蘆筍總皂苷的提取方法及其應用的製作方法

2023-06-22 23:49:26 1

專利名稱：：蘆筍總皂苷的提取方法及其應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及從植物中提取其有效成分的方法，具體是從天然藥用植物蘆筍中提取有效成分^筍總皂苷的方法。本發明還涉及蘆筍總皂苷在抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
：蘆筍為百合科天門冬屬多年生草本植物。是一種藥食兩用的植物，其根莖入藥，性苦、微辛、微溫、溫肺下氣。成分分析表明，蘆筍中含有游離胺基酸、維生素、微量元素硒等多種營養成分，以及甾體皂苷、多糖、黃酮類等藥用成分，具有極高的藥用價值。現代藥理學研究表明，蘆筍提取物對多種癌細胞均有抑制作用，具有提高人體免疫力、抗衰老等功能，其中甾體皂苷為重要的物質基礎。在蘆筍食品加工過程中，佔蘆筍重量25%~30%左右的老莖和筍皮被作為垃圾處理，此外，過了收穫季節後有大量的老根、莖無法利用，這些根莖中含有豐富的皂苷類物質。如果把這30%的下腳料充分利用起來，從中提取藥用成分，不僅可以開發出新的藥物，還可以變廢為寶，其經濟效益是不可估量的。
發明內容本發明的目的是提供一種蘆筍總皂苷的提取方法，以及蘆筍總皂苷在抗腫瘤藥物中的應用。本發明提供的一種蘆筍總皂苷的提取方法，包括如下步驟-(1)提取取乾燥蘆筍老莖或筍皮，粉碎，用蘆筍重量1030倍的60%90%乙醇提取兩次，每次提取3060min，提取溫度60。C9(TC，將兩次所得提取液合併，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，用去離子水稀釋，按每千克蘆筍加5-8升去離子水；(2)上述溶液用1%氫氧化鈉調pH值至68，並加入無機鹽調節溶液的鹽含量至1.02.OmoL/L;(3)分離上述溶液用大孔吸附樹脂分離，上樣量溶液體積與樹脂柱體積比為12:1;先用水淋洗23個柱體積，再用10%30%乙醇淋洗23個柱體積，然後用60%80%乙醇淋洗34個柱體積，收集60°/。80%乙醇的淋洗液，6(TC減壓濃縮、真空千燥得棕黃色總皂苷。用分光光度法測定上述所得產品的總皂苷含量，可達42.0%以上。步驟(2)中所述水溶液優選pH值為7。步驟(2)中所述無機鹽是氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨中的一種。步驟(3)中所述大孔吸附樹脂選用的柱材料可以是AB-8、DlOl、HPD100中的一種。步驟(3)中所述大孔吸附樹脂分離總皂苷的吸附流速為0.05-0.09ml/cm2.min，洗脫流3速為0.10-0.30ml/cm2,min。上述提取的戸笄總皂苷可以用於抗腫瘤藥物或保健品。戸^總皂苷抗腫瘤效果試驗採用瘤重法、免疫器官重量法和白細胞計數法研究蘆筍總皂苷對S180、H22荷瘤小鼠的體內抗腫瘤作用。不同劑量的總皂苷對腫瘤生長均有不同程度的抑制作用，且與劑量呈較好的量效關係。高劑量組(每kg體重小鼠灌服lg總皂苷)對S180抑瘤率達39.53%，對H22抑瘤率達到34.81%。說明總皂苷具有抗腫瘤效果。總皂苷對小鼠的免疫系統有保護促進作用，表明蘆筍總皂苷可以提高小鼠機體免疫力。本發明總皂苷的含量測定方法用分光光度法定(茴香醛-硫酸法)，顯色條件為樣品揮幹，加入l。/。茴香醛無水乙醇溶液0.2ml，10(TC水浴30min，冷卻後測定。對照品菝葜皂苷元，測定波長429nm。本發明具有如下優點(1)本發明以廢棄物蘆筍老莖或筍皮為提取原料，變廢為寶。(2)本發明純化工藝簡單，提取效率高。