一類新穎的十字孢鹼類似物及其製備方法和用途的製作方法
2023-06-14 09:18:51 2
專利名稱：一類新穎的十字孢鹼類似物及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一類新穎的十字孢鹼(Staurosporine)類似物及其製備方法和用途。 本發明用從中國海南三亞紅樹林的土壤樣品中分離得到的鏈黴菌(Sti^ptomyces sp.) FMA,生產出結構新穎的上述類型的化合物。經體外細胞毒活性測試證實，此類化合物對白 血病細胞HL-60和肺癌細胞A549具有細胞毒活性，可作為細胞增殖抑制劑。
背景技術：
癌症是當今危害人類健康的主要疾病之一，嚴重威脅著人類的生命。世界衛 生組織報告，1996年因癌症死亡的人數佔總死亡人數近12%，近20年間惡性腫瘤在死 因中構成比已由 12. 6%升至 17.9% (Janos B. , Bioactive microbial metabolites, J. Antibiot. 2005,58(1) :1_26)。在癌症治療中，化學治療成為了重要方法之一，特別是 對白血病、惡性淋巴瘤等具有較好的療效；但傳統的細胞毒類藥物對於惡性實體瘤存在療 效差、毒副作用大、易產生耐藥性等問題，目前尚未有理想的治療藥物。因此各研究機構 及製藥公司對針對細胞受體、關鍵基因和調控分子的分子靶向藥物高度關注，特別是多靶 點聯合阻斷細胞信號傳導的藥物開發成為抗腫瘤藥物新的發展方向。1977年，Furusaki 等人在一株麴黴Staurosporeus AM-2282 (ATCC 55006)中分離得到了第一個吲哚咔唑類 (indolecarbazole)生物鹼，並通過Χ-ray確定了其結構為具有6，7_位駢有2_酮-吡咯 烷的吲哚咔唑母環結構以及一個吡喃糖環，該糖環通過碳氮鍵連接在母環的1-位和12-位 N 上。(Omura S.，Sasaki Y.，Iwai Y.，Takeshima H，Staurosporine, a potentially important gift from a microorganism, J. Antibiot. 1995,48 (7) :535_548.)。口引哚咔 唑類生物鹼具有抗真菌、抗細菌、抑制蛋白激酶C、抑制血小板凝集以及抗腫瘤作用等多 種藥理活性，其良好的蛋白激酶C(PKC)抑制活性及抗腫瘤活性是研究和報導的熱點。在 過去的30年裡，人們從不同的天然來源中分離得到了大量的吲哚咔唑類生物鹼，並且已 經形成了具有廣闊前景的一系列天然活性產物，其代表性的化合物有Aebeccamycins， Staurosporines, Acyriaflavins, tjipanazoles, K-252 系列，ΑΤ2433 系列等(Sanchez C, Mendez C, Salas J. A, Indolocarbazole natural products !occurrence, biosynthesis, and biological activity. Nat. Prod. Rep. 2006, 23 (6) : 1007-1045.)。目前已有 6 種吲哚 咔唑生物鹼類PKC抑制劑進入了 I-III期臨床研究，其中Lestaurtinib (Cephalon公司)已 被FDA於2006年4月核准作為孤兒藥(患者人數少於20萬人或盛行率小於萬分之一)，用 於治療急性骨髓性白血病(AML)，表明此類化合物具有廣闊的成藥前景(Clinical Trials, gov (a service ofthe US National Institutes of Health). Available at http:// clinicaltrials. gov ；Further information available at http://www. cephalon. com ； Undevia S.D.，Vogelzang N. J.，et al，Phase I clinical trial of CEP-2563 dihydro chloride,a receptor tyrosine kinase inhibitor，inpatients with refractory solid tumors. Invest. New Drugs，2004，22，449-458.)。本發明人從一株分離自海南三亞紅樹林 土壤樣品的鏈黴菌Str印tomyces sp. FMA的發酵物中發現2個結構新穎的糖環為2，4-雙苷
