人工表面活性物質混合液及其製備與應用的製作方法
2023-06-11 08:10:16 1
專利名稱：人工表面活性物質混合液及其製備與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物製劑領域，涉及一種含有肺表面活性物質的混合液的配比，及其 製備方法與其在藥物中的應用。
背景技術：
肺表面活性物質(Pulmonarysurfaetant，PS)主要是由肺泡II型細胞 合成和分泌的一種脂蛋白複合物，是維持正常呼吸功能的重要物質。PS是一種 複合磷脂，含85% 90%磷脂，8% 10%蛋白質，5%中性脂肪及少量的無機 鹽。在磷脂中，磷脂醯膽鹼(Phosphatidyleholine，PC)佔60 % 50 %，磷脂醯甘油 (Phosphatidylglycerol, PG)佔 5% 10%，還包括磷脂醯肌醇(phosphatidylinositol, PI)、神經鞘磷脂(Sphingomyelin，SPH)、磷脂醯絲氨酸(Phosphatidylsersne，PSe) 等。PC是磷脂中的主要成分，其中又以雙飽和磷脂醯膽鹼，即二棕擱醯磷脂醯膽鹼 (Dipalmitoylphosphatidyleholine, DPPC)為主，其約佔磷脂總量的50%，是最主要的表 面活性物質。因水分子對其他極性分子有一定的親和力，而對非極性分子有排斥作用，在肺 泡液體表面DPPC分子的非極性部分(飽和脂肪酸)受排斥向外排列形成單分子層。這種 結構減少了原在表面的液體分子，從而降低了表面張力。PS中的蛋白成分包括非特異性及特異性蛋白。肺表面活性物質相關蛋白 (surfactant-associated protein, SP)是肺特異性蛋白質，目前已知的有四種，即SP_A、B、 C、D。PS中該特異性蛋白雖僅佔1 2%，但具有重要的生理功能。在周期性呼吸運動中， 單純的DPPC不能迅速從液體底層中吸附到表層，進入表層的DPPC分子也不能很快地散開 形成單分子層，而PS蛋白可促進磷脂向液體表層的吸附和分布。疏水蛋白SP-B和SP-C促 進磷脂吸附及擴散分布的功能最強。它們獨立發揮生理效應，互相無協同作用。與SP-C相 比，SP-B的功能更強一些。親水蛋白SP-A也有類似的生理功能，但作用比SP-B和SP-C弱。急性呼吸窘迫症候群(Acute respiratory distress syndrome, ARDS)是指嚴 重感染、創傷、休克等肺內外襲擊後出現的以肺泡毛細血管損傷為主要表現的臨床症候群， 屬於急性肺損傷(Acute lung injury，ALI)是嚴重階段或類型。其臨床特徵呼吸頻速 和窘迫，進行性低氧血症，X線呈現瀰漫性肺泡浸潤。新生兒呼吸窘迫症候群(Neonatal respiratory distress syndrome, NRDS)又禾爾月市透明膜病(Hyaline membrane disease, HMD)，發病率和死亡率都很高，是早產兒圍產期死亡的重要原因，由於早產兒肺泡II型細 胞分泌肺表面活性物質PS缺乏所致。臨床表現為生後不久即出現進行性呼吸困難和呼吸 衰竭；病理以肺泡壁上附有嗜伊紅透明膜和肺不張為特徵。1980年PS首次被臨床應用後，根據來源不同，將PS藥物分為4類第一類天然 型PS (Natural Pulmonary Surfaetant)從動物肺或人羊水中提取。主要從豬肺和小牛肺 灌洗液或肺勻漿中製備；第二類改進的天然型PS在天然型PS中補充適當比例的某些PS 主要成分，使天然型藥物更加有效；第三類人工型，由人工合成的PS主要磷脂成分或其它 代用品按一定比例配製而成，其主要特點是不含PS蛋白質；第四類合成的「天然」型PS由人工合成的PS主要磷脂成分加一定比例的用基因工程生產的PS蛋自質配製而成。根據臨床研究結果，天然型PS和改進型PS療效肯定、起效快、對NRDS的療效特別顯著。附圖簡述
圖1.不同配方差示掃描熱量圖不同配方加入不同濃度的SP_B、KL4後差示掃描 熱量圖對比研究。圖2.不同配方體外表面張力測定研究
發明內容
