一種山麥冬皂苷b的分離純化方法
2023-07-09 04:56:11 3
專利名稱：一種山麥冬皂苷b的分離純化方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥活性成分的分離純化方法，具體涉及從湖北山麥冬地下部位提取分離一種留體皂苷即山麥冬皂苷B的方法，屬於中藥分離純化技術領域。
背景技術：
湖北山麥冬spicaia (Thunb.) Lour. var. prolifera Y. Τ. Ma 為百合科山麥冬屬植物，為《中華人民共和國藥典》(1995年版)新增品種山麥冬的基原植物之一，在湖北省廣泛栽培，並作為主流商品。藥理研究表明，湖北山麥冬具有明顯的延長小鼠存活時間、極顯著增加小鼠的脾臟重量、顯著增強小鼠的碳粒廓清作用。湖北山麥冬中主要含有留體皂苷類、萜類、醯胺、生物鹼類、脂肪酸類等化合物，其中皂苷類化合物為該植物主要活性成分。[餘伯陽，徐國鈞，平井康昭等.湖北麥冬和短草山麥冬的化學成分研究(II).中國藥科大學學報，1988，19 ) :209-12; ffatanabe, Yoshiaki; Sanada, Shuichi； Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and its congeners. I. Studies of the constituents of the subterranean part of Liriope platyphylla Wang et Tang. (1). Chemical & Pharmaceutical Bulletin,1983 ,31 (6) 1980-90. ； Yu, Boyang; Hirai, Yasuaki； Shoji, Junzo； Xu, Guojun. Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and its congeners. VI. Studies on the constituents of the subterranean part of Liriope spicatavar. prolifera and L. muscari. (1). Chemical & Pharmaceutical Bulletin,1990 , 38(7) :1931-5; Branke, Jueren Thomas； Haslinger, Ernst. Spirostanol glycoside from the tuber of Ophiopogon japonicus. Liebigs Annalen, 1995，(3) :587-9.]。山麥冬皂苷B 的結構式如下
山麥冬皂苷B為一種留體皂苷類化合物，下述文獻報導的製備方法為山麥冬原料用 95%乙醇回流提取，提取液減壓濃縮後，濃縮液分別用石油醚、氯仿和正丁醇萃取。正丁醇萃取液回收溶劑後，殘留物再進行矽膠柱層析和C18反相製備柱層析等層析過程才得到純的化合物。Boyang; Hiraij Yasuaki ； Shojij Junzo ； Xuj Guojun. Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and its congeners. VI. Studies on the constituents of the subterranean part of Liriope spicatavar. prolifera and L. muscari. (1). Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1990)，38 (7)，1931-5。該方法工藝複雜，製備成本高，周期長，無法工業化生產。
發明內容
本發明旨在克服現有技術的缺陷，提供一種快速簡便、成本低廉、可適用於大量製備或工業化生產的山麥冬皂苷B的製備方法。其具體工藝步驟如下