3化的吲哚咔唑生物鹼，其對白血病細胞HL-60和肺癌細胞A549具有細胞毒活性，可作為細 胞增殖抑制劑。目前尚未見任何對這2個化合物的化學結構及細胞增殖抑制活性的報導， 因此市場上也尚未見有與此有關的藥物。
發明內容
本發明旨在提供一類結構獨特的、2-脫氧糖環為2，4-雙苷化的具有細胞毒活性 的吲哚咔唑類生物鹼。本發明的目的還在於提供這類新化合物的製備方法及其在製備細胞增殖抑制劑 中的用途。本發明首次從鏈黴菌Str印tomyces sp. FMA的發酵物中發現了一類具有細胞毒活 性的吲哚咔唑類生物鹼，如式I所示
權利要求
一類新穎的十字孢鹼類似物，其特徵在於結構為式I其中R1～R8、X1、X2和M均可代表 H、 OH、 OMe、 NH2、 NO2、 F、 Cl、 Br、 I。G代表 H、 (CH2)nOY、 (CH2)nNH2、 (CH2)nAr(Y＝ H、Glycosyl、amino acids，n＝1 4)。X1、X2為 H、 OH、＝O。FSA00000122582800011.tif
2.權利要求1所述的式I化合物前藥形式，如磷酸酯、氨基甲酸酯等，當以這種形式給 藥時，其在體內轉變為活性形式起效。
3.權利要求1所述的式I的2個天然產物——化合物1，其中R1 R8= -H，G = H, X1 X2 = -H，M = -0H,化合物 2，其中 R1 R8 = -H，G = H，X1 X2 = -H，M = -H，結構式 分別為
4.權利要求3所述的式I化合物的製備方法，其特徵是液體發酵培養鏈黴菌 Streptomyces sp. FMA，獲取含有上述式I化合物的發酵物，然後從發酵物中分離純化出式 I化合物1和化合物2。
5.權利要求4所述的製備方法，將所述發酵物過濾後分為發酵液和菌絲體；發酵液部 分直接用等量乙酸乙酯萃取三次，合併萃取液，減壓濃縮至幹，得到發酵液的乙酸乙酯提取 物。菌絲體用80%丙酮水溶液超聲破碎提取3次，合併提取液，減壓濃縮至不含丙酮後，用 等量乙酸乙酯萃取三次，減壓濃縮至幹，得到菌絲體的乙酸乙酯萃取物。將發酵液和菌絲體 的乙酸乙酯提取物合併後得到總浸膏後，利用減壓矽膠柱層析、Sephadex LH-20柱色譜和 RP-18反相矽膠柱色譜，最後經HPLC分離純化(甲醇-水65 35)洗脫得式I化合物1和 2。
6.權利要求5所述的式I化合物的微生物製備方法，其特徵是以16SrRNA基因序列如 GenBank中登陸號為FJ261967的微生物菌株，通過發酵法製備。
7.權利要求1所述的式I化合物在製備細胞增殖抑制劑的用途。
8.權利要求1所述的式I化合物在製備細胞增殖藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及一類新穎的十字孢鹼類似物及其製備方法和用途。本發明用從中國海南三亞紅樹林的土壤樣品中分離得到的鏈黴菌FMA(Streptomyces sp.FMA，菌種保藏編號CCTCC M 2010021)生產出2個結構新穎的上述類型的化合物。經體外細胞毒活性測試證實，該類化合物對白血病細胞HL-60和肺癌細胞A549具有細胞毒活性，可作為細胞增殖抑制劑。
文檔編號C07D491/22GK101948472SQ201010185370
公開日2011年1月19日 申請日期2010年5月20日 優先權日2010年5月20日
發明者徐小雄, 朱偉明, 楊春麗, 林海鵬, 洪葵, 王乂, 隋金蕾 申請人:中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所;中國海洋大學