本發明涉及一種用於治療NRDS和ARDS得含有肺表面活性物質的混合液的配比， 及其製備方法與其在藥物中的應用。所述的混合液由天然蛋白SP-B或SP-C或其具有表面活性的多肽，脂質，表面活性 齊U，緩衝液組成；其特徵在於由下述配方組成的溶液天然蛋白SP-B(SP-C)或表面活性多肽 0. 01 10% w/v脂質1 90% w/v表面活性劑0. 01 10% w/v緩衝液組成餘量上述的天然蛋白SP-B(SP-C)為人或哺乳類動物的天然肺表面活性蛋白質。上述的天然蛋白SP-B(SP-C)的多肽為人或哺乳類動物SP-B(SP-C)的具有表面活 性的部分胺基酸序列，可由天然產物裂解獲得或人工合成獲得。上述的多肽優選人表面活性多肽KL4。序列結構為賴氨酸_亮氨酸-亮氨 酸-亮氨酸-亮氨酸-賴氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-賴氨酸-亮氨 酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-賴氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-賴氨酸 (KLLLLKLLLLKLLLLKLLLLK)。上述的脂質為天然脂質或人工合成脂質。選自二硬脂酸磷脂醯乙醇胺、二棕櫚酸 磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、膽固醇、神經鞘氨醇，神經磷脂，神經醯胺，腦苷脂，腦硫脂，神 經節苷脂，葡萄糖苷(脂)醯鞘氨醇，4-羥雙氫(神經)鞘氨醇；L-a-磷酸卵磷脂、血小板 激活因子、磷脂醯甘油，磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、磷脂醯肌醇-4-磷酸、磷脂醯肌醇-4、 5-二磷酸鹽、心磷脂，磷脂酸，溶血磷脂。磷脂醯乙醇胺-NH2末端基團、包括己醯胺基團、 十二烷基醯胺基團、磷脂醯巰乙胺、丁二醯基團、戊二醯基團、十二烷羧基基團、生物素基 團、磷脂醯乙二醇、生物素化的磷脂帽。溶血磷脂膽鹼、溶血磷脂醯乙醇胺、溶血磷脂醯甘 油、溶血磷酸甘油酯、溶血磷脂酸、烷基磷酸膽鹼、氧化的脂質、生物素化的脂質、縮醛磷脂、 聚合的磷脂、滷代磷脂、聚PEG化磷脂的一種或多種以任何比例混合的混合物。上述的脂質優選二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)，棕櫚醯油醯甘油(POPG)的一種或 兩種以任何比例混合的混合物。上述的表面活性劑為離子型表面活性劑和非離子型表面活性劑。上述的表面活性劑優選油酸、硬脂酸的一種或兩種以任何比例混合的混合物。上述的緩衝液為任意人體可接受的離子型緩衝液。緩衝液選自磷酸鹽，鹽酸鹽，碳 酸鹽，硼酸鹽，檸檬酸鹽，乙酸_乙酸鈉，Tris緩衝液的一種或多種種以任何比例混合的混 合物。
上述的混合液，用於新生兒及成人呼吸窘迫綜合症和與表面物質缺乏或功能異常 有關的其它疾病。
實施例
實施例1肺表面活性物質的混合液及其製備配方DPPC23gPOPG8g油酸4gSP-BIg磷酸鹽緩衝液 加至IOOg製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將DPPC、POPG按上述比例溶 入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝液加入 1 %的SP-B和油酸，加入混合凍幹的DPPC、POPG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終 濃度達到 SP-B1-2%、DPPC 20-30 %、P0PG5-15%，分裝備用。實施例2肺表面活性物質的混合液及其製備配方DPPC23gPOPG8g油酸4gSP-B0. 5gSP-C0. 5g磷酸鹽緩衝液 加至IOOg製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將DPPC、P0PG、油酸按上述比例 溶入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝液加 入0. 5%的SP-B和0. 5%的SP-C，加入混合凍幹的DPPC、P0PG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶 解即得，使終濃度達到 SP-BO. 5-l%,SP-C0. 