Pdcd7基因在早期判斷急性髓系白血病預後中的應用的製作方法

2023-05-28 00:46:26 2

專利名稱：：Pdcd7基因在早期判斷急性髓系白血病預後中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及人類PDCD7基因的一種用途。
背景技術：
：人類PDCD7基因全長約16458bp，編碼485個胺基酸多肽鏈。PDCD7基因定位於15q22.31，與鼠ES18基因同源。ES18蛋白在糖皮質激素及十字孢鹼誘導的鼠胸腺瘤細胞(T細胞)凋亡過程中表達增加，且ES18過表達可促進鼠T細胞淋巴瘤細胞的凋亡。目前未見PDCD7在白血病甚至疾病中的研究報導。急性髓系白血病(AcuteMyeloidLeukemia,AML)是一種異質性髓細胞腫瘤，也稱急性非淋巴細胞性白血病，常進展迅速，其特點是由造血幹細胞惡變而形成的原始細胞克隆取代了正常骨髓造血。由於白血病細胞代替了正常血細胞，它們不具備正常血細胞的功能，由此導致貧血，血小板和粒細胞減少而引發一系列併發症。若不經過治療，存活期一般不超過半年。有的病例從診斷到死亡，甚至不過一周，死亡的主要原因是出血和感染。目前標準化療可以獲得約7080%的完全緩解(CompleteRemission,CR)率，但大部分CR後的患者終將復發，甚至一部分患者難以達到CR而成為難治性白血病，治療無效而死亡。目前對AML的預後判斷主要根據患者年齡、染色體核型等指標。但即使是年齡、染色體核型等因素完全相同的患者，他們的預後也不盡相同。因此，為了獲得更好的治療效果，提高患者的存活率，需要早期判斷AML的預後指標指導制定合適的治療方案。故尋找早期判斷預後的敏感性指標具有重要現實意義。但是，現階段有效的判斷指標嚴重不足，從基因水平上研究尋找預後相關的指標已成為研究熱點。
發明內容本發明的目的在於提供一種人類PDCD7基因的用途。發明人通過成熟的螢光定量PCR技術研究發現，PDCD7mRNA在急性髓系白血病細胞中均有表達。通過螢光定量PCR檢測了77例初次診斷並治療前的急性髓系白血病患者骨髓單個核細胞的PDCD7mRNA表達量，並設立缺鐵性貧血、特發性血小板減少性紫癜患者為對照。將所測結果與臨床特徵、治療反應及隨訪結果分析比較，發現PDCD7mRNA表達量大於5%的患者，其復發、難治的比例顯著高於表達量小於5%的患者。PDCD7mRNA表達量大於5%患者的生存期也顯著縮短，隨訪1年時的總生存率僅有45X，而PDCD7mRNA表達量小於5%患者的總生存率高達80%。由此表明，PDCD7mRNA表達量的多少，與患者治療反應和病情的發展密切相關表達量高，患者治療後易復發且治療難度大；表達量低則與之相反。可見，PDCD7mRNA的表達量可以作為判斷AML患者預後的指標，為個體化治療方案的設計提供了理論依據。圖1是PDCD7mRNA表達水平與AML患者生存時間的關係圖；圖2為基因PCR產物的電泳圖，圖中，M為標記帶，l為P-actin產物帶，2為PDCD7mRNA產物帶。圖3是cDNA相對濃度梯度-ACT關係圖。具體實施例方式選取南方醫院血液科2005年9月至2008年7月期間診治的初發AML患者77例，根據臨床表現、細胞形態學和免疫分型及細胞遺傳學特徵全部符合原發性AML診斷標準，記為病例組，其特徵如表1所示；選取20例非惡性血液病患者為對照，診斷及療效標準參照張之南《血液病診斷及療效標準》。病例組中，48例患者隨訪1年以上。表l病例組特徵表tableseeoriginaldocumentpage477例中細胞表面抗原CD33、CD13共同表達47例，伴隨CD34表達55例，伴隨CD14、CDllb表達17例，伴隨淋系抗原表達(CD7、CD9、CD19、CD20)35例。