4-甲磺醯基-3-五氟硫烷基苯氧基)-2-甲基苯甲醯基]胍及其可藥用鹽。
6.製備權利要求1、2、3、4或5中一項或多項所述的式I化合物和/或其可藥用鹽的方法，該方法包括將式VI化合物與胍反應 其中R1、R1』、R2、R2』、R3、R4、R5和X具有上述定義，並且R9是氫或具有1、2、3或4個碳原子的烷基。
7.權利要求1-5中一項或多項所述的式I化合物和/或其可藥用鹽，其用作藥物。
8.權利要求1-5中一項或多項所述的式I化合物和/或其可藥用鹽在製備用於下列方面的藥物中的用途治療或預防急性或慢性損傷、局部缺血或再灌注引起的器官和組織的障礙或間接後遺症，治療或預防心律失常、危機生命的心室纖維性顫動、心肌梗死、心絞痛，治療或預防心臟的局部缺血狀態、外周和中樞神經系統或中風的局部缺血狀態或外周器官和組織的局部缺血狀態，治療或預防休克狀態、細胞增殖表現為直接或間接原因的疾病、癌症、轉移、前列腺肥大和前列腺增生、動脈粥樣硬化或脂代謝的失衡、高血壓、原發性高血壓、中樞神經系統障礙、CNS過度興奮引起的障礙、癲癇或中樞誘導的驚厥、中樞神經系統障礙、特別是焦慮狀態、抑鬱或精神病，治療或預防非胰島素依賴的糖尿病(NIDDM)或糖尿病晚期損傷、血栓形成、內皮功能障礙引起的障礙、間歇性跛行，治療或預防內部器官的纖維化障礙、肝纖維化障礙、腎纖維化障礙、血管纖維化障礙和心臟纖維化障礙，治療或預防心力衰竭或充血性心力衰竭、急性或慢性炎性障礙、原生動物引起的障礙、瘧疾或家禽的球蟲病，以及用於外科手術和器官移植，在手術過程中保護和貯存移植物，用於搭橋手術，用於心臟停搏後的復甦，預防年齡相關的組織改變，製備直接抗衰老或延長生命的藥物，治療和降低甲狀腺毒症中的心臟毒性作用或製備診斷輔助劑。
9.權利要求1-5中一項或多項所述的式I化合物和/或其可藥用鹽與其它藥物或活性成分組合在製備用於下列方面的藥物中的用途治療或預防急性或慢性損傷、局部缺血或再灌注引起的器官和組織的障礙或間接後遺症，治療或預防心律失常、危機生命的心室纖維性顫動、心肌梗死、心絞痛，治療或預防心臟的局部缺血狀態、外周和中樞神經系統或中風的局部缺血狀態或外周器官和組織的局部缺血狀態，治療或預防休克狀態、細胞增殖表現為直接或間接原因的疾病、癌症、轉移、前列腺肥大和前列腺增生、動脈粥樣硬化或脂代謝的失衡、高血壓、原發性高血壓、中樞神經系統障礙、CNS過度興奮引起的障礙、癲癇或中樞誘導的驚厥、中樞神經系統障礙、特別是焦慮狀態、抑鬱或精神病，治療或預防非胰島素依賴的糖尿病(NIDDM)或糖尿病晚期損傷、血栓形成、內皮功能障礙引起的障礙、間歇性跛行，治療或預防內部器官的纖維化障礙、肝纖維化障礙、腎纖維化障礙、血管纖維化障礙和心臟纖維化障礙，治療或預防心力衰竭或充血性心力衰竭、急性或慢性炎性障礙、原生動物引起的障礙、瘧疾或家禽的球蟲病，以及用於外科手術和器官移植，在手術過程中保護和貯存移植物，用於搭橋手術，用於心臟停搏後的復甦，預防年齡相關的組織改變，製備直接抗衰老或延長生命的藥物，治療和降低甲狀腺毒症中的心臟毒性作用或製備診斷輔助劑。
10.權利要求9中所述的式I化合物和/或其可藥用鹽與心臟毒性和細胞毒性藥物或活性成分組合在製備具有降低心臟毒性和細胞毒性性質的藥物中的用途。
11.權利要求8和/或9中所述的式I化合物和/或其可藥用鹽單獨或與其它藥物或活性成分組合在製備用於治療或預防急性或慢性損傷、局部缺血或再灌注引起的器官和組織的障礙或間接後遺症的藥物中的用途。
12.權利要求8和/或9中所述的式I化合物和/或其可藥用鹽單獨或與其它藥物或活性成分組合在製備用於治療危機生命的心室纖維性顫動的藥物中的用途。
13.權利要求8和/或9中所述的式I化合物和/或其可藥用鹽單獨或與其它藥物或活性成分組合在製備用於治療或預防轉移的藥物中的用途。
14.權利要求8和/或9中所述的式I化合物和/或其可藥用鹽單獨或與其它藥物或活性成分組合在製備用於治療或預防心臟纖維性障礙、心力衰竭或充血性心力衰竭的藥物中的用途。
15.用於人、獸和/或植物保護性用途的藥物，該藥物包括有效量的權利要求1-5中一項或多項所述的式I化合物和/或其可藥用鹽，以及可藥用載體和輔料。
16.用於人、獸或植物保護性用途的藥物，該藥物包括有效量的權利要求1-5中一項或多項所述的式I化合物和/或其可藥用鹽，以及可藥用載體和輔料，還包括其它的藥用活性成分或藥物。
全文摘要
本發明涉及五氟硫烷基苯基取代的苯甲醯基胍、其製備方法、其作為藥物或診斷試劑的用途以及包含這些化合物的藥物。這些五氟硫烷基苯基取代的苯甲醯基胍為式(I)的化合物，其中R1至R5具有權利要求中所述的含義，並且例如適合用作抗心律失常藥，其具有預防梗死、治療梗死以及治療心絞痛的心臟保護性能。這些化合物在發生局部缺血誘導的損傷時，特別是在局部缺血誘導的心律失常的開始階段抑制、甚至預防病理生理過程。
文檔編號A61P33/06GK101014566SQ200580030299
公開日2007年8月8日 申請日期2005年8月27日 優先權日2004年9月11日
發明者H-W·克勒曼 申請人:塞諾菲-安萬特德國有限公司