葛根、山楂和紅花黃酮類成分的提取純化工藝的製作方法

2023-06-13 00:47:36

專利名稱：：葛根、山楂和紅花黃酮類成分的提取純化工藝的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種中藥複方的提取方法，具體涉及複方腦得生方中葛根、山楂和紅花的提取方法及其提取物。
背景技術：
：複方腦得生收載於《中國藥典》2005版一部，由三七、川芎、紅花、葛根、山楂組成。治療腦動脈硬化、缺血性腦中風及腦出血後遺症等病症有顯著療效。現代藥理研究表明，葛根總黃酮具有擴張腦血管，解除腦血管痙攣，改善腦循環，增加腦血流量的作用。山楂的主要有效成分為黃酮類化合物，具有降血壓、增加冠脈流量、強心、降血脂等作用。紅花總黃酮具有擴張冠狀動脈、改善心肌缺血、降低血壓、抗腦缺血、保護祌經細胞及抑制血小板活化、緩解血栓形成、減輕血液循環障礙等作用。因此，開發研究複方腦得生方中葛根、山楂和紅花三味藥總黃酮提取物具有重要的意義。目前腦得生製劑多為片劑、蜜丸劑、顆粒劑、膠囊劑。以上各製劑中葛根、山楂、紅花全部或部分以生藥粉入藥，以致服用劑量較大，質量可控性，不符合中藥現代藥化的要求。本研究採用正交實驗設計法對葛根、山楂和紅花三味藥的總黃酮提取純化作了全面系統的研究。內容具有較強的實用價值。
發明內容本發明的目的在於提供了一種複方腦得生方中葛根、山楂和紅花的總黃酮有效部位的提取、純化和提取物的乾燥方法。本發明的又一目的在於提供採用上述方法獲得的葛根、山楂和紅花總黃酮提取物。本發明所述複方腦得生方中葛根、山楂和紅花三味中藥質量比例為葛根261份山楂(去核)157份紅花91份。本發明的一種葛根、山楂和紅花的提取純化方法包括葛根、山楂和紅花乙醇提取液濃縮後，過大孔樹脂柱，水洗，再用乙醇洗脫，濃縮乙醇洗脫液，噴霧乾燥。具體提取純化步驟如下1)、取複方腦得生方中葛根、山楂和紅花飲片，加濃度60-80%的乙醇回流提取三次，第一次加藥材質量10倍量的乙醇提取2小時，第二次加8倍量的乙醇提取1小時，第三次加6倍量的乙醇提取1小時，合併3次提取液，減壓回收乙醇，濃縮到無乙醇味，得提取濃縮液；2)、將步驟l)得到的提取濃縮液加水至每毫升含生藥O.1克，過濾，得濾液；3)、將步驟2)得到的濾液過D-101大孔樹脂柱進行吸附、用水洗和乙醇洗脫，吸附、水洗和乙醇洗脫工藝條件為吸附液流速為l一3倍柱體積/小時，吸附液量為4一5倍柱體積；水洗速率為3倍柱體積/小時，水洗體積為4一6倍柱體積；洗脫用乙醇的濃度為30-60%，流速為l一3倍柱體積/小時，用量為2—6倍柱體積；4)、收集乙醇洗脫液，濃縮至密度為1.05—1.10克/毫升，噴霧乾燥，得到葛根、山楂和紅花的提取物產品，提取物中總黃酮質量含量為78.1%。收集乾燥的提取物產品，封口，放冷，稱重，置乾燥處保存。上述提取純化優選條件所述步驟l)中加濃度70%的乙醇回流提取三次。所述步驟3)中吸附流速為1倍柱體積/小時，吸附量為3.5倍柱體積；水洗速率為3倍柱體積/小時，水洗體積為5倍柱體積；洗脫用乙醇的濃度為40%，流速為3倍柱體積/小時，用量為5倍柱體積。所述步驟4)中噴霧乾燥條件為噴霧乾燥器進風口溫度為170°C，出風口溫度為85°C，霧化盤轉速為20000轉/分鐘。本發明中所述乙醇濃度％是指100體積乙醇水溶液中含乙醇體積分數。發明與現有技術相比，具有如下優點-1、有效成分轉移率高且提取物總黃酮純度高。對腦得生中葛根、山楂和紅花三味藥乙醇回流提取再過大孔樹脂，除去了大量水溶性雜質，純化得到的總黃酮有效部位，總黃酮轉移率達到84.2%、質量含量高達78.1%。