一種瓊脂糖蛋白質晶片載體的活化方法

2023-06-05 17:19:06 4

專利名稱：一種瓊脂糖蛋白質晶片載體的活化方法
技術領域：
本發明涉及蛋白質晶片載體的製備方法，特別是針對瓊脂糖蛋白質晶片載體的活
化方法。
背景技術：
蛋白質晶片是一種用於定量和定性分析的檢測裝置，由於其具有高通量、迅速和微量化的優點，目前廣泛應用於食品安全的檢測、藥物的篩選，疾病的診斷和環境的檢測等各個領域。在製備蛋白質晶片的過程中，通過一定的方法將蛋白質固定於合適的載體上，同時能夠維持蛋白質天然構象是提高蛋白質晶片性能的主要方法。因此，尋找合適的載體和表面修飾方法提高蛋白質的固定效率及反應活性，已經成為製備高質量蛋白質晶片亟待解決的關鍵問題。 玻片以其性能穩定、螢光背景低、表面光滑、廉價等諸多優點，深受蛋白質晶片研究者的關注。通常，載體的表面的修飾方式主要有覆蓋型和小分子修飾兩種。小分子修飾的方法主要包括在玻片載體表面形成氨基、醛基、環氧基等，由於蛋白質為三維的結構，導致在固定的時候產生很大的不穩定性，特別是蛋白質的活性保持方面遇到了很大的挑戰。為了更好的保護固定蛋白質的活性，研究者開發了很多以大分子骨架為覆蓋載體的方式為蛋白質提供良好的保存環境。其中瓊脂糖以其方便、實用、廉價等優點受到了大量研究者的青睞。 目前，瓊脂糖蛋白質晶片的製備主要採用將一定濃度的瓊脂糖覆蓋在載體表面的方式，但是在使用過程中發現瓊脂糖在玻璃表面易發生收縮變形，與玻璃表面相容性較差，在兩相界面易產生微裂紋，結合強度低，導致其力學性能下降，進而對蛋白質晶片的穩定性產生很大的影響。矽烷類偶聯劑在結構中帶有一個或數個活性官能團，具有高的反應活性，能夠有效地改善無機體與高分子材料的界面相容性。

