具有抗微生物及免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種新菌株的製作方法

2023-05-26 02:10:46 3

專利名稱：具有抗微生物及免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種新菌株的製作方法
具有抗微生物及免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種
新菌株本發明涉及具有抗微生物及免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種 (Lactobacillus paracasei subsp. paracasei) &大量科學研究已報導了發酵食品(特別是乳製品)中存在的特定微生物對健康的 有益影響。這些微生物被通稱為「益生菌」。根據目前普遍接受的定義，益生菌是「活的微生 物，其在以適當量攝入時，對宿主健康具有有益影響」(FA0/WH0關於益生菌在包括含有活乳 酸菌之奶粉在內的食品中的健康和營養特性的評價報告，科爾多瓦，阿根廷，2001年10月 1-4 日)。已經發現，攝入含有益生菌的食品能對健康產生有益影響(尤其是通過腸道菌群 的再平衡)、提高對感染的抵抗力，並調節免疫應答。用於人類食品中的益生性微生物通常為乳酸菌，主要屬於乳桿菌屬 (Lactobacillus)和雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)，尤其是屬於副乾酪乳桿菌副乾酪亞 種(專利申請號EP0794707中描述的菌株)的物種。但是，對健康的有益影響並不是同一屬甚至同一種的所有細菌所共有的。它們通 常只存在於某些菌株中；此外，觀察到的效果可能在益生性菌株(包括同一種中的菌株)之 間存在定性和/或定量的差異。微生物要被考慮為有可能用作益生菌，則必須滿足以下標準中的至少一項，理想 地為幾項-對可能存在於腸道菌群中的病原微生物表現出抑制活性，該活性可以是由於能 粘附於腸道細胞從而阻止或減少病原體的粘附，或是由於能產生可抑制該病原體的物質， 或是由於這兩種特性的組合。-表現出免疫調節特性，尤其是免疫刺激和/或抗炎特性。此外，如果該微生物旨在摻入乳製品中，則其應該優選地在乳中表現出令人滿意 的生長。最後，它應該在所摻入食品的生產和貯存過程中以及該食品被消費者攝入後保持 良好的生存力，以使其能夠到達腸並在腸環境中存活。不過，需要注意的是，雖然生存力是滿足目前「益生菌」的定義所必需的，但已發 現，一些與益生菌菌株相關的有益效果即便在不存在活菌時也能夠獲得，其歸功於某些細 菌級分或其培養上清液中的活性級分。例如，PCT申請W02004093898中描述了通過對CNCM 1-2219菌株的培養上清液中進行分級分離而得到的免疫調節製備物。本發明人現已成功分離了滿足上述標準的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種的新菌株。本發明一個主題為此菌株，其根據布達佩斯條約於2006年11月9日以保藏號 1-3689保藏於CNCM(法國微生物培養物保藏中心)。CNCM 1-3689菌株具有以下特徵-形態學革蘭氏陽性微生物，細小杆狀，獨立或短鏈。-發酵以下糖類(用api50 CH strip-API MRS培養基在37°C下48小時所得結果)核糖、半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、甘露醇、N-乙醯葡糖胺、熊果苷、纖維二 糖、麥芽糖、乳糖、海藻糖、松三糖、D-松二糖、D-塔格糖、葡萄糖酸。-存在SEQID NO :1序列的單個CRISIS基因座，其包含以核苷酸序列SEQ ID NO: 2代表的重複序列。此外，它還具有抗微生物特性，這導致對培養基中病原微生物生長的強抑制能 力，所述病原微生物尤其是大腸桿菌(Escherichia coli)、腸炎沙門氏菌(Salmonella enteritidis)和單核細胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)。CNCM 1-3689菌株還具有免疫調節(尤其是抗炎)特性。本發明的主題還包括可通過CNCM 1-3689菌株的誘變或遺傳轉化而獲得的副乾酪 乳桿菌副乾酪亞種菌株。優選地，這些菌株保留CNCM 1-3689菌株的抗微生物及免疫調節 特性。它們可以是這樣的菌株，其中CNCM 1-3689菌株的一個或多個內源基因發生突變，例 如為了修飾其某些代謝特性(如該菌株代謝糖類的能力、其對腸道運輸的耐性、其對酸的 抗性、其後酸化(post acidification)或其代謝物產生)。它們也可以是用一個或多個目 的基因對CNCM 1-3689菌株進行遺傳轉化而產生的菌株，使得可以例如賦予所述菌株以額 外的生理特徵，或是表達有治療或疫苗意義的蛋白質，其期望通過所述菌株進行施用。