來自山岡單胞菌的低溫蛋白酶及其相關生物材料與應用的製作方法
2023-06-05 04:59:36 1
來自山岡單胞菌的低溫蛋白酶及其相關生物材料與應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了來自山岡單胞菌的蛋白酶及其相關生物材料與應用。本發明所提供的蛋白酶，是如下a)或b)的蛋白質：a)胺基酸序列是序列表中SEQ?ID?No.2的蛋白質；b)將序列表中SEQ?ID?No.2所示的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有蛋白酶活性的蛋白質。該蛋白酶具有較高的酶活性，最適作用pH為7，最適溫度30℃，在10℃時仍保持70％以上酶活力，該蛋白酶為中性低溫金屬蛋白酶。
【專利說明】來自山岡單胞菌的低溫蛋白酶及其相關生物材料與應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物【技術領域】中的一種來自山R單胞菌的蛋白酶及其相關生物材料
與應用。
【背景技術】
[0002]蛋白酶是一類催化肽鏈中肽鍵水解的酶，已廣泛應用於食品、醫藥、洗滌、紡織、製革、發酵和廢物處理等領域，其銷售份額約佔全球用酶的60%，是世界三大工業用酶之一。
[0003]近年來，隨著基因工程、發酵技術的發展，蛋白酶工業得到了飛速的發展，在世界生產蛋白酶工業中約有2/3是依賴微生物發酵生產的，其中利用最多的是芽孢桿菌屬(Bacillus)的細菌。但是，工業化生產的蛋白酶大多為中溫酶，其菌株的生長溫度為30°C以上，蛋白酶的最適溫度為45~50°C (倪永清，顧燕玲，史學偉，鄭曉吉，韓亮，周紅，程國棟.天山一號冰川底部沉積層產蛋白酶耐低溫菌株的篩選及其系統發育[J].微生物學報，2013，53(2): 164 - 172)，極大地限制了蛋白酶在低溫領域的應用。低溫蛋白酶在低溫高效催化、節省能源、熱不穩定等方面有著中溫蛋白酶無法比擬的優越性，因此，目前國內外學者已將研究的熱點轉向尋找和開發新型微生物低溫蛋白酶資源，以滿足日新月異的工業發展和應用的需求。
【發明內容】
[0004]本發明的一個目的是提供一種低溫蛋白酶，該低溫蛋白酶最適溫度為30°C，在30°C~40°C範圍內酶活力較高，400C以上酶活力急驟下降，而在10°C時仍保持在70%以上。
[0005]本發明所提供的低溫蛋白酶，其名稱為Capix)，來源於草甸山崗單胞菌(Collimonas pratensis) JZB120004,是如下 a)或 b)的蛋白質:
[0006]a)胺基酸序列是序列表中SEQ ID N0.2的蛋白質；
[0007]b)將序列表中SEQ ID N0.2所示的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有蛋白酶活性的蛋白質。
[0008]為了使上述(a)中的蛋白質便於純化，可在由序列表中SEQ ID N0.2所示的胺基酸序列組成的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標籤。
[0009]表1標籤的序列
[0010]
【權利要求】
1.一種蛋白質，是如下a)或b)的蛋白質: a)胺基酸序列是序列表中SEQID N0.2的蛋白質； b)將序列表中SEQID N0.2所示的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有蛋白酶活性的蛋白質。
2.編碼權利要求1所述蛋白質的核酸分子。
3.根據權利要求2所述的核酸分子，其特徵在於:所述核酸分子為如下I)或2)或3)所不的基因: 1)其編碼序列是序列表中SEQID N0.1的第228-1319位核苷酸的cDNA分子或DNA分子; 2)核酸序列是序列表中SEQID N0.1的cDNA分子或DNA分子； 3)與I)限定的DNA分子具有90%以上的同源性且編碼權利要求1所述蛋白的cDNA分子或DNA分子。
4.下述Bl)-B12)中的任一種生物材料: BI)編碼權利要 求1所述蛋白質的核酸分子； B2)含有BI)所述核酸分子的表達盒； B3)含有BI)所述核酸分子的重組載體； B4)含有B2)所述表達盒的重組載體； B5)含有BI)所述核酸分子的重組微生物； B6)含有B2)所述表達盒的重組微生物； B7)含有B3)所述重組載體的重組微生物； B8)含有B4)所述重組載體的重組微生物； B9)含有BI)所述核酸分子的轉基因動物或植物細胞系； B10)含有B2)所述表達盒的轉基因動物或植物細胞系； Bll)含有B3)所述重組載體的轉基因動物或植物細胞系； B12)含有B4)所述重組載體的轉基因動物或植物細胞系。
5.製備權利要求1所述蛋白質的方法，包括將權利要求1所述的蛋白質的編碼基因在生物細胞中進行表達得到權利要求1所述蛋白質的步驟；所述生物細胞為微生物細胞、植物細胞或非人動物細胞。
6.製備表達權利要求1所述蛋白質的重組微生物的方法，包括將權利要求1所述的蛋白質的編碼基因導入受體微生物細胞，得到表達權利要求1所述蛋白質的重組微生物的步驟。
7.權利要求1所述的蛋白質在作為蛋白酶的應用。
8.權利要求2或3所述的核酸分子或權利要求4所述的生物材料在製備蛋白酶中的應用。
【文檔編號】C12N1/21GK104004737SQ201410222826
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年5月23日 優先權日:2014年5月23日
【發明者】劉偉成, 張殿朋, 吳慧玲, 盧彩鴿, 劉德文, 劉霆, 董丹, 李潔瓊 申請人:北京市農林科學院