一種去除肝素鈉中細菌內毒素的方法

2023-08-06 10:51:51

一種去除肝素鈉中細菌內毒素的方法
【專利摘要】本發明公開子一種去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其為：肝素鈉粗品經純化水溶解並調節pH值至8.0-9.0，在70-85℃下加入高氯酸鹽或其水溶液進行反應，反應結束後降溫至20-30℃，加入乙二胺四乙酸攪拌、硅藻土過濾、超濾，加入乙醇沉澱肝素鈉，除去上清液，再加入氯化鈉﹑純化水和乙醇再沉澱，得到去除細菌內毒素的肝素鈉。本發明在保證肝素鈉原料其它質量的前提下，可有效的去除細菌內毒素，使其含量遠低於中國藥典和歐洲藥典的0.01EU/USPU的標準，可達到0.003EU/USPU限度以下，且用高氯酸鹽處理這一工藝操作簡便，去除細菌內毒素效果好，批次之間產品性能穩定，易工業化生產。
【專利說明】一種去除肝素鈉中細菌內毒素的方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬於生物醫藥領域，涉及是一種在肝素鈉生產過程中去除細菌內毒素的方 法。

【背景技術】
[0002] 肝素鈉 （Heparin Sodium)是含有硫酸酯的粘多糖，屬於不均一的多糖分子。分子 結構用一個四糖重複單位表示如下：
[0003]

【權利要求】
1. 一種去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於包括如下步驟： (1) 取含有細菌內毒素的肝素鈉粗品用純化水溶解，調節肝素鈉水溶液的pH值為 8. 0-9. 0,在70-85°C下加入高氯酸鹽或其水溶液並進行反應； (2) 待反應結束後將反應液降溫至20-30°C，向其中加入乙二胺四乙酸，攪拌使其反應， 然後通過硅藻土過濾，濾液再進行超濾； (3) 超濾得到的肝素鈉濃縮液升溫至45-55°C，加入乙醇，攪拌後降溫至10_15°C進行 靜置或離心，然後除去上清液； (4) 向步驟（3)得到的下層沉澱物中加入純化水和氯化鈉溶解沉澱物，然後在45-55°C 下加入乙醇並攪拌後降溫至10-15°C進行靜置或離心，除去上清液，得到去除了細菌內毒素 的肝素鈉。
2. 根據權利要求1所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於所述肝素鈉粗 品的抗II a效價彡110USP U/mg，其細菌內毒素含量在10EU/USP U以上。
3. 根據權利要求1所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於步驟（1)中， 肝素鈉粗品與溶解用純化水的質量比為1. 〇 :1〇. 0-12. 0 ;調節肝素鈉水溶液的pH值用的是 lmol/L氫氧化鈉或lmol/L鹽酸；加入高氯酸鹽或其水溶液並進行反應的溫度為70-85°C， 反應時間為25-35min。
4. 根據權利要求1所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於步驟（1)中，所 述高氯酸鹽選自高氯酸鎂、高氯酸鈣或高氯酸銅。
5. 根據權利要求1或4所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於步驟（1) 中，高氯酸鹽和肝素鈉粗品質量比為2. 5-3. 5 :100 ;所述高氯酸鹽水溶液中高氯酸鹽和純 化水的質量比為1. 〇 :4. 5-5. 5。
6. 根據權利要求1所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於步驟（2)中，乙 二胺四乙酸的加入量與高氯酸鹽的摩爾比為1. 0 :0. 95-1. 0,優選1. 0 :0. 95-0. 98。
7. 根據權利要求1所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於步驟（3)中，乙 醇和肝素鈉濃縮液的體積比為：〇. 3-0. 5 :1. 0,優選0. 35-0. 45 :1. 0 ;該步驟中加入乙醇後 在45-55°C攪拌彡30min ;該步驟中降溫時間彡30min。
8. 根據權利要求1所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於步驟（4)中，氯 化鈉和純化水的質量比為1. 0 :25-30,優選1. 0 :27-29 ;氯化鈉和步驟（1)的肝素鈉粗品 的質量比為1. 5-2. 0 :10,優選1. 5-1. 8 :10 ;該步驟中降溫時間彡30min。
9. 根據權利要求1所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於步驟（4)中，乙 醇的加入量與採用純化水和氯化鈉溶解所得溶解液的體積比為〇. 3-1. 5 :1. 0 ;該步驟中加 入乙醇並攪拌的時間彡30min。
10. 根據權利要求1所述的去除肝素鈉中細菌內毒素的方法，其特徵在於步驟（4)中， 得到的肝素鈉中細菌內毒素的含量在0. 003EU/USP U以下。
【文檔編號】C08B37/10GK104193848SQ201410397866
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月13日 優先權日:2014年8月13日
【發明者】唐詠群, 黃錫偉, 段豔冰, 婁媛媛, 劉玉輝 申請人:南京健友生化製藥股份有限公司