完成染色體核型分析的有57例，染色體異常的17例，其中t(15;17)3例，t(8;21)3例，t(8;21)伴-X2例，t(8;21)伴-Y2例，t(2;17)1例，t(ll;17)1例，t(3;5)1例，+81例，+8伴19q22缺失1例，+101例，+211例。首次誘導化療方案均採用標準劑量DA(柔紅黴素+阿糖胞苷)方案(M3患者予以全反式維甲酸聯合化療)，再次誘導未獲得CR者改用FLAG(氟達拉濱30mg/m2dl-5+阿糖胞苷lg/m2dl-5)、CAG(阿糖胞苷10mg/m2dl-14+阿克拉黴素10mg/m2dl-4)等方案，獲得CR後採用TA(吡柔比星20mg/m2dl-3+阿糖胞苷150mg/m2dl-7)、MA(米託蒽醌8mg/m2dl-3+阿糖胞苷150mg/m2dl-3)、DA、中劑量阿糖胞苷(2gdl_5)治療方案交替使用，有5例行自體幹細胞移植，3例異基因幹細胞移植。CR後治療療程中位數4(014)，隨訪中位時間374(3-1440)天。20例非惡性血液病患者骨髓為對照，其中9例為缺鐵性貧血，11例為特發性血小板減少性紫癜，男性和女性分別為5例和15例，中位年齡36歲(5-58歲)。依據治療反應及生存時間不同，將AML患者分成首療程CR與NR組、1年內存活與l年內死亡組。排除M3型、診斷後首療程化療未完成，或化療l-2個療程後失訪的患者。故77例AML病例中，有52例列入療效分析，其中48例隨訪1年以上。使用SPSS13.0進行統計分析，選取的模型為兩組間比較Mann-WhitneyUtest;兩變量間相關分析Spearmanrankcorrelationanalysis;率的比較chi-squaretest;生存分析Kaplan-Meier曲線；單因素分析、多因素分析CoxRegression。表達量=2—ACTX100%。(CT值是螢光達到閾值的循環數)實驗結果檢測患者骨髓細胞PDCD7mRNA的表達量，結果如下表所示骨髓細胞PDCD7mRNA的表達量與AML亞型的關係tableseeoriginaldocumentpage5注*與非惡性血液病組比較P4〈170>PatentInversion3.37〈210>1〈211>20〈212〉DNA〈213〉人工序列1ggagcagg朋ctca朋gc3g〈210〉2〈211>20DNA〈213〉人工序列〈400〉2cgctg朋gatgatgcgte朋3〈211>18〈212>DNA〈213〉人工序列3cgggaaatcgtgcgtgac〈210>4〈211>19DNA〈213〉人工序列〈400>4cEiggEuaggEuaggctgg朋g說明書6/6頁20201819權利要求PDCD7基因在早期判斷急性髓系白血病預後中的應用。全文摘要本發明公開了PDCD7基因在早期判斷急性髓系白血病預後中的應用指標。通過螢光定量PCR檢測了77例初次診斷並治療前的急性髓系白血病患者骨髓單個核細胞的PDCD7mRNA表達量。將所測結果與臨床特徵、治療反應及隨訪結果分析比較，發現PDCD7mRNA表達量大於5％的患者，其復發、難治的比例顯著高於表達量小於5％的患者。PDCD7mRNA表達量大於5％患者的生存期也顯著縮短，隨訪1年時的總生存率為45％，而PDCD7mRNA表達量小於5％患者的總生存率為80％。PDCD7mRNA的表達量可以作為判斷AML患者預後的指標，為個體化治療方案的設計提供理論依據。文檔編號C12Q1/68GK101781681SQ20091021419公開日2010年7月21日申請日期2009年12月25日優先權日2009年12月25日發明者孟凡義,黃走方申請人:南方醫科大學