一種花葯培養液的製備方法
2023-06-13 14:38:21 1
一種花葯培養液的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種花葯培養液的製備方法，包括如下步驟：配置各種營養物質的母液，根據所需花葯培養液的劑量，將各種營養物質的母液加入蒸餾水中，攪拌均勻，採用稀硫酸或稀鹽酸和稀氫氧化鈉來調節溶液的pH值，並定容，將配置好的培養液進行滅菌後保存。本發明花葯培養液的製備方法工藝簡單、操作便捷，得到的花葯培養液含有大量的營養元素和微量元素，尤其是還添加了生長調節物質和酵母提取物，能滿足花葯培養過程中各個階段的營養需要，有效加快了花葯分裂成細胞團，進而分化成胚狀體，形成愈傷組織，由愈傷組織再分化成植株，由本發明方法得到的花葯培養液中無機養分的數量和比例合適，足以滿足植物細胞在各個階段營養上和生理上的需要。
【專利說明】一種花葯培養液的製備方法
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明涉及一種花葯培養液的製備方法,屬於植物離體培養技術。
【背景技術】
[0003]培養液好比土壤，是組織培養中離體材料賴以生存和發展的基地。現有花葯培養液不能滿足花葯培養過程中各個階段的營養需要，尤其是其中的無機養分的數量和比例不合適，難以滿足植物細胞在各個階段營養上和生理上的需要。
【發明內容】
[0004]發明目的:本發明所要解決的技術問題是提供一種花葯離體培養培養液的製備方法，該方法工藝簡單、操作便捷、成本低。
[0005]為解決上述技術問題，本發明所採用的技術方案為:
一種花葯培養液的製備方法，包括如下步驟:
步驟1，配置100L花葯培養液，稱取75?100g KNO3溶於5L蒸餾水中得到母液a ;稱取25?5 Og NH4 NO3溶於5L蒸餾水中得到母液b ;稱取175?250g KH2PO4溶於5L蒸餾水中得到母液c ;稱取50?75g K2SO4溶於5L蒸餾水中得到母液d ;稱取250?325g CaCl2溶於5L蒸餾水中得到母液e ;稱取25?40g NaCl溶於5L蒸餾水中得到母液f ;分別稱取0.25、.5gZnCl2、0.025?0.04g CuSO4.H2O,0.4?0.75gMnS04.H2O 溶於 5L 蒸餾水中得到母液 g ;稱取FeSO4.7H205-7.5g和乙二胺四乙酸二鈉7.45g溶於5L蒸餾水中得到母液h ；
步驟2，按要求濃度稱好蔗糖、胺基酸、維生素B1、維生素B6、維生素H、生長調節物質以及酵母提取物，分別置於各自的燒杯中，再往各個燒杯中加入I?2ml0.1N (當量濃度)氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度；
步驟3，向培養液器皿中倒入50L蒸餾水，將母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，攪拌均勻後，將步驟2中配置好的各物質加入培養液器皿中，攪拌均勻，繼續加入蒸餾水；
步驟4，調節溶液的PH值為5.8-6.0後定容，得到所需的培養液；
步驟5，將配置好的培養液進行滅菌後保存。
[0006]其中，步驟2中，分別稱取蔗糖100-200g、胺基酸1.3?2.2g、維生素B10.3?0.6g、維生素B60.7?0.8g、維生素H0.5?0.7g、生長調節物質0.06?0.07g以及酵母提取物2?3g。
[0007]其中，所述胺基酸由0.2-0.5gL_天冬醯胺、0.5-0.8gL_胱氨酸和0.6-0.9gL_丙氨酸組成。
[0008]其中，所述生長調節物質由0.01-0.02玉米素和0.05g 6_苄基腺嘌呤組成。
[0009]其中，步驟4中，採用稀硫酸或稀鹽酸和稀氫氧化鈉來調節溶液的PH值。
[0010]其中，步驟5中，所述培養液的滅菌為在高壓蒸汽滅菌鍋內，汽相150°C下，滅菌1h0
[0011]其中，步驟5中，將滅菌後的培養液置於0-3°C保存。