5-1%, DPPC 20-30%、P0PG5_15%，分裝備用。實施例3肺表面活性物質的混合液及其製備配方DPPC23gPOPG8g油酸5gKL4IgTris緩衝液緩衝液 加至IOOg製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將DPPC、P0PG、油酸按上述比例 溶入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝液加 入1 %的KL4,加入混合凍幹的DPPC、P0PG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終濃度達 至Ij KL4 1-2%, DPPC 20-30%、P0PG5-15%，分裝備用。實施例4肺表面活性物質的混合液及其製備配方DPPC23gPOPG8g棕櫚酸5g
SP-BIg 磷酸鹽緩衝液 加至IOOg製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將DPPC、POPG按上述比例溶 入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝液加入 1 %的SP-B和棕櫚酸，加入混合凍幹的DPPC、POPG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使 終濃度達到 SP-B1-2%、DPPC 20-30 %、P0PG5-15%，分裝備用。實施例5肺表面活性物質的混合液及其製備配方DPPC23gPOPG8g棕櫚酸5gSP-B0. 5gSP-C0. 5g磷酸鹽緩衝液 加至IOOg製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將DPPC、P0PG、棕櫚酸按上述比 例溶入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝液 加入0. 5%的SP-B和0. 5%的SP-C，加入混合凍幹的DPPC、POPG成份，40°C溫浴攪拌至完 全溶解即得，使終濃度達到SP-B 0. 5-1 %、SP-C 0. 5-1 %、DPPC 20-30 %、POPG 5-15%,分裝備用。實施例6肺表面活性物質的混合液及其製備配方DPPC23gPOPG8g棕櫚酸5gKL4IgTris緩衝液緩衝液 加至IOOg製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將DPPC、P0PG、棕櫚酸按上述比 例溶入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝液 加入1 %的KL4,加入混合凍幹的DPPC、P0PG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終濃度 達到 KL4 1-2%, DPPC 20-30%、P0PG5-15%，分裝備用。實施例7肺表面活性物質的混合液及其製備配方卵磷脂28g棕櫚酸5gTris緩衝液緩衝液 加至IOOg製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將卵磷脂、棕櫚酸按上述比例 溶入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝液加 入混合凍幹的DPPC、棕櫚酸成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，分裝備用。實施例8肺表面活性物質的混合液及其製備配方DPPC28g卵磷脂9g棕櫚酸5g
