一種北冬蟲夏草的固體培養方法
2023-07-02 10:25:06 3
專利名稱：一種北冬蟲夏草的固體培養方法
技術領域：
本發明是一種提高人工培養北冬蟲夏草(簡稱北蟲草)的功能成分含量的固體培養基配方，屬於北冬蟲夏草的人工栽培的技術領域。專用於提高人工栽培的北冬蟲夏草子實體中的功能成分含量，有利於提高人工北冬蟲夏草的保健功效和藥用價值。
二、技術背景北冬蟲夏草作為著名的食、藥用真菌，其主要活性成分為蟲草素(3』-脫氧腺苷)、蟲草酸(D-甘露醇)及蟲草多糖等。蟲草素具有諸多生理活性成分和醫療保健功效，如抗腫瘤作用、抗病毒作用、抗菌作用、增強免疫功能作用等，並被作為衡量蟲草品質好壞的主要指標。北冬蟲夏草是蟲草素的主要產生菌，因其培養基的配方不同，蟲草菌素的含量也有所不同。用本發明提供的培養基栽培的北蟲草中蟲草素含量是野生冬蟲夏草的幾倍乃至幾十倍，同時蟲草酸和蟲草多糖的含量也很高。提高北冬蟲夏草的品質，主要就是進一步提高蟲草素等活性成分的含量，特別是蟲草素的含量。人們已認識到北冬蟲夏草在醫療保健領域中的重要價值，正積極研究、培養和開發北冬蟲夏草。
目前普遍使用的北冬蟲夏草人工栽培的培養基質中缺乏專門針對提高北冬蟲夏草功能成分蟲草素的生物激勵因子。生產的人工北蟲草功能成分含量偏低。限制了北冬蟲夏草的後繼開發和產業化。因此、在擴大規模和增加產量的同時，提高北冬蟲夏草的內外品質，已成為我們迫切需要解決的問題。
發明內容
技術問題 北蟲草產生蟲草菌素要求培養基能提供絲肽類營養成分，而目前的固體培養基大都採用添加蠶蛹粉提供營養物質。本發明通過改進北冬蟲夏草的固體培養基配方，使得人工北蟲草子實體中功能成分蟲草菌素(3′-脫氧腺苷)含量提高，達到具有推廣性強、效果明顯，無毒副作用，無藥殘的目的。
技術方案 一種北冬蟲夏草的固體培養方法，其特徵在於1000ML蟲草培養營養液中含葡萄糖15-25g、蛋白腖15-25g、硫酸鎂1.5-2.5g、磷酸二氫鉀0.5-1.5g、檸檬酸三氨1.5-2.5g、維生素B1200-250mg；每栽培瓶固體培養基中秈米30-40g、蠶蟲粉0.5-1.5g。
上述一種北冬蟲夏草的固體培養方法，其特徵在於葡萄糖、蛋白腖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1均為分析純。蠶蟲粉為四齡蠶蟲在40℃以下低溫烘乾後粉碎並過60目篩備用。營養液配置方法為先將葡萄糖、蛋白腖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1、水按比例在自來水中溶解，再添加蠶蟲粉、秈米，然後混合均勻，高壓滅菌1.0小時後即可。
有益效果本發明與現有的人工北蟲草固體培養基質相比，具有如下優點(1)目前的北蟲草人工培養基質中大都以蠶蛹粉作為北蟲草生長所需要的蛋白質來源。本研究組對各種生物性和非生物性激勵因子進行了優化組合研究，在配方中添加了四齡蠶蟲粉，北蟲草中蟲草素的含量比原配方提高10％以上，北蟲草產量提高10％以上。
(2)本發明採用活體四齡蠶蟲低溫烘乾粉碎後加入培養基中，避免了採用蠶蛹粉在蠶蛹加工中引起汙染。
(3)本發明所提供的培養基配方，成本低、工藝簡單，生產者容易接受，具有推廣性強、效果明顯，無毒副作用，無藥殘的優點。
具體實施例方式
一種提高人工培養北冬蟲夏草的功能成分含量的固體培養基配方，其組分含量為1000g蟲草培養營養液中中含葡萄糖20g、蛋白腖20g、硫酸鎂2g、磷酸二氫鉀1g、檸檬酸三氨2g、維生素B1200mg；每栽培瓶培養基中秈米35g、蠶蟲粉1g.
