生物素醯胺酶測定的製作方法
2023-08-04 03:49:21 2
專利名稱：生物素醯胺酶測定的製作方法
技術領域：
本申請記載的技術涉及測量樣品中生物素醯胺酶(biotinidase)水平的測定。
背景技術：
生物素醯胺酶缺乏(biotinidase deficiency)是由被稱為生物素醯胺酶的酶的功能紊亂所引起的疾病。患有生物素醯胺酶缺乏的患者經歷嚴重的臨床症狀，包括不可逆的神經學損傷或者甚至死亡。生物素醯胺酶缺乏的基因缺陷是遺傳的，並且當兩個攜帶者將其傳遞給他們的後代時，該疾病往往出現。對於兩個這樣的攜帶者的每次懷孕而言，孩子將患有該疾病而出生的機率為25%，而孩子將是該基因缺陷的攜帶者的機率為50%。研究顯示，大約每60，000活產中有1例將患有生物素醯胺酶缺乏。患有生物素醯胺酶缺乏的嬰兒在出生時表現正常，但是在生命的最初幾周或幾個月之後發展出危險的症狀。利用早期診斷和治療，該疾病的所有症狀都能被預防。在細胞中，生物素醯胺酶具有從生物胞素和短生物素化肽鏈釋放生物素以用於生物素再循環的功能。當前有幾種可利用的、用於測量血液樣品中生物素醯胺酶活性的測定法，儘管這些測定法並不總是適合臨床檢測。已經公開了利用耦聯至螢光銪螯合物的生物素來測量生物素醯胺酶活性的方法 (Curr. Trends Infant Screening 1989，沈5)。生物素和銪螯合物之間的醯胺鍵的斷裂，導致了螢光強度的降低。雖然該方法可能適合於定量均勻測量來自血清的生物素醯胺酶活性，然而，該公開的方法苦於相對高的背景信號和長的溫育時間。發明概述在本申請記載的此技術中，觀察到了當生物素醯胺酶的底物為生物素的衍生物時 (其中生物素部分的氨基甲醯基與標記通過長於約4人但短於約27A長度的連接子被相互隔開)，能夠進行生物素醯胺酶測定。根據一個方面，此技術涉及測定樣品中的生物素醯胺酶活性的方法，所述方法包括使所述樣品與式(I)的生物素醯胺酶底物接觸
權利要求
1.用於測定樣品中生物素醯胺酶活性的方法，所述方法包括使所述樣品與式(I)的生物素醯胺酶底物接觸
2.根據權利要求1的方法，其中所述連接子的長度為約6A至約23 k。
3.根據權利要求1或2的方法，其中所述連接子的長度為約9A至約15入。
4.根據權利要求1-3的方法，其中所述連接子包含3-15個部分，其中每個部分獨立地選自亞苯基，含有1-15個碳原子的亞烷基，乙炔二基(-C ^C-)，乙烯二基(-C = C-)，醚 (-0-)，硫醚(-S-)，醯胺(-C0-NH-，-CO-NR 『 -，-NH-CO-和-NR 『 -C0-)，羰基(-C0-)，硫狀羰基(C = S)，酯(-C00-和-00C-)，羧基(-C00H和-C00_)，甲醯胺基(-CONH2)，二硫基 (-SS-)，碸基(-SO2-)，二氮基(-N = N-)，仲胺和叔胺，其中R'代表含有少於5個碳原子的烷基，2-羥基-1，3，5-三嗪基，6-羥基-1，3，5-三嗪基，以及IH-I，2，3-三唑-4-基。
5.根據權利要求1-4的方法，其中所述標記為鑭系元素(III)螯合物。
6.根據權利要求5的方法，其中所述鑭系元素(III)螯合物包含配體，所述配體選自 DTPA, EDTA，吡啶-2，6-二基-雙(亞甲基次氮基)四(乙酸)和二亞乙基三胺四乙酸，以及選自銪，鋱，鏑和釤的鑭系元素(III)離子。
7.根據前述權利要求中任一項的方法，其中所述生物素醯胺酶底物選自
8.根據權利要求7的方法，其中所述生物素醯胺酶底物具有下式
9.根據權利要求5的方法，其中所述鑭系元素(III)螯合物是發光的。
10.根據權利要求9的方法，其中所述發光的鑭系元素(III)螯合物包含氮雜環烷骨
11.根據權利要求5或10的方法，其中所述鑭系元素(III)螯合物具有下列結構其中X為包含3-15個部分的連接子，其中每個部分獨立地選自亞苯基，含有1-15 個碳原子的亞烷基，乙炔二基(-C ε C-)，乙烯二基(-C = C-)，醚(-0-)，硫醚(-S-)，醯胺(-C0-NH-，-CO-NR 『 -，-NH-CO-和-NR 『 -C0-)，羰基(-C0-)，硫代羰基(C = S)，酯 (-C00-和-00C-)，羧基(-C00H 和-C00_)，甲醯胺基(-CONH2)，二硫基(-SS-)，碸基(-SO2-)， 二氮基(-N = N-)，仲胺和叔胺，其中R'代表含有少於5個碳原子的烷基，2-羥基-1，3， 5-三嗪基，6-羥基-1，3，5-三嗪基，以及IH-I，2，3-三唑-4-基，條件是所述連接子的長度為約6 A至約27人，且所述標記為發光的鑭系元素(πι)螯合物或不發光的鑭系元素(πι)
12.式(I)的生物素醯胺酶底物螯合物，所述螯合物包含選自DTPA，EDTA，吡啶-2，6-二基-雙(亞甲基次氮基)四(乙酸) 和二亞乙基三胺四乙酸的配體，其中所述鑭系元素選自銪，鋱，鏑和釤。
13.用於測定生物素醯胺酶活性的試劑盒，其包括微量滴定板和根據權利要求12的生物素醯胺酶底物。
14.根據權利要求13的試劑盒，其中所述板用抗-SA包被。
15.根據權利要求13的試劑盒，其中所述板用SA包被。
16.根據權利要求13-15的試劑盒，進一步包括選自測定緩衝液、洗滌緩衝液、增效緩衝液、校正劑和對照樣品的一種或多種組分。
全文摘要
本技術公開了生物素醯胺酶測定，生物素醯胺酶底物(I)和試劑盒，其中生物素醯胺酶底物包括通過長於約但短於約的連接子X而與生物素氨基甲醯基團相隔開的標記分子。
文檔編號C12Q1/37GK102369292SQ201080012495
公開日2012年3月7日 申請日期2010年3月10日 優先權日2009年3月16日
發明者J·卡維納恩, J·普爾拉赫提, L·加考拉, O·姆拉裡, P·胡斯凱納恩, P·麥特森 申請人:華萊克有限公司