一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法

2023-07-10 17:38:26 1

一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法
【專利摘要】本發明公開了一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法。首先，在乾淨的試管中加入所需要轉化鑑定的DNA片段；然後在17攝氏度的環境下連接過夜；去23ul連接過夜的載體溶液在此處轉化；挑選無突變的言行的克隆白色菌落過夜培養；將過夜培養後的菌落作質粒提取；36攝氏度的環境下反應3-3.5小時；觀察結果；連接過夜的時候加入1.0ul的pMD18-T；觀察結果前需要做重組酶切鑑定，並加入10ulddH2O。本發明的有益效果是，可以有效避免蛋白胺基酸丟失，且穩定性好，表達量高，具有成本低，操作簡單的優點。
【專利說明】一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種實驗方法，具體來說，一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法。【背景技術】
[0002]質粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區外能夠進行自主複製的遺傳單位，包括真核生物的細胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細菌細胞擬核區以外的環狀脫氧核糖核酸(DNA)分子。現在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環狀DNA分子，這就是質粒(plasmid)(補充:部分質粒為RNA)。質粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環素抗性基因或卡那黴素抗性基因等。有些質粒稱為附加體(episome)，這類質粒能夠整合進真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離於染色體外的DNA分子。質粒在宿主細胞體內外都可複製，通過個些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構建在質粒中，通過轉化入大腸桿菌中，不斷的複製，來得到目的產物。這就是轉化的目的。
【發明內容】

[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法，，首先，在乾淨的試管中加入所需要轉化鑑定的DNA片段；然後在17攝氏度的環境下連接過夜；去23111連接過夜的載體溶液在此處轉化；挑選無突變的言行的克隆白色菌落過夜培養；將過夜培養後的菌落作質粒提取；36攝氏度的環境下反應3-3.5小時；觀察結果。
本發明中，連接過夜的時候加入1.0ul的pMD18-T。
[0004]本發明中，觀察結果前需要做重組酶切鑑定，並加入10ulddH20。
[0005]本發明的有益效果是，可以有效避免蛋白胺基酸丟失，且穩定性好，表達量高，具有成本低，操作簡單的優點。
【具體實施方式】
[0006]一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法，，首先，在乾淨的試管中加入所需要轉化鑑定的DNA片段；然後在17攝氏度的環境下連接過夜；去23111連接過夜的載體溶液在此處轉化；挑選無突變的言行的克隆白色菌落過夜培養；將過夜培養後的菌落作質粒提取；36攝氏度的環境下反應3.2小時；觀察結果；連接過夜的時候加入1.0ul的pMD18-T ;觀察結果前需要做重組酶切鑑定，並加入10ulddH20。
[0007]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護範圍並不局限於此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術範圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護範圍之內。
【權利要求】
1.一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法，其特徵在於，首先，在乾淨的試管中加入所需要轉化鑑定的DNA片段；然後在17攝氏度的環境下連接過夜；去23111連接過夜的載體溶液在此處轉化；挑選無突變的言行的克隆白色菌落過夜培養；將過夜培養後的菌落作質粒提取；36攝氏度的環境下反應3-3.5小時；觀察結果。
2.如權利要求1所述的一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法，其特徵在於，連接過夜的時候加入1.0ul的pMD18-T。
3.如權利要求1所述的一種對蛋白質載體進行轉化及鑑定的方法，其特徵在於，觀察結果前需要做重組酶切鑑定`，並加入10ulddH20。
【文檔編號】C12N15/66GK103602700SQ201310522163
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月30日 優先權日:2013年10月30日
【發明者】徐麗 申請人:徐麗