2、採用噴霧乾燥可以明顯縮短活性成分的受熱時間，減少成分損失。3、噴霧乾燥粉末較穩定均一，方便下一步製劑。3、本工藝採用D-101大孔樹脂進行分離純化。該樹脂價格較低，而且安全性較高，是目前國內藥品行業使用最多的一種大孔樹脂。圖1葛根、山楂和紅花提取總黃酮工藝流程圖圖2葛根、山楂和紅花提取液樣品溶液上D101大孔樹脂柱吸附總黃酮的洩漏曲線圖3水洗量與水洗液中黃酮含量關係曲線(水洗量考察)圖4水洗量與水洗液中幹膏重關係曲線(水洗量考察)圖540%乙醇為洗脫劑洗脫樹脂柱中總黃酮的洗脫曲線圖l所示工藝流程為取三味中藥飲片(葛根261份、山楂157份、紅花91份)14公斤，用70%乙醇回流提取3次，第一次用乙醇140升，回流提取2小時，第二次用乙醇為112升，第三次用乙醇為84升，分別回流提取l小時，3次得到的山楂提取液合併，回收乙醇，濃縮到無乙醇味，釋至140升，過濾備用；濾液以1倍柱體積/小時速率通過大孔樹脂(藥材D-101大孔樹脂二l:3)，吸附完全後先用以3倍柱體積/小時速率衝5倍柱體積蒸餾水，再用5倍柱體積的40%乙醇以相同流速洗脫，收集洗脫液，洗脫液濃縮至適量體積，噴霧乾燥，得葛根、山楂和紅花的提取物密封保存具體實施例方式下面結合實施例對本發明方法進一步說明。實施例l葛根、山楂和紅花總黃酮的提取工藝實驗(1)使用乙醇回流提取法進行實驗，採用U(34)正交實驗法考察乙醇回流提取葛根、山楂和紅花總黃酮中乙醇濃度、乙醇用量(藥材質量的倍數)、提取時間等因素的工藝參數，並採用紫外一可見分光光度法對提取物中總黃酮的含量進行測定，同時用高效液相法測定葛根素和羥基紅花黃色素A的含量，並以此為指標進行比較分析。結果見表l，表2，表3，表4,表5。表1試驗因素水平表因素水平A乙醇濃度(％)乙醇用B量(倍數)C時間一次數」L,丄、(空白)(小時)1606227082—1380102—1一1表2"(34)正交實驗表總黃酮含葛根素含羥基紅花黃色序號ABCD量(毫克/克生藥)量(毫克/克生藥)素A(毫克/克生藥)1111133.90927.77701.65702122242.94879.90951.96423133361.385111.03532.19664212348.07679.50611.71905223257.681610.37782.02586231143.49889.83912.06867313252.466811.23191.74598321343.79987.75941.60109332149.,679210.16931.9221Kt46.08144.81840.40347.090K249.75248.14346.90246.305K:i48.64951.52157.17851.087R3.6716.70316.7754.782K,9.5749.5058.4589.441K29.9089.3499.86210.327K:19.72010.34810.8829.434tableseeoriginaldocumentpage6表3總黃酮量方差分析tableseeoriginaldocumentpage6表4葛根素量方差分析tableseeoriginaldocumentpage6表5羥基紅花黃色素A量方差分析tableseeoriginaldocumentpage6正交試驗結果表明(見表3，表4,),影響因素最大的為提取時間，乙醇濃度、乙醇用量無明顯影響，直觀分析出最佳提取工藝為A2B3C3.