Tris緩衝液 加至IOOg 製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將DPPC、卵磷脂、棕櫚酸按上述 比例溶入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝 液加入混合凍幹的DPPC、卵磷脂成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終濃度達到DPPC 28%、卵磷脂9%，分裝備用。實施例9肺表面活性物質的混合液及其製備配方DPPC28g卵磷脂9g棕櫚酸5gKL4l-2gTris緩衝液 加至IOOg製備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例製成溶劑；將DPPC、卵磷脂、棕櫚酸按上述 比例溶入到溶劑中混勻，快速蒸發除掉有機溶劑，低溫冷凍乾燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩衝 液加入的KL4，加入混合凍幹的DPPC、卵磷脂成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終 濃度達到KL4l-2 %、DPPC 20-30 %、卵磷脂5-15 %，分裝備用。實施例10.實施例1至實施例9所製備的肺表面活性物質的混合液用於新生兒及成人呼吸窘 迫綜合症和與表面物質缺乏或功能異常有關的其它疾病。
權利要求
1.一種人工表面活性物質混合液，其特徵在於該製劑是由天然蛋白SP-B(SP-C)或其 具有表面活性的多肽，脂質，表面活性劑，緩衝液組成。
2.權利要求1所述的混合液，其特徵在於由下述配方組成的溶液配方天然蛋白SP-B(SP-C)或表面活性多肽 0. 01 10% w/v月旨質1 90% w/v表面活性劑0. 01 10% w/v緩衝液組成餘量
3.權利要求2所述的天然蛋白SP-B(SP-C)為人或哺乳類動物的天然肺表面活性蛋白質。
4.權利要求2所述的天然蛋白SP-B(SP-C)的多肽為人或哺乳類動物SP-B(SP-C)的具 有表面活性的部分胺基酸序列，可由天然產物裂解獲得或人工合成獲得。
5.權利要求4所述的多肽優選人表面活性多肽KL4。
6.權利要求2所述的脂質為天然脂質或人工合成脂質。所述脂質選自二硬脂酸磷脂醯乙醇胺、二棕櫚酸磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、膽固醇、 神經鞘氨醇，神經磷脂，神經醯胺，腦苷脂，腦硫脂，神經節苷脂，葡萄糖苷(脂)醯鞘氨醇， 4_羥雙氫(神經)鞘氨醇；L-a-磷酸卵磷脂、血小板激活因子、磷脂醯甘油，磷脂醯乙醇胺、 磷脂醯肌醇、磷脂醯肌醇-4-磷酸、磷脂醯肌醇-4、5- 二磷酸鹽、心磷脂，磷脂酸，溶血磷脂。 磷脂醯乙醇胺-NH2末端基團、包括己醯胺基團、十二烷基醯胺基團、磷脂醯巰乙胺、丁二醯 基團、戊二醯基團、十二烷羧基基團、生物素基團、磷脂醯乙二醇、生物素化的磷脂帽。溶血 磷脂膽鹼、溶血磷脂醯乙醇胺、溶血磷脂醯甘油、溶血磷酸甘油酯、溶血磷脂酸、烷基磷酸膽 鹼、氧化的脂質、生物素化的脂質、縮醛磷脂、聚合的磷脂、滷代磷脂、聚PEG化磷脂的一種 或多種以任何比例混合的混合物。
7.權利要求6所述的脂質優選二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)，棕櫚醯油醯甘油(POPG) 的一種或兩種以任何比例混合的混合物。
8.權利要求2所述的表面活性劑為離子型表面活性劑和非離子型表面活性劑。
9.權利要求8所述的表面活性劑優選油酸、硬脂酸的一種或兩種以任何比例混合的混 合物。
10.權利要求2所述的緩衝液為任意人體可接受的離子型緩衝液。
11.權利要求10所述的緩衝液為磷酸鹽，鹽酸鹽，碳酸鹽，硼酸鹽，檸檬酸鹽，乙酸-乙 酸鈉，Tris緩衝液的一種或多種種以任何比例混合的混合物。
12.權利要求1-11所述的混合液，用於新生兒及成人呼吸窘迫綜合症和與表面物質缺 乏或功能異常有關的其它疾病。
全文摘要
本發明涉及人工表面活性物質混合液及應用。本發明公開的人工表面活性物質混合液由天然蛋白SP-B(SP-C)或其具有表面活性的天然多肽，脂質，表面活性劑，緩衝液組成，適用於新生兒及成人呼吸窘迫綜合症和與表面物質缺乏或功能異常有關的其它疾病。
文檔編號A61P11/00GK102049040SQ20091021033
公開日2011年5月11日 申請日期2009年10月30日 優先權日2009年10月30日
發明者王大璋, 王梅, 郝心宇 申請人:北京隆旗生物科技有限公司