一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法
2023-06-09 02:22:56 1
一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法
【專利摘要】本發明公開了一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法。步驟如下：首先將含有大腸桿菌的。質粒注入無菌離心管中；高速離心旋轉3分鐘；然後顛倒混勻10-15秒；冰浴10分鐘，出現白色沉澱物；取上清液，注入另一高溫滅菌的離心管；加入2倍提及的飽和粉；緩慢搖晃約一分鐘；取上清液再加入等體積的氯仿；高速離心；加入3-4倍提及預熱的無水乙醇，靜置20分鐘；室溫沉澱；沉澱物中加入緩衝液即可；提取後的質粒需要在37攝氏度的恆溫環境下保存；加入無水乙醇之前需要加入微量RNA。本發明的有益效果是，成本較低、重複性好，轉化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。
【專利說明】一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種生化實驗室的試驗方法，具體來說一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法。
【背景技術】
[0002]質粒(Plasmid)是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區DNA原有的能夠自主複製的較小的DNA分子(即細胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質粒雖然都是環狀構形，然而目前也發現有少數的質粒屬於線性構形，它存在於許多細菌以及酵母菌等生物中，乃至於植物的線粒體等胞器中。天然質粒的DNA長度從數千鹼基對至數十萬鹼基對都有。質粒天然存在於這些生物裡面，有時候一個細胞裡面可以同時有一種乃至於數種的質粒同時存在。質粒的套數(copy number)在細胞裡從單一到數千都有可能。有時有些質粒含有某種抗藥基因(如大腸桿菌中就有含有抗四環素基因的質粒)。有一些質粒攜帶的基因則可以賦予細胞額外的生理代謝能力，乃至於在一些細菌中提高它的致病力。一般來說，質粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性的作用。它是基因工程最常見的運載體。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法，步驟如下:首先將含有大腸桿菌的。質粒注入無菌離心管中；高速離心旋轉3分鐘；然後顛倒混勻10-15秒；冰浴10分鐘，出現白色沉澱物；取上清液，注入另一高溫滅 菌的離心管；加入2倍提及的飽和粉；緩慢搖晃約一分鐘；取上清液再加入等體積的氯仿；高速離心；加入3-4倍提及預熱的無水乙醇，靜置20分鐘；室溫沉澱；沉澱物中加入緩衝液即可。
[0004]本發明中，提取後的質粒需要在37攝氏度的恆溫環境下保存。
[0005]本發明中，加入無水乙醇之前需要加入微量RNA。
[0006]本發明的有益效果是，成本較低、重複性好，轉化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。
【具體實施方式】
[0007]—種對大腸桿菌質粒進行提取的方法，步驟如下:首先將含有大腸桿菌的。質粒注入無菌離心管中；高速離心旋轉3分鐘；然後顛倒混勻10-15秒；冰浴10分鐘，出現白色沉澱物；取上清液，注入另一高溫滅菌的離心管；加入2倍提及的飽和粉；緩慢搖晃約一分鐘；取上清液再加入等體積的氯仿；高速離心；加入3-4倍提及預熱的無水乙醇，靜置20分鐘；室溫沉澱；沉澱物中加入緩衝液即可。提取後的質粒需要在37攝氏度的恆溫環境下保存；
加入無水乙醇之前需要加入微量RNA。
[0008]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護範圍並不局限於此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術範圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改 變，都應涵蓋在本發明的保護範圍之內。
【權利要求】
1.一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法，其特徵在於，步驟如下:首先將含有大腸桿菌的；質粒注入無菌離心管中；高速離心旋轉3分鐘；然後顛倒混勻10-15秒；冰浴10分鐘，出現白色沉澱物；取上清液，注入另一高溫滅菌的離心管；加入2倍提及的飽和粉；緩慢搖晃約一分鐘；取上清液再加入等體積的氯仿；高速離心；加入3-4倍提及預熱的無水乙醇，靜置20分鐘；室溫沉澱；沉澱物中加入緩衝液即可。
2.如權利要求1所述的一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法，其特徵在於，提取後的質粒需要在37攝氏度的恆溫環境下保存。
3.如權利要求1所述的一種對大腸桿菌質粒進行提取的方法，其特徵在於，加入無水乙醇之前需要加入微量RNA。
【文檔編號】C12N15/10GK103602665SQ201310534590
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月4日 優先權日:2013年11月4日
【發明者】劉軍 申請人:劉軍