這些菌株也可以通過以下方式由CNCM 1-3689菌株獲得通過用於隨機或定點誘 變以及乳桿菌遺傳轉化的常規技術，如Gury等(Arch Microbiol.，182，337-45，2004)或 Velez 等(Appl Environ Microbiol.，73，3595-3604，2007)所述，或是通過稱為「基因組 改組(genome shuffling) 」 的技術(Patnaik 等 Nat Biotechnol, 20, 707-12, 2002 ；Wang Y.等，J Biotechnol.，129，510-15，2007)。特別地，這些菌株具有序列 SEQ ID N0:1 的 CRISPR基因座。本發明的主題還包括獲得具有抗微生物和/或免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副 乾酪亞種菌株的方法，其包括對CNCM 1-3689菌株進行誘變或遺傳轉化的步驟。本發明的主題還包括從本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種菌株中獲得具有抗微生 物和/或免疫調節特性的細胞級分的方法。所述細胞級分特別是得自所述菌株培養物的 DNA製備物或細菌細胞壁製備物。它們也可以是培養物上清液或上清液的級分。本發明的主題還包括組合物，其含有本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種菌株或從所 述菌株中獲得的細胞級分。這些組合物可以特別地為乳發酵物，將本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種菌株與一 種或多種其它(任選地為益生性)乳酸菌菌株組合在一起。作為乳酸菌菌株的實例，值得 一提的是保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)和嗜熱鏈球菌(Sti^ptococcus thermophilus)菌株。它們也可以是食物產品，特別是乳製品，或是藥用或化妝用產品，所述產品含有本 發明所述副乾酪乳桿菌副乾酪亞種菌株或從所述菌株中獲得的細胞級分。當所述菌株以活菌形式存在時，它們將優選以至少IO5Cfu/克的比例存在、有利地 為至少IO6Cfu/克產品，更有利地為至少IO7Cfu/克，甚至更有利地為至少IO8Cfu/克。可從下文的進一步描述中更清楚地理解本發明，所述描述是指展示CNCM 1-3689 菌株抗微生物、免疫調節和抗感染特性以及該菌株的分子分型的實施例。實施例1 將CNCM 1-3689菌株的特性與已知益生菌株進行比較
將CNCM 1-3689菌株的特性與多種以益生特性知名的現有技術菌株進行比較。這些菌株的清單在下文表I中給出。表 I
權利要求
1.具有抗微生物及免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(LactcAacillus paracasei subsp. paracasei)菌株，其特徵在於所述菌株是以保藏號1-3689保藏於CNCM 的菌株。
2.具有抗微生物及免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種菌株，其特徵在於所述菌 株可通過誘變或遺傳轉化而得自權利要求1的菌株。
3.用於獲得具有抗微生物和/或免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種菌株的方 法，其特徵在於所述方法包括對CNCM 1-3689菌株進行誘變或遺傳轉化的步驟。
4.用於獲得具有抗微生物和/或免疫調節特性的細胞級分的方法，其特徵在於所述細 胞級分得自權利要求1和2中任一項的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種菌株。
5.組合物，其包含權利要求1的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種菌株或者根據權利要求4的 方法獲得的細胞級分。
6.權利要求4的組合物，其特徵在於所述組合物為食品。
全文摘要
本發明涉及具有抗微生物及免疫調節特性的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種新菌株，還涉及含有所述菌株的組合物。
文檔編號A23C9/123GK102066550SQ200980118761
公開日2011年5月18日 申請日期2009年4月16日 優先權日2008年4月18日
發明者伊莎貝爾·尚博, 塔瑪拉·什莫克維納, 安妮·德呂埃納, 安妮-凱薩琳·維蘭, 蒂埃裡·聖丹尼斯, 詹弗蘭科·格龍波內, 阿特姆·赫列布尼科夫 申請人:達能日爾維公司