[0012]有益效果:本發明花葯培養液的製備方法工藝簡單、操作便捷，得到的花葯培養液含有大量的營養元素和微量元素，尤其是還添加了生長調節物質和酵母提取物，能滿足花葯培養過程中各個階段的營養需要，有效加快了花葯分裂成細胞團，進而分化成胚狀體，形成愈傷組織，由愈傷組織再分化成植株，由本發明方法得到的花葯培養液中無機養分的數量和比例合適，足以滿足植物細胞在各個階段營養上和生理上的需要。
【具體實施方式】
[0013]根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的內容僅用於說明本發明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發明。
[0014]實施例1
一種花葯培養液，該培養液由無機營養物、碳源、維生素、生長調節物質和有機附加物五類物質組成，載體為水，
其中，無機營養物按以下配比製成=KNO3:150?200mg/L，NH4 NO3:50?100mg/L，KH2PO4:350-500mg/L，K2SO4:100-l50mg/L，CaCl2:500-650mg/L，NaCl:50-80mg/L，ZnCl2:0.5?1.0mg/L, CuSO4.H2O:0.05?0.08mg/L, MnSO4.H2O:0.8?1.5mg/L, FeSO4:1.(l.5mg/L ；其中，所述碳源為蔗糖或葡萄糖；
其中，所述維生素為維生素B1、維生素B6和維生素H ;
其中，所述生長調節物質由以下配比製成:廣2 mg/L玉米素和疒3 mg/L 6-苄基腺嘌
吟；
其中，所述有機附加物為酵母提取物以及胺基酸。
[0015]其中，所述培養液的PH值為5.5?6.5。
[0016]其中，所述培養液的EC值為1.0-l.5ms/cm。
[0017]其中，所述蔗糖或葡萄糖在培養液中的摩爾濃度為0.1-0.2mol/L。
[0018]其中，所述胺基酸為L-天冬醯胺、L-胱氨酸以及L-丙氨酸，其中，L-天冬醯胺、L-胱氨酸和L-丙氨酸在培養液中的摩爾濃度均為5?7mmol/L。
[0019]其中，所述維生素BI在培養液中的摩爾濃度為f 2mmol/L，維生素B6在培養液中的摩爾濃度為1.5-2mmol/L和維生素H在培養液中的摩爾濃度為f 1.5mmol/L。
[0020]其中，所述酵母提取物在培養液中的摩爾濃度為2?3mmol/L。
[0021]上述花葯培養液的製備方法包括如下步驟:
步驟1，配置IOOL花葯培養液，稱取IOOg KNO3溶於5L蒸餾水中得到母液a;稱取5Og NH4 NO3溶於5L蒸餾水中得到母液b ;稱取250g KH2PO4溶於5L蒸餾水中得到母液c ；稱取75g K2SO4溶於5L蒸餾水中得到母液d;稱取325g CaCl2溶於5L蒸餾水中得到母液e ;稱取40g NaCl溶於5L蒸餾水中得到母液f ;分別稱取0.5g ZnCl2、0.04g CuSO4.H2O,0.75gMnS04.H2O溶於5L蒸餾水中得到母液g ;稱取FeSO4.7H207.5g和乙二胺四乙酸二鈉
7.45g溶於5L蒸餾水中得到母液h ；
步驟2,分別稱取200g鹿糖、0.5gL-天冬醯胺、0.8gL-胱氨酸、0.9gL_丙氨酸、0.6g維生素B1、0.8g維生素B6、0.7g維生素H、0.02玉米素、0.05g 6-苄基腺嘌呤以及2g酵母提取物，分別置於各自的燒杯中，再往各個燒杯中加入I?2ml0.1N (當量濃度的)氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度；
步驟3，向培養液器皿中倒入50L蒸餾水，將母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，攪拌均勻後，將步驟2中配置好的各物質加入培養液器皿中，攪拌均勻，繼續加入蒸餾水；
步驟4，用稀硫酸和稀氫氧化鈉調節溶液的PH值為6.0後定容；
步驟5，將配置好的培養液置於高壓蒸汽滅菌鍋內，汽相150°C下，滅菌lh，將滅菌後的培養液置於(T3°C保存。
[0022]實施例2
上述花葯培養液的製備方法包括如下步驟:
