茶皂素的應用及其製劑的製作方法

2023-06-13 08:13:46

專利名稱：茶皂素的應用及其製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及茶皂素的應用及其製劑。
背景技術：
現代醫學研究發現，馬拉色菌(Pityrosporum)是人類及溫血動物皮膚上的常駐菌群，屬於嗜脂性擔子菌綱酵母屬。早在上世紀九十年代之前，人們已經在溫血動物皮膚上發現了糠秕馬拉色菌、厚皮馬拉色菌和合軸馬拉色菌；其後的研究又發現了除上述3種以外的球形馬拉色菌、鈍形馬拉色菌、限制性馬拉色菌和斯洛菲馬拉色菌；所述的馬拉色菌主要生長在人類的表皮角質層中，是一種嗜脂性的菌群，主要以皮膚表面的三醯基甘油和游離的脂肪酸為營養。研究還發現，皮脂腺功能的強弱是影響三醯基甘油和游離脂肪酸分泌的主要因素，因此馬拉色菌在皮膚上生長密度因年齡增長和脂質分泌較少而降低。所述的 馬拉色菌以酵母相和菌絲相生長，在正常人皮膚上以酵母相生長，其中糠秕馬拉色菌可單獨以氨酸基為中介生長；同時，馬拉色菌屬於條件性致病菌，可以引起多種疾病，尤其是皮膚病。有大量研究表明，馬拉色菌引起的皮膚疾病是由多種因素綜合作用的結果，該菌的密度、菌種及代謝產物均與疾病的發生有密切關係；此外，馬拉色菌還可引起頭皮屑、脂溢性皮炎、特應性皮炎和銀屑病等。頭皮屑通常是肉眼難以觀察的鱗屑，其存在形式通常是角質化單細胞形式，但當一定量的角質化單細胞黏附在一起時，臨床上就可觀察到片狀的白色鱗屑。Behrman研究資料中，按臨床表現將頭皮屑分為兩型單純糠疹型和脂溢性糠疹型；單純糠疹型為出現在正常頭皮上的灰白疏鬆乾燥的頭屑；脂溢性糠疹型則表現為鱗屑多，且油膩易黏附，可形成蠟樣痂皮，基底為紅色，並伴有少量的黏性滲出。正常頭皮的角質層包含了完全形化並相互緊貼的25-30層角質化細胞，而頭皮屑的頭皮角質層裡通常少於10層角質化細胞，且這些角質化細胞經常角化功能不全，排列不齊，細胞間有裂縫。頭皮屑的產生過程很可能始於一個不連續的，真皮乳頭區的毛細血管擴張；中性粒細胞和單核細胞遷移進入乳頭區、表皮，造成表皮細胞間水腫，部分細胞壞死形成小水皰，隨後顆粒層消失，出現角化不全，逐漸水腫減輕，炎症細胞漸消失，表皮自行修復，角質層表面形成鱗屑。已有大量的臨床和實驗室研究的相關學說證實，馬拉色菌是與頭皮屑病因相關的最重要的微生物。正常的頭皮上分布著多種微生物，密度大約是103-105/mm2，其中包括葡萄球菌、丙酸桿菌和馬拉色菌；馬拉色菌在體內外營養條件不同的情況下，表現為酵母相或菌絲相，其生長有嚴格的脂質需求。而馬拉色菌在分子水平上的不同亞型可以引起臨床和病理上不同的炎症反應和多種疾病，且菌絲相和某些酵母相都可以致病。早在20世紀60年代就有人通過試驗指出，治療頭皮屑使用真菌抑制劑的療效明顯優於細菌抑制劑，還有報導，口服或外用酮康唑、和吡硫鋅等抗真菌藥物可以有效的治療頭屑過多。脂溢性皮炎是一種發生在皮脂溢出基礎上的慢性皮膚炎症。臨床上以頭面部及上背部黃紅色斑片伴油膩性鱗屑及結痂為特徵，並伴有明顯的炎症反應。皮膚表麵皮脂增多及化學成分的改變，使存在於皮膚的正常菌群大量異常增殖，侵犯皮膚從而引起發病。自1874年Malassez首次提出馬拉色菌與脂溢性皮炎的發病有關，馬拉色菌與脂溢性皮炎關係一直存在爭議；Heng等人證實，皮損的消退與馬拉色菌含量下降成正相關。抗真菌藥用於治療脂溢性皮炎後，馬拉色菌數量明顯減少，皮損得到改善，這給馬拉色菌與脂溢性皮炎的關係提供了有力證據。Pechere等人研究發現，馬拉色菌的致病性並不取決於其在皮膚上的密度，而是由馬拉色菌亞型決定的；Tajima等人運用PCR技術分析顯示,患者皮膚上的主要菌種是球形馬拉色菌和限制性馬拉色菌；且脂溢性皮炎與限制性馬拉色菌的特定亞型有關。