一種關於per2蛋白激動劑多肽及其應用的製作方法
2023-06-05 02:35:56 1
一種關於per2蛋白激動劑多肽及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及藥物領域，具體涉及具有促進PER2蛋白表達，治療治療食道癌的多肽。其序列為AAMMANMEIKIC是全新的序列，該多肽可治療食道癌，提高在體內荷瘤小鼠生存率；抑制人食道癌細胞TE1和ECA109的增殖；具有潛在的新藥開發價值。
【專利說明】一種關於PER2蛋白激動劑多肽及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及PER2蛋白激動劑多肽4及其應用，具體涉及具有促進PER2蛋白表達、 治療食道癌的多肽。
【背景技術】
[0002] 食管癌的治療上根據病灶的不同位置、疾病分期可以選擇手術、放療、化療、生物 靶向治療方式。食管癌的手術常切除癌變組織與轉移淋巴結，管狀胃代替其功能。但是手 術難以完全切除癌組織與亞臨床病灶。其次就是放化療，但是這兩種治療方式均對正常組 織器官有明顯副反應，進一步提高療效並減少對正常組織的損傷是值得研究的課題。目前 生物靶向治療腫瘤是非常有前景的，靶向治療是針對腫瘤發生過程中阻斷某個或多個信號 通路，達到治療腫瘤的目的。
[0003] 在探索腫瘤病因，尋找對腫瘤的治療方法過程中，發現生物節律的紊亂與腫瘤的 發生發展有很大關係。生物節律的紊亂與食管癌的發生發展有一定關係。在用現代時間生 物學手段來探測腫瘤節律基因的變化已成為食管癌治療的新興研究課題。
[0004] 生物節律基因表達的PER2蛋白與正常光暗循環條件下均成自發性節律變 化。系列基因中與腫瘤關係最為密切。研究表明，PER2蛋白在食管癌組織中低 表達，而在癌旁組織中高表達，PER2可以看做是一個保護性基因，其表達可以上調抑癌基因 P53，下調癌基因 c-cmyc的表達。PER2的表達可以抑制瘤細胞的增殖、使永生化能力的喪 失，同時可以通過阻滯瘤細胞的G2/M期，達到調控細胞周期增加放療敏感性的目的。
[0005] PER2蛋白功能降低是食管癌發生的一個重要因素。因此，促進PER2蛋白表達，抑 制食管癌發展，是治療食管癌的新靶點。但是，尚未有開發成熟的PER2蛋白激動劑多肽的 治療食管癌的藥物 本專利中的PER2蛋白激動劑多肽4已證明在食管癌中有效，具有在其他腫瘤模型中開 發的前景。
【發明內容】
[0006] 發明目的 本發明提供全新的序列，該序列PER2蛋白激動劑，對食管癌具有很好的療效。
[0007] 技術方案 PER2蛋白激動劑多肽4，其特徵在於其序列為AAMMANMEIKIC。
[0008] 一種藥物組合物，其特徵在於其包含如權利要求1所述多肽與一種以上藥學上可 接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩定劑。
[0009] 所述的藥物組合物，其特徵在於，所述組合物為注射劑。
[0010] 所述的多肽，其特徵在於有效劑量為10mg/kg。
[0011] PER2蛋白激動劑多肽4在製備治療食管癌藥物中的應用。
[0012] 有益效果 利用固相合成法化學合成PER2蛋白激動劑多肽4，該多肽具有全新的序列，該多肽可 治療食道癌，提高在體內荷瘤小鼠生存率；抑制人食道癌細胞TE1和ECA109的增殖；具有 潛在的新藥開發價值。
【具體實施方式】
[0013] 本發明涉及多肽有吉爾生化(上海）合成。
[0014] 實施例1 PER2蛋白激動劑多肽4人食道癌細胞TE1增殖的作用。
[0015] 採用MTT比色法。將對數生長的TE1細胞，以1. 0X105加入96孔培養板中，培 養24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物PER2蛋白激動劑多肽4和 陽性對照藥物長春新鹼；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養48h，分別在 0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h 每孔加入 MTT，作用 4h 後，加入 DMS0，孵育 30min，在酶標 儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細胞生長抑制率=(1_實驗組吸光值/對照組吸 光值）X 100%。計算出實驗藥物的IC50為6. 40 μ Μ。當濃度為6. 40 μ Μ時，對Ecal09增 殖抑制率為70. 3%。
[0016] 實施例2 PER2蛋白激動劑多肽4人食道癌細胞ECA109增殖的作用。
[0017] 採用MTT比色法。將對數生長的ECA109細胞，以1. 0X 105加入96孔培養板中， 培養24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物PER2蛋白激動劑多肽4 和陽性對照藥物長春新鹼；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養48h，分別 ^0h,2h,8hU4h,20h,24h,36h,48h 每孔加入 MTT，作用 4h 後，加入 DMS0，孵育 30min，在酶 標儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細胞生長抑制率=(1_實驗組吸光值/對照組 吸光值）X 100%。計算出實驗藥物的IC50為7. 10 μ Μ。當濃度為7. 10 μ Μ時，對Ecal09 增殖抑制率為60. 8%。
[0018] 實施例3 用腫瘤模型檢測PER2蛋白激動劑多肽4的體內活力。
[0019] 建立Ecal09腫瘤模型，陽性對照藥物長春新鹼；空白組加入相同體積的溶劑，實 驗組設3個劑量：6、12、24 mg/Kg。21天後，觀察小鼠存活數量，計算存活率。結果顯示，PER2 蛋白激動劑多肽4可有效地保護小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達到88. 4%。
[0020] 實施例4 PER2蛋白激動劑多肽對人食道癌細胞TE1裸鼠異種移植腫瘤生長抑制試驗 取對數生長期的人食道癌細胞TE1細胞株，在無菌條件下製備成5X107/ml細胞懸 液，以0. lml接種於裸鼠右側腋窩皮下。用遊標卡尺測量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長至 100-200mm3後動物隨機分組。使用測量瘤徑的方法，動態觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫瘤 直徑的測量次數為每2天1次，每次測量同時還需稱量鼠重。給藥方式均採用尾靜脈注射。 陰性對照組注射等量生理鹽水，每天1次；順鉬組10mg/kg,每周給藥1次；恩度組2. 5mg/ kg，每天給藥1次；多肽高中低組分別以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg,每天給藥1次。腫瘤體 積計算公式： TV=0. 52XaXb2 其中a、b分別表示長寬。根據測量的結果計算出相對腫瘤體積。抗腫瘤活性的評價指 標為相對腫瘤增殖率T/C (%)，計算公式如下： T/C(%) =Tetv/CetvX100% Tetv :治療組RTV ；CETV :陰性對照組RTV 表1多肽對人食道癌細胞ECA109裸鼠異種移植腫瘤生長的抑制作用
【權利要求】
1. PER2蛋白激動劑多肽，其特徵在於其序列為AAMMANMEIKIC。
2. 一種藥物組合物，其特徵在於其包含如權利要求1所述多肽與一種以上藥學上可接 受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩定劑。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特徵在於，所述組合物為注射劑。
4.如權利要求1所述的多肽，其特徵在於有效劑量為10mg/kg。
5.如權利要求1所述的PER2蛋白激動劑多肽在製備治療食道癌藥物中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK104045693SQ201410288236
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月25日 優先權日:2014年6月25日
【發明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達生物科技有限公司