羥基紅花A含量_表6驗證試驗結果_tableseeoriginaldocumentpage7從羥基紅花黃色素A方差分析(表5)看，各因素對羥基紅花黃色素A的含量無顯著性差異。直觀分析出最佳提取工藝為A2B3C3。綜上所述，選定最合適的工藝條件為，70%乙醇，提取3次，提取時間(倍數)分別為2小時(10倍)，l小時(8倍)，1小時(6倍)。(2)驗證試驗取葛根，山楂，紅花飲片(葛根261份、山楂157份和紅花91份)，共3份，按照優選提取工藝進行驗證試驗，驗證試驗結果如表6:驗證試驗結果表明優選的提取工藝穩定可行。實施例2葛根、山楂和紅花總黃酮的大孔樹脂純化工藝實驗用前述優選提取條件提取得到的提取液進行如下實驗-(1)D-101樹脂純化工藝實驗①吸附條件優選實驗採用正交試驗方法以上樣藥液濃度(以樣品中所含有的原藥材量計)、徑高比及上樣流速作為考察因數，應用L9(34)正交表安排試驗，因素及水平安排見表7。對以上9組試驗分別測定總黃酮含量，並進行評價。分析結果見表8，表9。表7因素水平表tableseeoriginaldocumentpage7表8正交試驗結果tableseeoriginaldocumentpage7tableseeoriginaldocumentpage8體積/小時的流速通過。再用蒸餾水以2倍柱體積/小時速度洗脫，每個流分收集10毫升，測定並計算流分中總黃酮量(見圖3)和幹膏重(見圖4)。由圖可知，在5倍柱體積後的水洗脫液中黃酮損失較大，所以確定水洗體積為5倍柱體積。④乙醇洗脫濃度考察另取20g樹脂五份上柱，按以上條件進行吸附，5倍柱體積水衝洗後，分別以適量30%、40%、50%、60%、70%乙醇以2倍柱體積/小時的流速洗脫，測定洗脫液中總黃酮含量，計算洗脫率；揮幹溶劑，將浸膏衡重，精密稱定並計算總黃酮的含量，結果見表IO表10不同濃度洗脫液中總黃酮的量總黃酮純度總黃酮轉移率總黃酮純度x總黃酮轉移率30%0.74900.64910.486140%0.75970.75480.573450%0.69110.77890.538360%0.60570.70110.424770%0.65530.77290.5065綜合考慮總黃酮純度與轉移率選用40%乙醇洗脫。⑤洗脫速率考察按上述條件進行動態吸附，以80%乙醇為洗脫劑，分別以2，3,4倍柱體積/小時的速度洗脫，測定乙醇洗脫物中總黃酮量並計算洗脫率，結果表明洗脫速率為3倍柱體積/小時時洗脫率最高。⑥乙醇洗脫量考察按上述條件進行動態吸附，以40%乙醇為洗脫劑進行洗脫，定量收集流出液並測定其中總黃酮濃度。結果見圖5。結果表明用100毫升(約5倍柱體積)40%乙醇以2倍柱體積/小時流速可以完全洗脫20g樹脂所吸附的黃酮類成分。實施例3中試放大實驗稱取山楂飲片14千克，70%乙醇回流提取3次，第一次用乙醇140升，回流提取2小時，第二次用乙醇112升，回流提取1小時，第三次用乙醇84升，分別回流提取1小時。合併3次提取液，回收乙醇至無醇味，放置過夜，次日用濾布濾除沉澱，稀釋至每毫升含生藥O.l克的溶液，備用。將20千克藥用級D101型大孔樹脂用適量乙醇浸泡，溼法上柱，處理後備用。提取藥液分兩次上樣加入樹脂柱，每次70升，上樣流速為l倍柱體積/小時，上樣後先用5倍柱體積的蒸餾水衝洗，再用5倍柱體積40%乙醇以3倍柱體積/小時流速洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮至小體積(密度約為1.05克/毫升)，噴霧乾燥(噴霧乾燥器進風口溫度為170'C，出風口溫度為85'C，霧化盤轉速為20000轉/分鐘)。