特應性皮炎以瘙癢、紅斑、脫屑，皮膚肥厚為主要特徵，好發於嬰幼兒、年輕人及青春期後女性，尤其在面頸部多見，其中遺傳因素也起到重要作用。國內外一些文獻表明，特應性皮炎患者血清中IgE水平升高，另外大量研究表明，特應性皮炎患者馬拉色菌特異性IgE抗體陽性率為20% -100%，馬拉色菌為特應性皮炎的病因之一，在臨床治療中，可考慮加用抗真菌藥，但應用時需根據具體情況而定。銀屑病主要表現為炎性紅色丘疹，約米粒至綠豆大小，後逐漸融合為棕紅色斑丘疹及斑塊，邊界清楚，周圍炎性浸潤，表面覆蓋多層乾燥的銀白色鱗屑。國外曾報導以滅活 的生存的糠秕孢子菌做斑貼實驗，在人和兔體表都能引起銀屑病樣皮損；也有研究發現銀屑病患者血清中存在一種抗糠秕馬拉色菌抗體，而糠秕馬拉色菌的可溶性成分(蛋白質)對銀屑病患者的多形核中性粒細胞具備明顯的趨化作用，提示糠秕馬拉色菌可能參與銀屑病的同形反應。茶皂素是從山茶科植物的種子中提取的一種糖式化合物，它屬皂素類，是一種天然非離子型表面活性劑。茶籽中的皂素屬五環三萜類皂苷，由苷元、糖和有機酸構成，其苷元為-香樹精(-amyrin)衍生物，基本碳架為齊墩果烷，糖片段均由四個單糖組成，糖體部分主要有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、以及葡萄糖醛酸等；有機酸部分主要有當歸酸、惕各酸、醋酸和肉桂酸等；有機酸和皂苷元的結合形式為羥基與有機酸形成酯。茶皂素具有表面活性大，溼潤性強，親水親油性好，表面張力小，臨界膠束濃度低，表面性不受PH值和水質影響，對蛋白質具有清潔和保護作用，能起消毒、殺菌、防腐、乳化、分散、潤溼、去汙，發泡等多種表面活性性質。廣泛用於食品添加劑。目前，尚未見茶皂素作為馬拉色菌抑制劑的應用的相關報導。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供茶皂素作為馬拉色菌抑制劑的應用，尤其是在製備治療馬拉色菌引起皮膚疾病的藥物中的應用。本發明還提供了一種含有茶皂素的外用製劑和日化用品。本發明提供了茶皂素作為馬拉色菌抑制劑的應用。其中，本發明所述的茶皂素，(英文名稱tea saponin)是從山茶科植物的種子中提取的一種糖式化合物，它屬皂素類，是一種天然非離子型表面活性劑。所述的茶皂素屬五環三萜類皂苷，由苷元、糖和有機酸構成，其苷元為-香樹精(-amyrin)衍生物，基本碳架為齊墩果烷，糖片段均由四個單糖組成，糖體部分主要有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、以及葡萄糖醛酸等；有機酸部分主要有當歸酸、惕各酸、醋酸和肉桂酸等；有機酸和皂苷元的結合形式為羥基與有機酸形成酯。一般茶皂素為乳白色或淡黃色固體無定形粉末；相對分子質量為1200-2800，熔點為223°C -224°C ;平均分子式為C57H9tlO56 ;水溶液的pH值為5. 7。本發明中，所述的茶皂素可自商業獲得，或者通過本領域技術人員已知的方法，從植物茶籽中提取、化學合成或者生物合成製得。其中，所述的商業獲得的購買廠家及型號較佳的為浙江東方茶業科技有限公司，純度50%或90% ；湖南今漢生物醫藥技術有限公司，純度90%或98%。
所述的茶皂素的提取的方法較佳的為以茶籽餅為原料、濃度為70%_95%的乙醇水溶液為提取液，按照質量比1:4-1:8的比例混合，50-100°C條件下加熱回流提取l_8h ;利用茶籽餅質量2-8倍的DlOl型大孔樹脂吸附提取液後，經O. 2%的氫氧化鈉溶液洗脫至無色；用蒸餾水衝洗至溶液pH中性，再用70%-95%乙醇水溶液洗脫至無色，收集70-95%乙醇水溶液的洗脫液，乾燥，即得茶皂素；所述的茶皂素的提取的方法更佳的為以茶籽餅為原料、濃度為70%的乙醇水溶液為提取液，按照質量比1:8的比例混合，85°C條件下加熱回流提取2h ;利用茶籽餅質量4倍的DlOl型大孔樹脂吸附提取液後，經O. 2%的氫氧化鈉溶液洗脫至無色；用蒸餾水衝洗至溶液PH中性，再用90%乙醇水溶液洗脫至無色，收集90%乙醇水溶液的洗脫液，乾燥，即得
