一種新鮮菸葉切片及其製作方法與應用與流程

2023-08-06 04:52:41

本發明屬於農業技術領域，特別涉及一種新鮮菸葉切片及其製作方法與應用，尤其涉及一種使菸葉內部結構完整呈現的切片方法。

背景技術：

菸葉的內部結構的觀察需要切片技術的協助，中國專利(公開號：CN104849110A)，一種植物組織的石蠟切片方法，是通過固定液固定、染色等製成的，這導致了葉片生理結構的變化，使切出來的材料失真，影響菸葉內部結構的觀察。中國專利(公開號：CN103499477A)鮮葉切片及其製備方法和用途公開了一種新鮮葉片的切片方法，雖然操作簡單、成本低廉，但由於人工徒手切片，不能保證每次切取的厚度一致，成功率較低。

因此，針對上述能否真實展現葉片內部結構和穩定連續切出目標樣品等問題，改進新鮮葉片的切片方法顯得尤為重要。

技術實現要素：

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的目的在於提供一種新鮮菸葉切片的製作方法。

本發明的另一目的在於提供通過上述方法獲得的新鮮菸葉切片。

本發明的再一目的在於提供一種新鮮菸葉切片的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種新鮮菸葉切片的製作方法，包括以下製作步驟：

(1)新鮮菸葉採集；

(2)根據採集的菸草葉片選取有代表性的目標葉塊1.2～2mm×3.5～5mm，用刀片切下；

(3)把目標葉塊放入加熱後的瓊脂液進行包埋，然後冷卻凝固；

(4)將凝固後含有目標葉塊的瓊脂塊進行修飾，然後上臺使用切片機進行切片；

(5)把切取的樣品放在載玻片上蓋上蓋玻片製片。

為了更好的實現本發明，還包括如下步驟：

(6)進行顯微觀察菸草葉片內部結構；

(7)用image軟體連接顯微鏡進行拍照。

所述的瓊脂液是把瓊脂粉加入水中進行微波加熱2～4min，瓊脂液的濃度為3％～5％，瓊脂粉購於健陽生物科技有限公司，凝膠強度大於1300g/cm2。

所述的冷卻凝固是把包埋後的含有目標葉塊的瓊脂進行低溫冷藏，冷藏時間為0.5～2h。

所述的修飾是把瓊脂塊切成1～2cm3，其中，目標葉塊長的葉邊垂直於水平面。

所述的切片機是DOSAKA EM CO.,LTD.公司生產的ZERO1型號切片機；切片機刀片購于吉列公司。

所述的切片是把修飾後的瓊脂塊固定在切片臺上，短的葉邊平行於刀片放置進行葉片橫切，根據不同的葉片硬度和葉齡調整切取的厚度，優選厚度40～80μm，將切下的薄片用溼潤的毛筆轉移至盛有蒸餾水的燒杯中。

所述的製片先把鮮樣薄片邊緣的瓊脂用牙籤剔除，再把鮮樣薄片用牙籤挑至滴有水的載玻片上，最後蓋上蓋玻片。

所述的顯微觀察使用的是OLYMPUS公司生產的BX43型號顯微鏡。

根據所拍照片中葉片內部結構變化、顏色以及測定出葉片的厚度，可以判斷菸草需肥情況和採收時機。

一種新鮮菸葉切片，通過上述製作方法獲得。

所述的新鮮菸葉切片在田間中的應用。

本發明相對於現有技術具有如下的優點及效果：

採用本發明的方法切取的每個樣品厚度均一，且厚度大小可隨意調控，由於顯微觀測需要切片機切取厚度優選控制在40～80μm。本發明在不採用固定液固定、染色、不破壞葉片內部結構及生理變化的情況下，完整並真實的呈現葉片的內部結構，並且耗時較少，操作簡單，使用試劑較少。

