一種精確估算終點法試劑空白吸光度的方法
2023-07-08 04:02:41 1
一種精確估算終點法試劑空白吸光度的方法
【專利摘要】本發明公開了一種精確估算終點法試劑空白吸光度的方法，所述方法將反應結束後的溶液吸光度細分為剩餘試劑吸光度、消耗的試劑吸光度、生成物吸光度、樣品殘餘物吸光度四個部分，通過選擇特定的次波長可初步估算出試劑空白，並估算出樣品濃度後，從反應結束的溶液吸光度中減去消耗的試劑的吸光度、生成物吸光度、樣品殘餘物吸光度後，再次估算得到精確的試劑空白。採用本發明技術方案，無需實際測試試劑空白，原理清晰明了，計算結果準確可靠，估算誤差小於1%，特別適用於無法直接測試試劑空白的儀器。
【專利說明】一種精確估算終點法試劑空白吸光度的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於檢驗醫學【技術領域】，具體涉及一種精確估算終點法試劑空白吸光度的方法。
【背景技術】
[0002]目前，由於科技的發展和個人、家庭、鄉村醫院、野外等各方面的迫切需要，可攜式醫療設備(POCT，Point of Care Test)已成為醫療設備發展的主要趨勢之一。在檢驗醫學領域，微流控技術與試劑凍幹技術的結合，更是實現了在微流控晶片上實現微量全血的離心分離、定量、傳輸和幾個甚至幾十個生化指標的同時檢測。且此類設備體積小、成本低、操作簡單、結果即時可得，已成為檢驗醫學領域可攜式檢驗設備的最主要發展趨勢。
[0003]常規的生化檢測終點法測試中，在樣品沒有加入反應杯之前，首先測量反應杯中試劑空白的吸光度Al，再加入樣品，一定時間之後再次測量反應結束後的吸光度A2，通過這兩次測量的光強值可以計算出樣品的濃度C=a*(A2_Al)，其中a為給定的摩爾吸收係數。而在POCT儀器中，為了簡化操作步驟，降低人為因素對測量結果的影響，將生化試劑凍幹並封裝於微流控晶片的比色杯中，微量全血經離心分離後，血清與緩衝液混合進入封裝有凍幹試劑的比色杯內將凍幹試劑復溶並反應，通過比色法計算樣品濃度。此過程中無法直接測試試劑空白，因此，一種能對試劑空白的精確估算的方法對於可攜式檢驗醫學設備具有非常重大的意義。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在於克服現有技術存在的問題，提供一種精確估算終點法試劑空白吸光度的方法。
[0005]為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明通過以下技術方案實現:
在具體實施步驟之前，本發明首先提出一種反應終點混合液等效組成方法:
首先，認為反應結束的混合液的吸光度
A/由剩餘試劑吸光度生成物吸光度?:、樣品殘餘物吸光度組成，
【權利要求】
1.一種精確估算終點法試劑空白吸光度的方法，其特徵在於，所述方法需同時測試反應杯、樣品空白杯在主次波長處終點吸光度，具體估算步驟如下: 步驟I)使用兩個比色杯同時進行測試，其中一個放置樣品與試劑，另一個放置樣品空白；同時測得反應結束主、次波長吸光度A3X1,A3X2和樣品空白的主、次波長處的吸光度A3X1,A3X2 ； 步驟2)初步估算試劑空白在次波長處的吸光度[ARX2]評估≈ABX2-ASX2進而估算試劑空白在主波長處的吸光度為
2.根據權利要求1所述的精確估算終點法試劑空白吸光度的方法，其特徵在於，所述步驟(I) - (4)在測定待測樣品之前，需測定以下參數: (1)測定單位濃度的綜合吸光度譜線玉人使用濃度
3.根據權利要求1所述的精確估算終點法試劑空白吸光度的方法，其特徵在於，所述步驟(I)需選擇主次兩個波長同時進行測試，並將次波長選擇在綜合吸光度:
4.根據權利要求1所述的精確估算終點法試劑空白吸光度的方法，其特徵在於，在所述步驟(2)中，試劑空白在主次波長處的吸光度比例係數免為定值，並由此通過次波長處的吸光度計算主波長處的吸光度。
5.根據權利要求1所述的精確估算終點法試劑空白吸光度的方法，其特徵在於，在所述步驟(3)中，由終點吸光度扣除樣品吸光度、預估試劑空白吸光度，得到吸光度變化並計算樣品濃度。
6.根據權利要求1所述的精確估算終點法試劑空白吸光度的方法，其特徵在於，在所述步驟(4)中，通過在結束吸光度中扣除綜合吸光度、樣品吸光度，得到試劑空白吸光度。
【文檔編號】G01N21/31GK103454231SQ201310376664
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月27日 優先權日:2013年8月27日
【發明者】黎海文, 周武平, 張濤, 姚佳, 劉聰, 吳一輝 申請人:中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所