茶皂素；其中，所述乙醇的百分比為體積百分比，所述的氫氧化鈉水溶液的百分比為質量百分比。本發明中，所述的馬拉色菌(Pityrosporum)是人類及溫血動物皮膚上的常駐菌群，屬於嗜脂性擔子菌綱酵母屬；所述的馬拉色菌較佳的為糠秕馬拉色菌(Malassezia.furfur)、厚皮馬拉色菌(Malassezia. pachydermatis)、合軸馬拉色菌(Malassezia.sympodialis)、球形馬拉色菌(Malassezia. globosa)、純形馬拉色菌(Malassezia.obtusa)、限制性馬拉色菌(Malassezia. restricta)或斯洛菲馬拉色菌(Malassezia.slooffiae)。所述的糠批馬拉色菌(Malassezia furfur)較佳的為糠批馬拉色菌(Malasseziafurfur) ATCC44344 ο本發明還提供了茶皂素在製備治療馬拉色菌引起皮膚疾病的藥物中的應用。較佳的，所述的皮膚疾病為頭屑過多、特應性皮炎、脂溢性皮炎或銀屑病中的一種。其中，頭屑過多較佳的為單純糠疹型或脂溢性糠疹型。本發明還提供了一種外用製劑，其包括茶皂素與藥物載體；其劑型為噴霧劑、氣霧劑或軟膏。其中，所述的軟膏較佳的為乳膏。其中，所述的藥物載體為藥學上允許的藥物載體，較佳的為微球、脂質體或微乳液。所述的茶皂素佔藥物載體的質量百分比較佳的為0. 0001%-99% ;更佳的為0.001%_10%。本發明還提供了一種日化用品，其含有茶皂素和化妝用可接受的載體。其中，所述的日化用品較佳的為洗髮水、護髮素、洗手液、沐浴露、乳液或膏霜中的一種。本發明中，所述的外用製劑和/或日化用品的使用方式一般為皮膚外用。在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。本發明所用試劑和原料均市售可得。本發明的積極進步效果在於作為植物提取物的茶皂素，取材方便，是一種潛在的高效低毒藥物，它可作為馬拉色菌抑制劑使用，也可用於製備治療馬拉色菌引起皮膚疾病的藥物；同時，還可進一步用於製備日化產品和外用製劑，有廣闊的應用前景。


圖I為實施例2茶皂素對馬拉色菌抑制實驗中的抑菌圈。
具體實施例方式下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但並不因此將本發明限制在所述的實施例範圍之中。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。實施例I茶皂素的製備。以茶籽餅為原料、濃度為70%的乙醇水溶液為提取液，按照質量比1:8的比例混合，85°C條件下加熱回流提取2h ;利用茶籽餅質量4倍的DlOl型大孔樹脂吸附提取液後，經O. 2%的氫氧化鈉溶液洗脫至無色；用蒸餾水衝洗至溶液pH中性，再用90%乙醇水溶液洗脫至無色，收集90%乙醇水溶液的洗脫液，乾燥，即得茶皂素。實施例2茶皂素(浙江東方茶業科技有限公司)對馬拉色菌抑制實驗。實驗菌株糠批馬拉色菌(Malasseziafurfur, ATCC44344)；培養基馬拉色菌固體培養基葡萄糖40g/L，瓊脂14g/L，蛋白腖10g/L，蒸餾水溶解，調節pH為6. 8^7. 0,115°C高壓滅菌20min ;馬拉色菌液體培養基葡萄糖40g/L，蒸餾水溶解，調節pH為6. 8 7. 0,115°C高壓滅菌20min。實驗方法將受試菌在馬拉色菌固體培養基上傳代培養後，以確保菌落的純化和活力，挑取單克隆至50ml馬拉色菌液體培養基，30°C培養24h，用比濁儀(生物梅裡埃公司)調整其至麥氏4號比濁管濃度。用培養基稀釋菌液，使其最終菌濃度為105CFU/mL，然後吸取IOOul塗在固體培養基上，用管碟法(牛津杯內徑6mm,外徑8mm,高IOmm)測定茶阜素在100mg/ml時的抑菌圈大小，以判斷藥物的抑菌活性。實驗結果顯示，抑菌圈的平均值為21. 0_，表明茶皂素能明顯抑制馬拉色菌的生長(如表I所示，且參照圖I)。表I茶皂素對馬拉色菌的抑制作用