附圖說明

圖1是實施例1中菸草葉片鮮樣切片。

圖2是實施例2中菸草葉片鮮樣切片。

圖3是實施例3中菸草葉片鮮樣切片。

具體實施方式

下面結合實施例及附圖對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限於此。

實施例1

新鮮菸草葉片的切片製作步驟如下：

(1)新鮮菸葉採集，葉片樣品採自華南農業大學網室盆栽菸草，在煙苗移栽後45天選取中部菸葉；

(2)把採集的中部菸草葉片帶回實驗室，選取第6～7葉脈之間的目標葉塊用刀片切下，目標葉塊的大小約為2mm×5mm；

(3)配製3％的瓊脂液進行微波加熱，微波加熱3min，待稍微冷卻後把目標葉塊放入瓊脂液中進行包埋，然後放入冰箱保鮮層進行冷卻凝固；

(4)冷卻1h後取出瓊脂塊，用刀片對其進行修飾，修飾成體積約為1cm×1cm×2cm(長×寬×高)的瓊脂小塊，目標葉塊在其中間，然後上臺使用切片機進行切片；

(5)把切取的樣品放在載玻片上蓋上蓋玻片製片；

(6)進行顯微觀察菸草葉片內部結構。

(7)用image軟體連接顯微鏡進行拍照，如圖1。

從圖1可知，菸草葉片的上表皮、下表皮清晰可見，柵欄組織排列緊密且規則、顏色濃綠均一，柵欄組織和海綿組織比例適中。

實施例2

新鮮菸草葉片的切片製作步驟如下：

(1)新鮮菸葉採集，葉片樣品採自華南農業大學網室盆栽菸草，在煙苗移栽後45天選取中部菸葉；

(2)把採集的中部菸草葉片帶回實驗室，選取第6～7葉脈之間的目標葉塊用刀片切下，目標葉塊的大小約為1.2mm×4mm；

(3)配製4％的瓊脂液進行微波加熱，微波加熱4min，待稍微冷卻後把目標葉塊放入瓊脂液中進行包埋，然後放入冰箱保鮮層進行冷卻凝固；

(4)冷卻0.5h後取出瓊脂塊，用刀片對其進行修飾，修飾成體積約為1cm×1cm×1cm(長×寬×高)的瓊脂小塊，目標葉塊在其中間，然後上臺使用切片機進行切片；

(5)把切取的樣品放在載玻片上蓋上蓋玻片製片；

(6)進行顯微觀察菸草葉片內部結構。

(7)用image軟體連接顯微鏡進行拍照，如圖2。

從圖2可知，不僅能清晰的看到菸草葉片的上表皮和下表皮，還可清楚的展現葉脈和氣孔，柵欄組織排列緊密且較長，海綿組織中還含有大量的葉綠體。

實施例3

新鮮菸草葉片的切片製作步驟如下：

(1)新鮮菸葉採集，葉片樣品採自華南農業大學網室盆栽菸草，在煙苗移栽後45天選取中部菸葉；

(2)把採集的中部菸草葉片帶回實驗室，選取第6～7葉脈之間的目標葉塊用刀片切下，目標葉塊的大小約為1.6mm×3.5mm；

(3)配製5％的瓊脂液進行微波加熱，微波加熱2min，待稍微冷卻後把目標葉塊放入瓊脂液中進行包埋，然後放入冰箱保鮮層進行冷卻凝固；

(4)冷卻2h後取出瓊脂塊，用刀片對其進行修飾，修飾成體積約為1cm×1cm×1.5cm(長×寬×高)的瓊脂小塊，目標葉塊在其中間，然後上臺使用切片機進行切片；

(5)把切取的樣品放在載玻片上蓋上蓋玻片製片；

(6)進行顯微觀察菸草葉片內部結構。

(7)用image軟體連接顯微鏡進行拍照，如圖3。

從圖3可知，菸草葉片的柵欄組織排列略微疏鬆，且顏色有點發黃，在葉片中所佔的比例不大。

上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式並不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護範圍之內。