提取率可達1.9%2.5%，提取物中蘆筍總皂苷含量可達42.0%以上。(3)本發明使用溶劑安全無毒，價格低廉可回收再用，對環境無汙染。(4)本發明使用的分離材料易於再生，可多次利用。總之，本發明蘆筍總皂苷的製備方法，不僅生產成本低、工藝簡單、無汙染，而且所得總皂苷的收率高、純度高，適合工業化生產。具體實施例方式實施例7取0.2Kg乾燥盧^皮，用70%的乙醇4升、3升分兩次回流提取，首次、二次回流時間均為0.5小時，提取溫度85'C。合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，去離子水稀釋至終體積為2.0升。用1%氫氧化鈉調溶液pH值為7.0，加入NaCl使鹽終濃度為2.OmoL/L。上述溶液上柱分離，柱填料為Dun大孔吸附樹脂(徑高比為l:20)，上樣量為提取液體積與樹脂柱體積比為1.4:1，吸附流速為0.09ml/cm2.min。先用水淋洗2.4個柱體積，再用30%乙醇淋洗2.5個柱體積，然後用70%乙醇淋洗3個柱體積，洗脫流速均為0.22ml/cm2.min。收集70%乙醇的淋洗液，6(TC減壓濃縮、真空乾燥得棕黃色總皂苷粗品。以菝葜皂苷元為對照品，用分光光度法測得總皂苷的含量為43.1%，收率為1.95%。實施例2取0.5Kg乾燥蘆筍皮，用70%的乙醇10升、7升分兩次回流提取，首次、二次回流時間均為0.6小時，提取溫度85'C。合併提取液。過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，去離子水稀釋至終體積為4.5升。1°/。氫氧化鈉調溶液pH值為6.0，加入NaCl使鹽終濃度為1.9鵬L/L。上述溶液上柱分離，柱填料為AB-8大孔吸附樹脂(徑高比為1:18)，上樣量為提取液體積與樹脂柱體積比為1.1:1，吸附流速為0.08ml/cm2.min。先用水淋洗2.5個柱體積，再用25%乙醇淋洗3個柱體積，然後用75%乙醇淋洗3個柱體積，洗脫流速均為0.22ml/cm2.min。收集75%乙醇的淋洗液，6CTC減壓濃縮、真空乾燥得棕黃色總皂苷粗品。以菝葜皂苷元為對照品，用分光光度法測得總皂苷的含量為42.07%，收率為2.33%。實施例3取lKg乾燥蘆筍老莖，用75%的乙醇20升、15升分兩次回流提取，首次、二次回流時間均為0.7小時，提取溫度80'C。合併提取液。過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，去離子水稀釋至終體積為9.0升。1%氫氧化鈉調溶液pH值為7.0，加入NaCl使鹽終濃度為1.8moL/L。上述溶液上柱分離，柱填料為HPD100大孔吸附樹脂(徑高比為1:19)，上樣量為提取液體積與樹脂柱體積比為1.2:1，吸附流速為0.085ml/cra2.min。先用水淋洗2.5個柱體積，再用20%乙醇淋洗2.5個柱體積，然後用70%乙醇淋洗3個柱體積，洗脫流速均為0.22ml/Cm2.min。收集70%乙醇的淋洗液，60'C減壓濃縮、真空乾燥得棕黃色總皂苷粗品。以菝葜皂苷元為對照品，用分光光度法測得總皂苷的含量為42.1%，收率為2.56%。實施例4將上述實施例1得到的蘆筍總皂苷用注射用水溶解，灌胃，高劑量組每鼠給藥1.0g/kg，中劑量組每鼠給藥0.5g/kg，低劑量組每鼠給藥0.25g/kg。陽性藥物環磷醯胺(CY)每鼠給藥30mg/kg，作為S180小鼠腫瘤陽性對照；5-Fu尿嘧啶每鼠給藥50mg/kg，作為H22小鼠腫瘤陽性對照。蘆筍總皂苷對S180、H22荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用效果見表1。盧等總皂苷對S180、H22荷瘤小鼠白細胞的影響見表2。