其製備方法為(1)、營養液配製方法準確稱量上述營養液中各組分，按比例溶解於所需要量的水中，備用。
(2)、把蠶蟲粉、秈米放入洗淨的耐高溫高壓的的栽培容器(玻璃廣口瓶)，每瓶放入秈米35g、蠶蟲粉1g。
(3)、每瓶加入配製好的營養液55～60ML。
(4)、選用5絲的耐高溫高壓的聚丙烯塑料薄膜封住玻璃瓶口。
(5)、將配製好的培養基放入高壓滅菌鍋，在121℃、1.05Mpa的條件下保持1.0小時。
(6)、將滅菌後的培養基質放入接種室，對接種室進行整體消毒後在超淨工作檯中進行接種生產。
(7)接種後蟲草栽培瓶放進蟲草專用栽培室，按北蟲草生長不同階段的常規培養方法對其溼、光、溼度進行調控。
五、一種提高人工培養北冬蟲夏草中草素含量培養基配方的功效試驗試驗方法由江蘇省農科院食用菌研究開發中心提供北蟲草生產栽培種CM-4。採用對比配方(目前現有的配方)為葡萄糖2％、蛋白腖2％、硫酸鎂0.2％、磷酸二氫鉀0.1％、檸檬酸三氨0.2％、維生素B1微量、秈米93％、蠶蛹粉1g、水1∶1.5，製備方法同上。每種培養基質各小試生產1000瓶。按照人工北蟲草的生產工藝，培養基經接種、發菌、出草。採收得到北蟲草子實體進鼓風乾燥箱低溫烘乾至恆重。計算每瓶得產量平均值。
試驗結果實驗組1000瓶有汙染50瓶。對照組汙染120瓶。
經過計算實驗組平均每瓶烘乾子實體重量為2.75g，對照組每瓶平均產量為2.51g..實驗組比對照組產量平均每瓶增加0.24g，產量提高10％左右。
蟲草素的測定採用HPLC法測定。隨機取樣0.5g。樣品用50％乙醇超聲提取。測定條件為以AgilentODS(4.6mm×250mm，5μl)為色譜柱，檢測波長260nm，流速1ml/min，柱溫25℃條件，乙腈-水進行洗脫。對照品購於中國藥品生物製品檢定所。
經HPLC法測定蟲草素含量。每組測三個平行，結果取平均值。實驗組蟲草素含量為1.342％，對照組蟲草素含量為0.122％.蟲草素含量提高了約10％。
推廣驗證本發明在江蘇省農科院食用菌研究開發中心示範應用了3批次共5萬瓶北蟲草。其蟲草產量和品質都比原來有很大的提高，其中蟲草素的含量提高10％，其子實體的產量提高13％。符合功效試驗結果。
一種提高人工培養北冬蟲夏草中蟲草菌素含量培養基配方功效總結經過試驗和示範應用的結果，證明本發明的配方能提高人工栽培北蟲草子實體中的主要功能成分的含量，蟲草素的含量可提高10％左右。同時也能提高其子實體的產量10％左右。
權利要求
1.一種北冬蟲夏草的固體培養方法，其特徵在於
1000ML蟲草培養營養液中含葡萄糖15-25g、蛋白腖15-25g、硫酸鎂1.5-2.5g、磷酸二氫鉀0.5-1.5g、檸檬酸三氨1.5-2.5g、維生素B1200-250mg；每栽培瓶固體培養基中秈米30-40g、蠶蟲粉0.5-1.5g。
2.根據權利要求1所述一種北冬蟲夏草的固體培養方法，其特徵在於葡萄糖、蛋白腖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1均為分析純。
3.根據權利要求1或2所述一種北冬蟲夏草的固體培養方法，其特徵在於蠶蟲粉為四齡蠶蟲在40℃以下低溫烘乾後粉碎並過60目篩備用。
4.根據權利要求1或2所述一種北冬蟲夏草的固體培養方法，其特徵在於營養液配置方法為先將葡萄糖、蛋白腖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1、水按比例在自來水中溶解，再添加蠶蟲粉、秈米，然後混合均勻，高壓滅菌1.0小時後即可。
5.根據權利要求3所述一種北冬蟲夏草的固體培養方法，其特徵在於營養液配置方法為先將葡萄糖、蛋白腖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1、水按比例在自來水中溶解，再添加蠶蟲粉、秈米，然後混合均勻，高壓滅菌1.0小時後即可。
全文摘要
本發明公開了一種北冬蟲夏草的固體培養方法，屬於北冬蟲夏草的人工栽培的技術領域。目前還未見相同的培養基報導。含葡萄糖、蛋白腖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B
文檔編號A01G1/04GK1650686SQ20051003762
公開日2005年8月10日 申請日期2005年1月6日 優先權日2005年1月6日
發明者張平, 蔣寧 申請人:江蘇省農業科學院