A.乙醇提取取湖北山麥冬地下部位1kg，一次加入50%-70%的乙醇溶液8-12L，回流提取3-5次，每次1. 5-3小時，保持微沸，過濾藥渣後，合併提取液；
B.大孔樹脂富集除雜將步驟A的提取液減壓濃縮至密度1.20-1. 40後上大孔樹脂柱層析，先後用水5-8 BV、20%-30%乙醇8-10 BV淋洗除雜，淋洗至流出液變清後，改用 60%-70%乙醇4-8 BV洗脫，然後薄層層析在線檢測流出液，並收集該60%-70%的乙醇洗脫液流份，共收集6個柱體積；
所述薄層層析展開劑為氯仿甲醇水=100 35 5。所述大孔樹脂為DlOl型或AB-8型。C.矽膠柱層析色譜分離將步驟B收集到的乙醇洗脫液減壓濃縮後，進行矽膠柱層析分離，洗脫時先用氯仿-甲醇-水，其體積比為10:1:0. 05的混合溶劑8-10BV除雜，再用氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集10-15BV的洗脫液；減壓濃縮得到山麥冬皂苷初
P
ΡΠ O所述混合溶劑是按體積比，氯仿-甲醇-水為10:1:0. 05。D.重結晶將步驟C收集到的洗脫液用50%_80%的甲醇溶解後進行重結晶，培養晶體時間為5-10小時；然後抽濾，濾餅用70%_90%甲醇洗滌後，真空乾燥，得到山麥冬皂苷 B含量達98%以上的白色固體產品。本發明技術方案中所涉及的百分比均為體積百分比。與現有技術相比，本發明所具有的技術效果主要表現在
本發明革除了現有技術中通過葡聚糖凝膠和C18反相柱層析反覆純化的過程，整個工藝過程操作簡便，工藝穩定，分離過程中主要用到水和乙醇，成本低廉，且液相檢測產品純度高達98%以上，可實現山麥冬皂苷B的大量製備或工業化生產。
圖1是本發明實施例1山麥冬皂苷B單體產品的HPLC圖譜。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明作進一步的詳細描述。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於下述實施例。下述各實施例中，終產品山麥冬皂苷B單體的純度復檢均採用反相高效液相色譜-蒸發光散射檢測器(RP-HPLC-ELSD)法，色譜條件如下
以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈水(45:55)為流動相；柱溫30°C ；流速 1. Oml/min ；氣化溫度 105°C ；氣體流速(N2) 3. OL/min。實施例1
取湖北山麥冬地下部位1kg，一次加入50%的乙醇溶液8L，回流提取3次，第一、第二次每次2小時，第三次1. 5小時，保持微沸，過濾藥渣，合併提取液；提取液濃縮至2L後上DlOl型大孔樹脂進行分離，先後用水5 BV、30%乙醇8BV除雜，淋洗至流出液變清後， 改用70%乙醇洗脫，薄層層析檢測流出液，薄層層析展開劑為氯仿甲醇水(100:35:5)， 收集含有山麥冬皂苷B的部分；減壓濃縮後用矽膠柱進行分離，洗脫體系為氯仿甲醇水 (10:1:0. 05)，薄層層析進行在線檢測，有樣品流出後開始收集，共收15個柱體積；減壓濃縮該部分，得到山麥冬皂苷B的粗品。將粗品用50%的甲醇溶解後進行重結晶，培養晶體時間為5小時，抽濾，濾餅用90%甲醇洗滌後，真空乾燥，得山麥冬皂苷B的白色固體。該山麥冬皂苷B的收率為58. 9%，純度為98. 6%。實施例2
取湖北山麥冬地下部位lKg，一次加入70%的乙醇溶液10L，回流提取4次，第一、二次每次2小時，第三、四次每次1. 5小時，保持微沸，過濾藥渣，合併提取液；提取液濃縮至2L 後上DlOl型大孔樹脂進行分離，先後用水6 BV、25%乙醇8 BV除雜，淋洗至流出液變清後， 改用60%乙醇洗脫，薄層層析檢測流出液，薄層層析展開劑為氯仿甲醇水(100:35:5)， 收集含有山麥冬皂苷B的部分；減壓濃縮後用矽膠柱進行分離，洗脫體系為氯仿甲醇水 (20:1:0. 05)，薄層層析進行在線檢測，有樣品流出後開始收集，共收12個柱體積；減壓濃縮該部分，得到山麥冬皂苷B的粗品。將粗品用70%的甲醇溶解後進行重結晶，培養晶體時間為7小時，抽濾，濾餅用70%甲醇洗滌後，真空乾燥，得山麥冬皂苷B的白色固體。該山麥冬皂苷B的收率為55. 3%，純度為98. 8%。實施例3