發明內容
本發明的目的是提供一種具有高穩定性、易製備的用於瓊脂糖蛋白質晶片的固相載體。本發明的技術方案主要是基於化學修飾，特別是在固相載體表面引入能夠和瓊脂糖結合的小分子功能基團使得瓊脂糖能夠穩定的和玻璃載體表面進行有效的結合，以彌補現有技術的不足。 本發明涉及一種瓊脂糖蛋白質晶片的載體，其特徵在於載體凹槽的表面耦聯有小分子的基團，所述的基團能於瓊脂糖產生化學交聯。本發明的載體具有性質穩定、易於製備的特點。 本發明涉及的瓊脂糖蛋白質晶片載體的製備方法，其包括1)將凹槽的表面清洗乾淨；2)將矽烷化試劑與凹槽表面孵育並發生反應；3)將殘存在凹槽表面的矽烷化試劑清洗乾淨，並乾燥。 本發明具有的積極效果主要表現在
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1)能夠使得瓊脂糖和玻璃基片緊密的結合，提高瓊脂糖蛋白質晶片的穩定性； 2)通過對玻璃基片表面的處理，降低不同玻璃基片之間的差異； 3)處理方法簡單、性能穩定，將會在瓊脂糖蛋白質晶片的製備中廣泛應用。 以下通過實施例對本發明進行詳細的說明。
具體實施例方式
本發明涉及一種瓊脂糖蛋白質晶片活性載體的製備方法，該載體是一個表面帶有 凹槽，而且凹槽的表面含有活性的氨基。在製備過程中，首先將帶有凹槽的玻璃基片在洗液 中浸泡過夜，用超聲波進行清洗後，將玻璃基片浸入矽烷化試劑中，浸泡10min，然後依此用 丙酮和乙醚對玻璃基片進行清洗，分別清洗三遍後，在6(TC條件下烘乾，即可製得用於瓊脂 糖蛋白質晶片的活性載體。 本發明述及的玻璃基片是指玻璃片，它能夠為蛋白質晶片的反應提供支持。而活 性載體指的是經過矽烷化試劑處理的玻璃基片。 現用玻璃片製備含有1個凹槽的瓊脂糖蛋白質晶片活性載體，具體製備過程包括 如下步驟 1)選取面積為75. 6mmX25. 2mmX2. 5mm的載玻片，該載玻片含有1個 50mmX 18mmX 1. 5mm凹槽，凹槽底部處於同一水平面上。 2)將玻璃基片浸入洗液中浸泡過夜，取出後雙蒸水衝洗乾淨，特別是使凹槽表面清潔。 3)將洗淨的玻璃基片浸入超聲波清洗器中，清洗10min，取出後用雙蒸水衝洗乾淨。 4)將清洗好的載玻片浸入含有0. 2mg/mL矽烷化試劑的溶液中，浸泡15min，取出 後用丙酮清洗三次，然後再用乙醚清洗三次，在60°C的條件下烘乾，得到凹槽表面活化的瓊 脂糖蛋白質晶片的活性載體。
權利要求
一種玻璃基片，是表面有一個凹槽，凹槽的表面帶有氨基的活性玻璃基片。
2. 根據權利要求1所述的玻璃基片，其特徵在於厚度在0. 5-5mm，左右邊緣在同一水 平線上。
3. 根據權利要求l所述的凹槽，其特徵在於凹槽的深度在0.01-lmm，凹槽的底部處於 同一水平線上，凹槽表面的氨基採用矽烷化試劑處理製備。
4. 根據權利要求4所述的凹槽表面矽烷化試劑處理方法，包括以下步驟1) 將玻璃基片在洗液中浸泡過夜2) 從洗液中取出玻璃基片後，用超聲波清洗後，用去離子水衝洗；3) 將玻璃基片浸入矽烷化試劑中，孵育；4) 將孵育後的玻璃基片依此用丙酮、乙醚清洗，乾燥，得到活化的玻璃基片。
5. 根據權利要求4所述的處理方法，其特徵在於所述步驟1)中的玻璃基片厚度為 0. 5-5mm，凹槽的深度在0. Ol-lmm。
6. 根據權利要求4所述的處理方法，其特徵在於所述步驟1)中的洗液為0.01mol/L的重鉻酸鉀溶液。
7. 根據權利要求5所述的處理方法，其特徵在於所述步驟1)中超聲波清洗時間為 lmin-20min，所述去離子水衝洗為三次。
8. 根據權利要求5所述的處理方法，其特徵在於所述步驟2)中的矽烷化試劑為氨基 矽烷的丙酮溶液，濃度在0. 01-2mg/ml。
9. 根據權利要求5所述的處理方法，其特徵在於所述步驟2)中的浸泡的時間為 0.5min-20min。
10. 根據權利要求5所述的處理方法，其特徵在於所述步驟3)中用丙酮清洗1-5次， 每次O. 5-5min，等離子水清洗的時間為20-200s。
11. 根據權利要求5所述的處理方法，其特徵在於所述步驟3)中乾燥的方法為6(TC 烘乾。
12. 權利要求1所述的玻璃基片在製備瓊脂糖蛋白質晶片中應用。
全文摘要
本發明公開了一種瓊脂糖蛋白質晶片活性載體的製備方法，其目的是提供一種表面設有凹槽的瓊脂糖蛋白質晶片的活性載體的製備方法。該瓊脂糖蛋白質晶片的載體是表面設有一個凹槽的玻璃基片，所述凹槽底部表面存在活性基團。其製備方法主要包括以下步驟1)將含有一個凹槽的玻璃基片在洗液中浸泡過夜，然後用超聲波清洗乾淨；2)將玻璃基片浸入矽烷化試劑中，浸泡；3)將玻璃基片依此用丙酮、乙醚清洗，乾燥，得到活化的玻璃基片載體。本發明將在瓊脂糖蛋白質晶片領域具有廣泛的應用前景。
文檔編號G01N33/50GK101738464SQ200810159240
公開日2010年6月16日 申請日期2008年11月19日 優先權日2008年11月19日
發明者張軼群, 李小燕, 李振興, 林洪 申請人:中國海洋大學