通關藤藥材及製劑指紋圖譜的建立方法及應用的製作方法
2023-06-09 03:01:21 2
通關藤藥材及製劑指紋圖譜的建立方法及應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種通關藤藥材及製劑的指紋圖譜建立方法及其在通關藤藥材及製劑的質量控制中的應用，同時公開了通關藤藥材及製劑中酚酸類及甾體皂苷類的指紋圖譜及其測定方法和應用。本發明利用酚酸類和甾體皂苷類指紋圖譜控制通關藤藥材及其製劑的質量，以此對通關藤藥材真偽、產地和品質進行鑑別和控制，使通關藤藥材及其製劑的質量有了真正可控制的標準，確保通關藤藥材及其製劑的質量穩定。本發明通過測定通關藤藥材及其製劑酚酸類及甾體皂苷類的指紋圖譜控制其質量的方法操作簡單，穩定可靠。
【專利說明】通關藤藥材及製劑指紋圖譜的建立方法及應用
[0001] 本申請是申請日為2011年5月18日、發明名稱為"通關藤藥材及製劑指紋圖譜的 建立方法及應用"的中國專利申請CN 201110128793. 1的分案申請。
【技術領域】
[0002] 本發明涉及一種中藥藥材及其製劑的質量控制方法，特別涉及通關藤藥材及其制 劑高效液相色譜法指紋圖譜的建立方法，以及由此方法得到的通關藤藥材及其製劑的標準 指紋圖譜。
【背景技術】
[0003] 通關藤系蘿蘑科（Asclep iadaceae)牛奶菜屬植物通光散[Marsdenia tenacissima(Roxb. )Wight et Arn]的乾燥藤莖，又名烏骨藤、扁藤、下奶藤、黃木香、大苦 藤等，始載於《滇南本草》，收載於1974年版《雲南省藥品標準》、1977年版《中國藥典》及 2010年版《中國藥典》。
[0004] 通關藤味苦，性微寒。入肺、胃、膀胱經。有清熱解毒，止咳平喘，散結止痛，敗毒抗 癌，祛風除溼，通乳利尿，活血生肌，催乳的功能。通關藤根、藤、莖、葉藥用，主治肺炎，支氣 管炎，支氣管哮喘，咽喉炎，扁桃體炎，膀胱炎，疔瘡腫毒。治瘡瘍，咳喘，喉痛，胃痛。據《抗 癌中藥方選》記載："主治腫瘤如食道癌、賁門癌、胃癌、白血病、何杰金氏病、宮頸癌、肺癌 等。兼治疾病如上呼吸道感染、支氣管炎、支氣管哮喘、小便不利"。
[0005] 目前控制通關藤藥材質量的方法主要包括性狀鑑定、顯微鑑定、薄層鑑定、理化鑑 定及含量測定等方法。含量測定主要通過利用分光光度法測定通關藤中留體皂苷含量來達 到控制通關藤藥材質量的目的。
[0006] 發明專利CN100434088C公開了一種從通關藤中提取的靜脈給藥製劑，其製備工 藝是將通關藤提取液制為浸膏，再向浸膏中加入藥用輔料成適合供靜脈滴注給藥的劑型， 功能主治為清熱解毒，化痰軟堅，在臨床上主要用於食道癌、胃癌、肺癌、肝癌，並可配合放 療、化療的輔助治療。
[0007] 目前通關藤靜脈給藥製劑的質量控制方法主要依據標準 WS-10630(ZD-0630)-2002,主要檢測注射液中的總固體、pH、蛋白質、草酸鹽、樹脂、鞣製、鉀 離子、熱源等，以及利用分光光度法測定注射液中總酚酸含量並將其作為注射液的質量控 制指標。
[0008] 留體皂苷類成分是有文獻報導的公認的通關藤藥材及製劑的主要活性成分。然而 通關藤藥材以留體皂苷含量為質量控制的指標，而其注射液則以總酚酸含量為質量控制的 指標，並且單一的某成分含量測定並不能完全反映藥材及注射液的整體特徵、藥效作用，也 不能很好的控制通關藤藥材及其注射液的質量。
【發明內容】
[0009] 本發明涉及通關藤藥材及其製劑高效液相色譜法指紋圖譜的建立方法，以及由此 方法得到的通關藤藥材及其製劑的標準指紋圖譜。通過測定通關藤藥材及其注射液的指紋 圖譜有效地控制通關藤藥材及其注射液的質量，彌補了現有質量控制技術的不足，從而確 保通關藤藥材及其注射液的有效性、安全性、穩定性和均一性。
[0010] 本發明解決其技術問題所採用的技術方案是：用高效液相色譜法建立通關藤藥材 及其注射液的指紋圖譜，從而有效的控制通關藤藥材及其注射液的質量。具體包括如下步 驟：
[0011] -、通關藤藥材的留體皂苷類指紋圖譜建立方法及質量控制方法
[0012] 1、通關藤藥材留體皂苷類成分指紋圖譜的建立方法
[0013] (a)供試品的製備：取通關藤藥材適量，粉碎，過篩，精密稱取藥材粉末lg，精密加 入甲醇40ml，再稱重；40KH Z超聲提取10分鐘以上，自然冷卻，用甲醇補足重量，振搖混合均 勻；過濾，取續濾液20ml揮幹，殘渣用甲醇Iml溶解，經0. 45 μ m微孔濾膜過濾，即得供試品 溶液。
[0014] (b)參照物溶液的製備：精密稱取Tenacissosides A(由南京聖和藥業有限公司 研究院植化室提供）12mg，置於50ml容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，參照物溶 液即得。
