生物防治菌Lnu-12的發酵條件的製作方法
2023-06-06 04:46:06 3
生物防治菌Lnu-12的發酵條件的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種生物防治菌Lnu-12的發酵條件。本發明以番茄葉黴病菌為指示菌,針對生防菌Lnu-12的發酵條件進行了研究,比較在不同的營養條件和培養條件下,生防菌株抗生素的產生情況。確定生物防治菌Lnu-12產生抗生素的最佳培養基配方為:玉米粉4.0%,KNO30.2%,FeSO40.02%,NaCl0.02%,CaCO30.2%。最佳發酵條件為:發酵培養基的初始pH是7.0,培養溫度是28℃,搖床速度180r/min,培養時間為5天。本發明為該菌株的進一步生產、開發等工作提供科學依據。CCTCC NO:M201455420141106
【專利說明】生物防治菌Lnu-12的發酵條件
【技術領域】
[0001] 本發明屬於微生物發酵【技術領域】。具體地涉及生物防治菌Lnu-12的發酵培養條 件確定及優化。
[0002] 本發明所稱的生物防治菌Lnu-12,命名為鏈黴菌Lnu-12 (Streptomyces sp. lnu-12),已於2014年11月6日,在中國典型培養物保藏中心保藏,保藏編號為CCTCC NO :M2014554〇
【背景技術】
[0003] 農作物病蟲害是我國的主要農業災害之一,農作物的生長由於受到病蟲害的侵蝕 而造成大量減產,利用化學藥劑防治害蟲的方法,是目前農作物防治害蟲的最常用方法,如 不用化學藥劑防治,農產品產量的一半將被病、蟲和草害奪去。但大量使用劇毒農藥以及殘 留性化學農藥,則容易造成汙染,通過食物鏈危害人畜健康。農藥量已相應增加,殘留毒性 加劇,害蟲天敵被摧殘,有一些害蟲更加泛濫。由於化學農藥的公害問題日益嚴重,近年來, 生物防治作為植物病害防治的一項重要措施,已引起人們的高度重視。生物防治是利用有 益生物或其他生物來抑制或消滅有害生物的一種防治方法。因此開發高效,抗菌譜廣的生 物防治菌具有重要的意義。
【發明內容】
[0004] 農用抗生素是微生物的次級代謝產物,其生產水平不僅取決於菌種本身的性能, 而且還受營養條件、pH值大小、溫度高低、甚至發酵時間等多種因素的影響和調控,這些因 素相互作用又相互制約。
[0005] 本發明的目的是提供一種高效,抗菌譜廣的生物防治菌Lnu-12,命名為鏈黴菌 Lnu-12 (Str印tomyces sp. lnu-12),已於2014年11月6日,在中國典型培養物保藏中心保 藏,保藏編號為CCTCC NO :M2014554。
[0006] 本發明的另一目的是提供優化的生物防治菌Lnu-12的發酵條件,為Lnu-12的工 業化生產和應用提供理論基礎。
[0007] 本發明的鏈黴菌Lnu-12,是從瀋陽市東陵區蔬菜大棚土壤中分離篩選而得。將土 壤樣品稀釋1〇 5,利用高氏一號培養基,採用常規的平板劃線分離法進行分離培養,挑取放 線菌單菌落,編號備用,篩選而得。
[0008] 1、鏈黴菌Lnu-12形態特徵:
[0009] Lnu-12在高氏一號培養基上生長良好,在菌落邊緣無吸水斑,無可溶性色素產生。 顯微鏡下觀察,氣生菌絲髮達,多分枝;孢子絲多為直或波曲形,無緊密螺旋;孢子呈圓形、 卵圓形。
[0010] 2、鏈黴菌Lnu-12生理生化特性:
[0011] 明膠液化、過氧化氫實驗、纖維素水解、卵磷脂酶實驗均呈陽性;牛奶凝固與腖化、 澱粉水解、MR實驗、硫化氫實驗、色氨酸分解實驗、硝酸鹽還原實驗均為陰性;可利用葡萄 糖、果糖、木糖、乳糖、澱粉、蔗糖、半乳糖、纖維二糖作為碳源生長,生理生化反應特性與澱 粉鏈黴菌一致。
[0012] 3、鏈黴菌Lnu-12的16S rDNA序列分析方法:
[0013] (1)鏈黴菌Lnu-12的DNA提取採用反覆凍融法,以此為模板進行PCR擴增。
[0014] (2) PCR 引物:正向引物 BSF8/27 :5,-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3,;
[0015] 反向引物 BSR1541/1522 :5,-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3,。
[0016] (3) PCR引物由上海生物工程有限公司合成。
[0017] (4) PCR反應體系(總體積29 μ L):
【權利要求】
1. 生物防治菌Lnu-12的發酵培養基,其特徵在於:發酵培養基的碳源為玉米粉,氮源 為 KN03。
2. 如權利要求1所述的生物防治菌Lnu-12的發酵培養基,其特徵在於:所述的發酵 培養基的組成如下:按重量百分比,玉米粉2. 0-4. 0%,KN030. 1-0 . 3%,FeS040 . 01-0 . 02%, NaCl 0? 01-0. 03%,CaC030. 1-0. 3%,餘量為水。
3. 如權利要求2所述的生物防治菌Lnu-12的發酵培養基,其特徵在於:所述的發酵 培養基的組成如下:按重量百分比,玉米粉4. 0%,KN030. 2%,FeS040. 02%,NaCl 0. 02%, CaC030 . 2%,餘量為水。
4. 如權利要求1、2或3所述的生物防治菌Lnu-12的發酵培養基,其特徵在於:所述 的生物防治菌Lnu-12,為鏈黴菌Lnu-12 (Streptomyces sp. lnu-12),保藏編號為CCTCCNO : M2014554。
5. 生物防治菌Lnu-12的發酵條件,其特徵在於:將鏈黴菌Lnu-12用斜面菌種培養基 活化,活化後的菌株製備成菌懸液,置於權利要求3所述的發酵培養基中,調節初始pH7. 0, 培養溫度28°C,裝液量50ml/250ml,三角瓶搖床速度180rpm/min,發酵5天。
6. 如權利要求5所述的生物防治菌Lnu-12的發酵條件,其特徵在於:所述的斜面菌種 培養基是:可溶性澱粉 20g,KN03lg,NaCl 0? 5g,K2HP040. 5g,蒸餾水 1000ml,pH7. 2。
7. 如權利要求5或6所述的生物防治菌Lnu-12的發酵條件,其特徵在於:所述的 生物防治菌 Lnu-12,為鏈黴菌 Lnu-12 (Streptomyces sp. lnu-12),保藏編號為 CCTCCN0 : M2014554。
【文檔編號】C12N1/20GK104480038SQ201410691634
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月25日 優先權日:2014年11月25日
【發明者】朱春玉, 佘曉雙, 張茂盛, 鄭甜甜, 潘思明, 劉宏生 申請人:遼寧大學