一種犬、貓用免疫球蛋白注射液的製作方法

2023-07-07 16:45:41 1

一種犬、貓用免疫球蛋白注射液的製作方法
【專利摘要】一種犬、貓用免疫球蛋白注射液，涉及應用生物技術製備動物生物製品，其技術特徵是：採用犬、貓傳染性病毒抗原，接種單蹄獸動物後，誘導其體液免疫系統產生高效價免疫球蛋白，通過酶切、鹽析、濾過、壓幹、透析等生物技術精製免疫球蛋白，使免疫球蛋白的濃縮與精製工藝規範化、產業化，對犬、貓常見病毒病菌感染，其治癒率達91%以上。
【專利說明】一種犬、貓用免疫球蛋白注射液
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及應用生物技術製備動物生物製品。
【背景技術】
[0002]動物病毒性傳染病發病率與死亡率高達50-100%。疫苗對健康動物傳染病的預防是根本，但對臨床上一定比例發病群體的治療至今是一個難題。免疫球蛋白的精製與濃縮在國內外僅限於微量或小型實驗階段，多為單一抗病毒免疫球蛋白。規範化、產業化濃縮與精製抗多病免疫球蛋白的製作工藝，在國內外鮮有涉足。人類醫學方面曾在破傷風的臨床上採用鹽析沉澱法提取精破抗。目前，國內外濃縮、精製提取免疫球蛋白(Ig)主要採用:①離心法；②鹽析沉澱法；③分子篩法有機物沉澱法，這四種方法均處於小中型試製階段。 [0003]本發明採用犬傳染性病毒(犬瘟熱病毒、犬副流感病毒、狂犬病毒、犬細小病毒、犬腺II型病毒)或貓傳染性病毒(貓泛白細小病毒、口膜炎病毒、腹膜炎病毒)作為病毒性抗屎，接種單蹄獸動物後，誘導其體液免疫系統產生高效價的抗病免疫球蛋白。通過酶切、鹽析、濾過、壓幹、透析法等生物技術精製免疫球蛋白。因此，其製備方法較以往的方法要簡單、快速、易於掌握，提取回收率理想，經濟效益可觀，適於專業化製作。

【發明內容】

[0004]本發明在製備方法中提供了以酶切與鹽析相結合的新工藝，使單位體積內的效價提高2倍，既避免了異源蛋白的變態反應，又減少了提純過程中免疫球蛋白的丟失(回收量由原來的 1500g/10000mL 提高到 1800g/10000ml)。
[0005]本發明在製備方法中還提供了對免疫動物的基礎免疫與強化免疫的抗原組合比例配方，以及接種時機與採血時機，這對充分利用供漿動物、加大採血次數、減少原料投入
有一點的意義。
[0006]以下結合實施例對本發明的技術方案作進一步的說明:製作免疫球蛋白針劑時，(I)採用製作的犬瘟熱、犬細小病毒、犬腺口型病毒和犬副流感病毒細胞培養高效價抗原與改良的佐劑混合乳化後；(2)貓傳染性口膜炎、貓傳染性腹膜炎、貓細小病毒性腸炎的病毒抗原，人工免疫接種關中大毛驢。第一階段基礎免疫出針):對檢疫合格的關中驢，方可免疫。免疫途徑為頸背皮下或肌肉注射，一般注射抗原6次，間隔時間為3-4天。第一次注射抗原全量的1/4 ;第二次注射全量的1/3 ;第三次注射全量的1/3 ;第四次注射全量的1/2 ;第五次注射全量的I/ 2 ;第六次注射全量。於第六次注射後14天試血，測定免疫球蛋白效價，供以後強化免疫時參考。
[0007]第二階段強化免疫(2針):第一階段結束後第七天進入第二階段。一般注射抗原2次(抗原30毫升/頭?次)，間隔時間為3-4天。強化免疫6-7天後試血測效價，之後即可大量採血(採血兩次)。採血的毛驢休息半月後，即可進行下程常規高免。
[0008]常規聞免(2針):一般注射2次(抗原30毫升/頭?次)，每次間隔9天(±1天)。免疫結束的第六天進行第一次採血，隔日進行第二次採血。採血量為14-16ml/Kg體重，第二次採血較第一次減少約1/5，均由頸靜脈採血。待採取的血液沉澱形成澄清黃層後，收集吸取血漿。
[0009]免疫球蛋白(Ig)的提純:將準備提純的血漿混合於同一容器內，按血漿量1:2倍加入蒸餾水，充分攪拌均勻，用2mol/L鹽酸調整PH值為3.3-3.4.然後按總量每毫升加入6-9個活力的胃蛋白酶和0.2%的甲苯，攪拌均勻，以水浴加溫30°C ±1°C消化2小時。消化期間提純的血漿要不斷攪拌。消化完畢後按血漿總量加入15%的硫酸鎊，溶解後用21N NaOH溶液調整pH值為5.3-5.4，用水浴法加溫，以每分鐘升1°C為宜，並不斷攪拌直至升溫至57-58 °C時，再攪拌30min，靜置30min，完畢後迅速降溫冷卻至42 °C以下時進行下一步工藝處理。
[0010]第一次沉澱濾過，將上述液體用濾布在濾槽內過濾，直至清亮，收集濾液，棄去沉澱物。二次沉澱，收集首次沉澱的濾液，用2N NaOH榕液調整PH值至7.2-7.3，按總量加入21%的硫酸銨，充分攪拌，溶解後靜置30min，後用25支純棉濾布在不鏽鋼濾槽內過濾，收集沉澱，棄去濾液。
[0011]將收集的沉澱壓幹，稱重，裝入透析袋內(每袋約裝200-250g)，放置流水槽內透析24-72小時；收集袋內免疫球蛋白，按180mg/mL稀釋，並加入0.5%氯仿、0.85%氯化鈉和
0.5%硫酸慶大黴素粉，充分攪拌溶解後，用2N NaOH溶液矯正PH至6.6-6.7。置5_15°C靜置沉澱48小時，最後以正壓形式用直徑為0.3um硝酸纖維微孔濾膜除菌濾過。成品檢驗合格後，分裝出廠。
【權利要求】
1.一種犬、貓用免疫球蛋白注射液，其特徵是:採用犬傳染性病毒(犬瘟熱病毒、犬副流感病毒、狂犬病毒、犬細小病毒、犬腺口型病毒)或貓傳染性病毒(貓泛白細小病毒、口膜炎病毒、腹膜炎病毒)等常見病毒抗原，接種單蹄獸動物後，誘導其體液免疫系統產生高效價免疫球蛋白，酶切切除免疫球蛋白結構中的Fe片段，保留其具有抗病毒與中和病毒的Fab片段，通過鹽析、濾過、壓幹、透析等生物技術精製免疫球蛋白。
2.根據權利要求1所述的犬、貓用免疫球蛋白注射液，其特徵是:在製備方法中提供了以酶切與鹽析相結合的新工藝(酶切一熱處理一鹽析一純化)。
3.根據權利要求1或2所述的犬、貓用免疫球蛋白注射液，其特徵是:在製備方法中，還提供了對免疫動物的基礎免疫與強化免疫的抗原比例配方(卡介苗/抗原:12mg/35ml)，以及接種時機(基礎/強化/常規:3/4/7)與採血時機(I 3天)。
【文檔編號】A61K39/395GK103611158SQ201310588395
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月21日 優先權日:2013年11月21日
【發明者】不公告發明人 申請人:青島農業大學