一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因的製作方法
2023-06-19 11:17:01
一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因Prx1的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明還公開了含有上述卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因的表達載體和利用該載體轉化的重組微生物，還公開了利用上述微生物製備重組卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因的方法。本發明採用基因工程技術，生產重組卵形鯧鰺過氧化物還原酶蛋白。
【專利說明】一種卵形鯧鯪過氧化物還原酶基因
【技術領域】
[0001] 本發明屬於基因工程【技術領域】，具體涉及的是一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 及含有該基因的表達載體和重組菌株，以及通過重組菌株得到的重組蛋白。
【背景技術】
[0002] 過氧化物還原酶（Peroxiredoxins，Prxs)是生物體內一類重要的抗氧化酶類，通 過催化H 2O2和脂質氫過氧化物還原，避免細胞受到進一步損傷。所有Prx在N末端都含有 一個保守的Cys殘基，隸屬於過氧化物酶家族，與其他過氧化物酶相比，最大特點是絕大部 分Prx在體內以Trx為唯一氫供體。1988年，Kim釀酒酵母裡發現Prx。此後，人們相繼在 原生生物、植物、動物、寄生蟲中，乃至古細菌和真細菌體內都發現了這種酶。根據所含Cys 殘基數目不同，可把過氧化物還原酶分為2類：（1)1-Cys Prx。該型在52位有一個高度保 守的Cys殘基，如在人體中的Prx6 ; (2)典型2-Cys型。52位和172位上分別有一個保守 的Cys殘基，同時C-端有一個保守的Cys，如Prxl-4 ; (3)非典型2-Cys型。C-端含額外兩 個較低保守性的Cys殘基，N-端帶正電荷胺基酸殘基分散於疏水性胺基酸序列中，如Prx5。 因此，過氧化物還原酶開發和應用研宄已成為國內過飼料科學和藥理學研宄熱點，在動植 物轉基因工程及藥物開發領域有著廣闊的前景。
[0003] 卵形娼鰺（Trachinotus ovatus)隸屬脊索動物門（Chordata)，硬骨魚綱 (Osteichthyes)，隹盧形目（Perciformes)，隹盧亞目（Percoidei)，錄科（Carangidae)，為名貴 食用魚類，在我國南方海域已有相當的人工養殖規模。然而，近年來卵形鯧鰺病害頻發，弓丨 起了較高的死亡率，成為制約卵形鯧鰺養殖產業可持續發展的技術瓶頸之一。目前，還未有 人對卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因進行研宄。
【發明內容】
[0004] 本發明的第一個目的在於提供一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl (Peroxiredoxin 1型）的cDNA和由此推斷的胺基酸序列。
[0005] 本發明的第二個目的在於提供包含上述卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的表 達載體和利用該表達載體轉化的重組微生物。
[0006] 本發明的第三個目的在於提供一種從所述的微生物製備重組卵形鯧鰺過氧化物 還原酶基因 Prxl的過程。
[0007] 本發明的第一個目的是通過如下技術方案來實現的：一種卵形鯧鰺過氧化物還原 酶基因 Prxl的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0008] 由其推斷的卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的胺基酸序列如SEQ ID :2所示。
[0009] 本發明的卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的全長基因是以轉錄組測序得到卵 形鯧鰺過氧化物還原酶序列，以卵形鯧鰺肝臟總RNA反轉錄得到的cDNA為模板，然後經 Smart-RACE方法擴增得到末端序列，最後經序列拼接獲得卵形鯧鰺過氧化物還原酶cDNA 基因全長序列。
[0010] 本發明用於表達卵形鯧鰺過氧化物還原酶重組蛋白的過氧化物還原酶成熟肽基 因序列是以卵形鯧鰺過氧化物還原酶cDNA為模板，經PCR方法擴增而得到的，它來源於卵 形鯧鰺過氧化物還原酶全長基因的成熟肽區域所對應的基因片段。
[0011] 按照上述的卵形鯧鰺過氧化物還原酶重組蛋白的成熟肽基因序列，它正好是卵形 鯧鰺過氧化物還原酶全長基因128bp至721bp (相當於第43至第240位胺基酸）的片段， 其核苷酸序列及其所編碼的胺基酸序列如下所示。
[0012] 卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因的cDNA，它的核苷酸序列如下所示：
[0013]
[0014]
【權利要求】
1. 一種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1 所示。
2. -種卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl，它的胺基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
3. 包括權利要求1所述的cDNA的表達載體。
4. 包括權利要求1所述的cDNA的表達載體pRSET-Prxl。
5. 製備重組卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的方法，其特徵是：包括用權利要求3 所述的表達載體轉化寄主細胞，培養轉化體，獲得重組的卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因。
6. 根據權利要求5所述的方法，其特徵是：其中寄主細胞是大腸桿菌。
7. -種重組卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl，包括用權利要求3所述的表達載體轉 化寄主細胞，培養轉化體，從培養物獲得重組的卵形鯧鰺過氧化物還原酶基因 Prxl的步驟 的方法製備。
【文檔編號】C12N9/08GK104480126SQ201410735312
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月5日 優先權日:2014年12月5日
【發明者】張殿昌, 王龍, 郭華陽, 馬振華, 張楠, 江世貴 申請人:中國水產科學研究院南海水產研究所