取湖北山麥冬地下部位lKg，一次加入70%的乙醇溶液12L，回流提取5次，第一、二次每次3小時，第三、四次每次2小時，第五次1. 5小時保持微沸，過濾藥渣，合併提取液，提取液濃縮至2L後上AB-8型大孔樹脂進行分離，先後用水8BV、20%乙醇8BV除雜，淋洗至流出液變清後，改用65%乙醇洗脫，薄層層析檢測流出液，薄層層析展開劑為氯仿甲醇水 (150 35 5)，收集含有山麥冬皂苷B的部分；減壓濃縮後用矽膠柱進行分離，洗脫體系為氯仿甲醇水(10:1:0. 05)，薄層層析進行在線檢測，有樣品流出後開始收集，共收10個柱體積；減壓濃縮該部分，得到山麥冬皂苷B的粗品。將粗品用80%的甲醇溶解後進行重結晶， 培養晶體時間為10小時，抽濾，濾餅用90%甲醇洗滌後，真空乾燥，得山麥冬皂苷B的白色固體。該山麥冬皂苷B的收率為53. 7%，純度為99. 0%。
權利要求
1.一種山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特徵在於具體工藝步驟如下A.乙醇提取取湖北山麥冬地下部位1kg，一次加入50%-70%的乙醇溶液8-12L，回流提取3-5次，每次1. 5-3小時，保持微沸，過濾藥渣後，合併提取液；B.大孔樹脂富集除雜將步驟A的提取液減壓濃縮至密度1.20-1. 40後上大孔樹脂柱層析，先後用水5-8 BV、20%-30%乙醇8-10 BV淋洗除雜，淋洗至流出液變清後，改用 60%-70%乙醇4-8 BV洗脫，然後薄層層析在線檢測流出液，並收集該60%-70%的乙醇洗脫液流份，共收集6個柱體積；C.矽膠柱層析色譜分離將步驟B收集到的乙醇洗脫液減壓後，進行矽膠柱層析分離， 洗脫時先用氯仿-甲醇-水體積比為10 1 0. 05的混合溶劑8-10BV除雜，用同一溶劑繼續洗脫，收集10-15BV的洗脫液；D.重結晶將步驟C收集到的洗脫液用50%-80%的甲醇溶解後進行重結晶，培養晶體時間為5-10小時；然後抽濾，濾餅用70%-90%甲醇洗滌後，真空乾燥，得到山麥冬皂苷B含量達98%以上的白色固體產品。
2.如權利要求1所述山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特徵在於步驟B所述薄層層析的展開劑為氯仿甲醇水=100:35:5。
3 如權利要求1所述山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特徵在於步驟B所述大孔樹脂為DlOl型或AB-8型。
4.如權利要求1所述山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特徵在於步驟C所述混合溶劑是按體積比為氯仿-甲醇-水為10:1:0. 05。
5.如權利要求1所述山麥冬皂苷B的分離純化方法，其特徵在於步驟D所述重結晶的溶劑還可以用乙醇、乙酸乙酯或正丁醇中的任意一種替代。
全文摘要
本發明涉及從湖北山麥冬地下部位提取山麥冬皂苷B的方法，屬於中藥分離純化技術領域，其具體工藝步驟如下A.乙醇提取乙醇回流提取後合併提取液；B.大孔樹脂富集除雜將提取液濃縮後上大孔樹脂柱層析，然後薄層層析在線檢測流出液；C.矽膠柱層析色譜分離洗脫劑為氯仿-甲醇-水，收集10-15BV的洗脫液；D.重結晶洗脫液用甲醇溶解後進行重結晶。本發明革除了現有技術中通過葡聚糖凝膠和C18反相柱層析反覆純化的過程，整個工藝過程操作簡便，工藝穩定，分離過程中主要用到水和乙醇，成本低廉，且液相檢測產品純度高達98%以上，可實現山麥冬皂苷B的大量製備或工業化生產。
文檔編號C07J71/00GK102399259SQ201110420119
公開日2012年4月4日 申請日期2011年12月15日 優先權日2011年12月15日
發明者劉丁, 夏柯, 文煥松, 李啟發, 郭建華 申請人:成都普思生物科技有限公司