權利要求
1.茶阜素作為馬拉色菌(Pityrosporum)抑制劑的應用。
2.如權利要求I所述的應用，其特徵在於所述的茶皂素購買自浙江東方茶業科技有限公司或湖南今漢生物醫藥技術有限公司。
3.如權利要求I所述的應用，其特徵在於所述的茶皂素由下述方法製得以茶籽餅為原料、濃度為70%-95%的乙醇水溶液為提取液，按照質量比1:4-1:8的比例混合，50-100°C條件下加熱回流提取l_8h ;利用茶籽餅質量2-8倍的DlOl型大孔樹脂吸附提取液後，經O. 2%的氫氧化鈉溶液洗脫至無色；用蒸餾水衝洗至溶液pH中性，再用70%-95%乙醇水溶液洗脫至無色，收集70-95%乙醇水溶液的洗脫液，乾燥，即得茶皂素； 較佳的，所述的茶皂素由下述方法製得以茶籽餅為原料、濃度為70%的乙醇水溶液為提取液，按照質量比1:8的比例混合，85°C條件下加熱回流提取2h ;利用茶籽餅質量4倍的DlOl型大孔樹脂吸附提取液後，經O. 2%的氫氧化鈉溶液洗脫至無色；用蒸餾水衝洗至溶液PH中性，再用90%乙醇水溶液洗脫至無色，收集90%乙醇水溶液的洗脫液，乾燥，即得茶皂素； 其中，所述乙醇的百分比為體積百分比，所述的氫氧化鈉水溶液的百分比為質量百分比。
4.如權利要求I所述的應用，其特徵在於所述的馬拉色菌(Pityrosporum)為糠批馬拉色菌(Malassezia. furfur)、厚皮馬拉色菌(Malassezia. pachydermatis)、合軸馬拉色菌(Malassezia. sympodialis)、球形馬拉色菌(Malassezia. globosa)、純形馬拉色菌(Malassezia. obtusa)、限制性馬拉色菌(Malassezia. restricta)和斯洛菲馬拉色菌(Malassezia. slooffiae)中的一種；其中，所述的糖批馬拉色菌(Malasseziafurfur)較佳的為糖批馬拉色菌(Malasseziafurfur) ATCC44344。
5.茶皂素在製備治療馬拉色菌引起皮膚疾病的藥物中的應用。
6.如權利要求5所述的應用，其特徵在於所述的皮膚疾病為頭屑過多、特應性皮炎、脂溢性皮炎或銀屑病中的一種； 其中，頭屑過多為單純糠疹型或脂溢性糠疹型。
7.一種外用製劑，其包括茶皂素與藥物載體；其劑型為噴霧劑、氣霧劑或軟膏。
8.如權利要求7所述的外用製劑，其特徵在於所述的藥物載體為微球、脂質體或微乳液； 所述的茶皂素佔藥物載體的質量百分比為O. 0001%-99% ;較佳的為O. 001%-10% ； 其中，所述的軟膏較佳的為乳膏。
9.一種日化用品，其含有茶皂素和化妝用接受的載體。
10.如權利要求9所述的日化用品，其特徵在於所述的日化用品為洗髮水、護髮素、洗手液、沐浴露、乳液或膏霜。
全文摘要
本發明公開了茶皂素作為馬拉色菌抑制劑的應用，尤其是在製備治療馬拉色菌引起皮膚疾病的藥物中的應用。本發明還公開了一種含有茶皂素的外用製劑和日化用品。
文檔編號A61Q19/10GK102949405SQ20121022452
公開日2013年3月6日 申請日期2012年6月29日 優先權日2012年6月29日
發明者孫常磊, 朱麗平, 段朝輝, 翟春濤, 趙雪梅, 李成亮 申請人:上海萊博生物科技有限公司