表l戸夢總皂苷對S180、H22荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用(n=10)tableseeoriginaldocumentpage5抑瘤率-陰性組瘤重—給藥組瘤重/陰性組瘤重X100%p<0.05時，有顯著差異。表l結果表明高劑量組和陽性對照組瘤重與陰性對照組存在顯著差異，說明蘆筍總皂苷對S180和H22腫瘤存在一定的抑制作用。表2戶'^總皂苷對S180、H22荷瘤小鼠白細胞的影響(n=10)腫瘤組別劑量t(mg/kg)白細胞數(1S個/L)屍值陰性對照11.57±2.23陽性對照303.33±2.420細S180高劑量100013.53±5.420.312中劑量50010.77±3,580.559低劑量25012.98±4.770.435陰性對照7.79±3.30陽性對照505.22±2.590.096H22高劑量10005.69±2.100.152中劑量5008.97±3.040.柳低劑量2506.93±3.110,575屍值<0.05時，有顯著差異。表2說明蘆筍總皂苷對荷瘤小鼠體液免疫功能有保護作用，能夠促進小鼠機體抗腫瘤能力。權利要求1、一種蘆筍總皂苷的提取方法，包括如下步驟(1)提取取乾燥蘆筍老莖或筍皮，粉碎，用蘆筍重量10～30倍的60％～90％乙醇提取兩次，每次提取30～60min，提取溫度60℃～90℃，將兩次所得提取液合併，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，用去離子水稀釋，按每千克蘆筍加5-8升去離子水；(2)上述溶液用1％氫氧化鈉調pH值至6～8，並加入無機鹽調節溶液的鹽含量至1.0～2.0moL/L；(3)分離上述溶液用大孔吸附樹脂分離，上樣量溶液體積與樹脂柱體積比為1～21；先用水淋洗2～3個柱體積，再用10％～30％乙醇淋洗2～3個柱體積，然後用60％～80％乙醇淋洗3～4個柱體積，收集60％～80％乙醇的淋洗液，60℃減壓濃縮、真空乾燥得棕黃色的蘆筍總皂苷。2、如權利要求1所述的戸筍總皂苷的提取方法，其特徵在於，步驟(2)中所述水溶液優選pH值為7。3、如權利要求1所述的蘆筍總皂苷的提取方法，其特徵在於，步驟(2)中所述無機鹽是氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨中的一種。4.如權利要求1所述的蘆筍總皂苷的提取方法，其特徵在於，步驟(3)中所述大孔吸附樹脂選用的柱材料可以是AB-8、DlOl、HPD100中的一種。5.如權利要求1所述的蘆筍總皂苷的提取方法，其特徵在於，步驟(3)中所述大孔吸附樹脂分離總皂苷的吸附流速為0.05-0.09ml/cm2.min，洗脫流速為0.10-0.30ml/cm2.min。6、如權利要求l-5中任一方法得到的蘆筍總皂苷在抗腫瘤藥物中的應用。全文摘要一種蘆筍總皂苷的提取方法，包括如下步驟採用乾燥蘆筍老莖或筍皮邊角料為原料，用含水醇作為提取溶劑，通過初步分離柱，用去離子水和含水醇作為洗脫劑，真空乾燥得蘆筍總皂苷，皂苷含量可達42.0％以上。蘆筍總皂苷可以用於抗腫瘤藥物或保健品。蘆筍總皂苷對S180和H22荷瘤小鼠的腫瘤生長有明顯的抑制作用，抑瘤率分別達到39.53％和34.81％。本發明所用材料為蘆筍莖皮邊角料，溶劑安全無毒，工藝簡單；提取率可達1.9％～2.5％，對皂苷的利用率高，適合工業化生產。文檔編號A61K36/8965GK101474350SQ200910073678公開日2009年7月8日申請日期2009年1月19日優先權日2009年1月19日發明者擎宋,張立偉,柴秋彥,趙建華申請人:山西大學