[0015] Tenacissosides A 結構式為：
[0016]
【權利要求】
1. 一種通關藤注射液質量控制的方法，其特徵在於：包括以下步驟： (a) 待測通關藤注射液指紋圖譜的測定： (1) 取待測通關藤注射液，按如下方法處理並測定待測通關藤注射液的酚酸類指紋圖 譜： (1. 1)供試品的製備：取通關藤注射液，經0. 45 y m濾膜過濾，續濾液即為供試品溶液， (1. 2)參照物溶液的製備：精密稱取綠原酸對照品適量，加50%甲醇製成每lml含 20 Ug的溶液，即得， (1. 3)色譜條件：以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑的色譜柱；流動相A為0. 05 %磷 酸水溶液，流動相B為0. 05%磷酸乙腈溶液，梯度洗脫：0?20min :98% A - 96% A，2% B ^ 4 % B ；20 ~ 70min ：96 % A ^ 93 % A, 4 % B ^ 7 % B ；70 ~ llOmin ：93 % A ^ 90 % A, 7% B - 10% B ;110 ?115min :90% A - 85% A，10% B - 15% B ;115 ?116min :85% A - 98% A，15% B - 2% B ;平衡時間10分鐘；流速1. Oml/min ;檢測器：紫外檢測器；檢測 波長300nm ;柱溫25°C，理論板數按綠原酸峰計算應不低於6000， (1. 4)測定：分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各20 iil，注入液相色譜儀，測定， 記錄0分鐘?116分鐘的色譜峰，得到通關藤注射液的酚酸類指紋圖譜；和 (2) 取待測通關藤注射液，按如下方法處理並測定待測通關藤注射液的留體皂苷類指 紋圖譜： (2. 1)供試品的製備：取通關藤注射液，經0. 45 y m濾膜過濾，續濾液即為供試品溶液， (2. 2)參照物溶液的製備：精密稱取Tenacigenoside A 12mg，置於50ml容量瓶中，力口 甲醇定容，搖勻，參照物溶液即得， (2. 3)色譜條件：以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑的色譜柱；流動相A為水，流動相 B 為乙腈，梯度洗脫：0 ?110. Omin :90% A - 44% A，10% B - 56% B ;110. 0 ?110. lmin : 44% A - 90% A，56% B - 10% B ;110. 1 ?120. Omin :90% A - 90% A，10% B - 10% B ; 流速0. 8ml/min ;柱溫35°C，檢測器：蒸發光散射檢測器；霧化氣體流速：1. 5-3. 5L/min ;漂 移管溫度：80_115°C， (2. 4)測定：分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各20 iil，注入液相色譜儀，測定， 記錄0?120分鐘的色譜峰，得到通關藤注射液的甾體皂苷類指紋圖譜；和 (b) 通關藤注射液質量控制：將待測通關藤注射液的酚酸類或/和留體皂苷類指紋圖 譜與標準指紋圖譜對比，以特徵峰計算，相似度不低於0. 80的注射液質量合格，其中所述 通關藤注射液的酚酸類標準指紋圖譜包括11個共有峰，其中5號峰為綠原酸對照峰，各 特徵峰的相對保留時間為：1號峰：〇. 26±10%、2號峰：0. 50±10%、3號峰：0. 55±10%、 4 號峰：0. 94±10 %、5 號峰：1. 00±10 %、6 號峰：1. 10±10 %、7 號峰：1. 15±10 %、8 號 峰：1. 25±10%、9 號峰：1. 39±10%、10 號峰：1. 45±10%、11 號峰：1. 53±10% ;和所述 通關藤注射液的留體皂苷類標準指紋圖譜包括8個共有峰，其中7號峰為Tenacigenoside A對照峰，各特徵峰的相對保留時間為：1號峰：0. 23±10 %、2號峰：0. 36±10%、3號 峰：0. 60±10 %、4 號峰：0. 62±10 %、5 號峰：0. 66±10 %、6 號峰：0. 97±10 %、7 號峰： 1. 00±10%、8 號峰：1. 01±10%。
【文檔編號】G01N30/86GK104391065SQ201410444439
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2011年5月18日 優先權日:2011年3月4日
【發明者】王勇, 李邇娜, 錢金葉, 欽松, 沈振濤, 張倉 申請人:南京聖和藥業有限公司