收集乾燥提取物，封口，放冷，稱重，置乾燥處保存。採用紫外一可見分光光度法測定提取物中總黃酮的含量，計算轉移率(轉移率二提取物中總黃酮的含量/原藥材中總黃酮的含量X100M)和收膏率(收膏率=提取物總質量/原藥材總質量乂100%)。試驗結果見表11。_表ll中試實驗結果_tableseeoriginaldocumentpage10二批中試放大研究結果表明其山楂總黃酮轉移率達84.23%，提取物中總黃酮含量79.27%。表明本研究的工藝參數可行，工藝條件穩定，可望過渡到產業化生產。權利要求1.一種複方腦得生方中葛根、山楂和紅花的總黃酮有效部位的提取物，其特徵是，所述提取物中總黃酮質量含量為78.1％。2、權利要求1所述的複方腦得生方中葛根、山楂和紅花的總黃酮有效部位的提取物的提取方法，其特徵是提取步驟為1)、取複方腦得生方中葛根、山楂和紅花飲片，加濃度60-80%的乙醇回流提取三次，第一次加藥材質量IO倍量的乙醇提取2小時，第二次加8倍量的乙醇提取1小時，第三次加6倍量的乙醇提取1小時，合併3次提取液，減壓回收乙醇，濃縮到無乙醇味，得提取濃縮液；2)、將步驟l)得到的提取濃縮液加水至每毫升含生藥0.1克，過濾，得濾液；3)、將步驟2)得到的濾液過D-101大孔樹脂柱進行吸附、用水洗和乙醇洗脫，吸附、水洗和乙醇洗脫工藝條件為吸附液流速為l一3倍柱體積/小時，吸附液量為4一5倍柱體積；水洗速率為3倍柱體積/小時，水洗體積為4一6倍柱體積；洗脫用乙醇的濃度為30-60%,流速為l一3倍柱體積/小時，用量為2—6倍柱體積；4)、收集乙醇洗脫液，濃縮至密度為1.05—1.10克/毫升，噴霧乾燥，得到葛根、山楂和紅花的提取物產品，提取物中總黃酮質量含量78.1%。3、如權利要求2所述的複方腦得生方中葛根、山楂和紅花的總黃酮有效部位的提取物的提取方法，其特徵在於所述步驟l)中加濃度70%的乙醇回流提取三次。4、如權利要求2所述的複方腦得生方中葛根、山楂和紅花的總黃酮有效部位的提取物的提取方法，其特徵在於所述步驟3)中吸附液流速為l倍柱體積/小時，吸附液量為3.5倍柱體積；水洗速率為3倍柱體積/小時，水洗體積為5倍柱體積；洗脫用乙醇的濃度為40%，流速為3倍柱體積/小時，用量為5倍柱體積。5、如權利要求2所述的複方腦得生方中葛根、山楂和紅花的總黃酮有效部位的提取物的提取方法，其特徵在於所述步驟4)中噴霧乾燥條件為噴霧乾燥器進風口溫度為170。C，出風口溫度為90。C，霧化盤轉速為20000轉/分鐘。全文摘要複方腦得生方中葛根、山楂和紅花黃酮類成分的提取純化工藝。按質量比取葛根261份，山楂157份和紅花91份，加濃度60-80％的乙醇回流提取三次，三次乙醇加入量分別為藥材質量10、8、6倍量，提取時間分別為2、1、1小時，合併3次提取液，回收乙醇，濃縮到無乙醇味，得到的提取濃縮液，加水至含生藥0.1克/毫升，過濾，濾液過D-101大孔樹脂柱吸附、用水洗和乙醇洗脫，吸附液流速為1-3倍柱體積/小時，吸附液量為4-5倍柱體積；水洗速率為3倍柱體積/小時，水洗體積為4-6倍柱體積；洗脫用乙醇濃度為30-60％，流速為1-3倍柱體積/小時，用量為2-6倍柱體積；收集乙醇洗脫液，濃縮至密度1.05-1.10克/毫升，乾燥，即得總黃酮質量含量78.1％提取物產品。文檔編號A61K36/734GK101269135SQ20081004721公開日2008年9月24日申請日期2008年4月2日優先權日2008年4月2日發明者劉焱文,王光忠申請人:湖北中醫學院