步驟1，配置100L花葯培養液，稱取75g KNO3溶於5L蒸餾水中得到母液a ;稱取25 gNH4 NO3溶於5L蒸餾水中得到母液b ;稱取175g KH2PO4溶於5L蒸餾水中得到母液c ;稱取50g K2SO4溶於5L蒸餾水中得到母液d ;稱取250g CaCl2溶於5L蒸餾水中得到母液e ;稱取2 5g NaCl溶於5L蒸餾水中得到母液f;分別稱取0.2 5g ZnCl2、0.025g CuSO4.H2O、
0.4gMnS04.Η20溶於5L蒸餾水中得到母液g ;稱取FeSO4 WH2OSg和乙二胺四乙酸二鈉7.45g溶於5L蒸餾水中得到母液h;
步驟2,分別稱取IOOg鹿糖、0.2gL-天冬醯胺、0.5gL-胱氨酸、0.6gL_丙氨酸、0.3g維生素B1、0.7g維生素B6、0.5g.維生素H、0.01玉米素、0.05g 6-苄基腺嘌呤以及3g酵母提取物；
步驟3，向培養液器皿中倒入50L蒸餾水，將母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，攪拌均勻後，將步驟2中配置好的各物質加入培養液器皿中，攪拌均勻，繼續加入蒸餾水；
步驟4，用稀硫酸和稀氫氧化鈉調節溶液的PH值為5.8後定容；
步驟5，將配置好的培養液置於高壓蒸汽滅菌鍋內，汽相150°C下，滅菌lh，將滅菌後的培養液置於(T3°C保存。
【權利要求】
1.一種花葯培養液的製備方法，其特徵在於:包括如下步驟: 步驟1，配置IOOL花葯培養液，稱取75?100g KNO3溶於5L蒸餾水中得到母液a ;稱取25?5 Og NH4 NO3溶於5L蒸餾水中得到母液b ;稱取175?250g KH2PO4溶於5L蒸餾水中得到母液c ;稱取50?75g K2SO4溶於5L蒸餾水中得到母液d ;稱取250?325g CaCl2溶於5L蒸餾水中得到母液e ;稱取25?40g NaCl溶於5L蒸餾水中得到母液f ;分別稱取0.25、.5gZnCl2、0.025?0.04g CuSO4.H2O,0.4?0.75gMnS04.H2O 溶於 5L 蒸餾水中得到母液 g ;稱取FeSO4.7H205-0.5g和乙二胺四乙酸二鈉7.45g溶於5L蒸餾水中得到母液h ； 步驟2，按要求濃度稱好蔗糖、胺基酸、維生素B1、維生素B6、維生素H、生長調節物質以及酵母提取物，分別置於各自的燒杯中，再往各個燒杯中加入I?2ml0.1N氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度； 步驟3，向培養液器皿中倒入50L蒸餾水，將母液a、母液b、母液C、母液d、母液e、母液f、母液g、母液h依次倒入，攪拌均勻後，將步驟2中配置好的各物質加入培養液器皿中，攪拌均勻，繼續加入蒸餾水； 步驟4，調節溶液的PH值為5.0-6.0後定容，得到所需的培養液； 步驟5，將配置好的培養液進行滅菌後保存。
2.(克當量濃度) 根據權利要求1所述花葯培養液的製備方法，其特徵在於:步驟2中，分別稱取蔗糖10(T200g、胺基酸1.3?2.2g、維生素B10.3?0.6g、維生素B60.7?0.8g、維生素H0.5?0.7g、生長調節物質0.06、.07g以及酵母提取物2?3g。
3.根據權利要求2所述花葯培養液的製備方法，其特徵在於:所述胺基酸由0.2-0.5gL-天冬醯胺、0.5-0.8gL-胱氨酸和0.6-0.9gL_丙氨酸組成。
4.根據權利要求2所述花葯培養液的製備方法，其特徵在於:所述生長調節物質由0.0 0.02玉米素和0.05g 6-苄基腺嘌呤組成。
5.根據權利要求1所述花葯培養液的製備方法，其特徵在於:步驟4中，採用稀硫酸或稀鹽酸和稀氫氧化鈉來調節溶液的PH值。
6.根據權利要求1所述花葯培養液的製備方法，其特徵在於:步驟5中，所述培養液的滅菌為在高壓蒸汽滅菌鍋內，汽相150°C下，滅菌lh。
7.根據權利要求1所述花葯培養液的製備方法，其特徵在於:步驟5中，將滅菌後的培養液置於(T3°C保存。
【文檔編號】C12N5/04GK103436482SQ201310330909
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月1日 優先權日:2013年8月1日
【發明者】譚美蘭 申請人:南京年吉冷凍食品有限公司