一種印度苦木素x的提取純化方法及其應用的製作方法
2023-08-07 00:02:36 1
一種印度苦木素x的提取純化方法及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種印度苦木素X的提取純化方法及其應用。本發明方法包括以下步驟：以印度苦木為原料，粉碎，用乙醇回流提取，提取液濃縮得浸膏，將浸膏用酸水溶液超聲溶解，靜置，取上清液，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物，萃取物採用矽膠柱層析分離得到印度苦木素X。本發明方法質量可控、有效成分含量高、適合工業化生產。本發明所述印度苦木素X尤其適於在製備抗腫瘤藥物中的應用，特別是在抑制中性白細胞粘附於由腫瘤壞死因子誘導的內皮細胞藥物中的應用。
【專利說明】一種印度苦木素X的提取純化方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種化合物的提純方法和其醫藥用途，具體涉及一種印度苦木素X的提取純化方法和其在製備抗腫瘤藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]腫瘤是危害人類健康最嚴重的一類常見病、多發病，最常見的治療方法是手術、化療和放療，而化療因毒副作用大，影響患者生活質量。近年來，中醫藥治療腫瘤稱為獨特療法，中醫認為瘀血阻滯、痰溼凝聚、熱毒內蘊、正氣虧虛是導致腫瘤的病機，根據腫瘤的病因病機、發生發展規律，中藥抗癌治療主要有扶正固本、清熱解毒、活血化瘀、軟堅散結四個基本法則。中藥治療腫瘤的機制主要是對腫瘤細胞的直接抑制和殺滅作用、抑制腫瘤血管生成、抑制端粒酶活性、誘導細胞分化、調節細胞信號傳導、抗微管作用、免疫增強作用、逆轉多藥耐藥作用等。中藥應用歷史悠久、價格低廉、藥源廣泛、療效好、低毒性等優勢，在腫瘤治療中的前景也將越來越廣。
[0003]印度苦木素X是從苦木科(Simarcubaceae)植物印度苦木Quassia indica(Gaertn.) Nooteboom中分離得到的一種苦木素,分子式為C2tlH26Oltl,分子量為426.42。藥理研究表明，印度苦木素X具有抗腫瘤活性，濃度為lKg/ml時，抑制中性白細胞粘附於由腫瘤壞死因子誘導的內皮細胞；另外，對KB細胞呈細胞毒活性，IC50為0.6(^g/ml。
[0004]目前，現有技術中少有含有印度苦木素X的抗腫瘤藥物，該現狀亟待解決。
【發明內容】
[0005]為滿足臨床需要，擴大用藥品種，更好地治療癌症，提供一種印度苦木素X的提取純化方法和其在製備抗腫瘤藥物中的應用法和應用。
[0006]一種印度苦木素X的提取純化方法，其特徵在於，其包括以下步驟:
(O以印度苦木為原料，粉碎，用60-80%乙醇溶液回流提取2-3次，每次0.5-lh，提取液濃縮得浸膏；
(2)將浸膏用酸水溶液超聲溶解，靜置，取上清液，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物；
(3)將萃取物用甲醇溶解，採用矽膠柱層析，乙酸乙酯-甲醇混合溶劑按體積比為1: 1-5洗脫，分段收集，薄層色譜跟蹤檢識，合併含有印度苦木素X的流分，減壓濃縮，自然析晶，得到白色印度苦木素X結晶。
[0007]本發明中，步驟(1)所述乙醇溶液用量為藥材重量的6-10倍。
[0008]本發明中，步驟(2)所述酸水溶液為0.5%乙酸水溶液,用量為量為浸膏重量的3-4倍。
[0009]本發明中，步驟(3 )所述矽膠為200-300目。
[0010]試驗表明採用本發明方法提取純化印度苦木素X，其純度可達80%以上，產品收率與一般浸提法相比提高2-3倍。
[0011]本發明還涉及本發明的提取純化方法所得到的植物提取物。
[0012]本發明進一步涉及所述的植物提取物在製備抑制中性白細胞粘附於由腫瘤壞死因子誘導的內皮細胞藥物中的應用。
[0013]本發明所述印度苦木素X的藥理活性通過以下試驗得到了驗證。
[0014]試驗用細胞株:
HeLa:人子宮頸癌細胞株；HEC_1:人子宮內膜癌細胞株；T_98和U251-SP:人腦神經膠質瘤細胞株；HLE:人肝癌細胞株和HMV-1:人黑色素瘤細胞株。
[0015]印度苦木素X抑制中性白細胞粘附於由腫瘤壞死因子誘導的內皮細胞試驗:
實驗方法:四唑翁鹽-中性白細胞粘附抑制實驗法
在含有10%胎牛血清的D-MEM/hams培養基中，將被試細胞調成密度為2 X 16細胞/ml。將上述腫瘤細胞株懸液接種於96孔培養板，每孔50μ1，分別加入空白對照磷酸鹽緩衝液(PBS0、溶劑對照0.1% 二甲基亞碸、陽性對照順鉬(DDP)以及不同濃度單體化合物各50μ1，每組設3個復孔。置於飽和溼度、37°C和5%C02培養箱中培養48小時，於培養結束前4小時，各培養孔加入5mg/ml四唑翁鹽(MTT) 10μ1，培養結束後，棄去培養上清，懸浮細胞離心後棄去上清,沒空加入反應停止液150μ1，靜置I小時，用酶標儀測490nm0.D值，並計算中性白細胞粘附抑制率。
[0016]本發明化合物溶解於DMS0，添加後的最終濃度為在0.1%以下。以只添加DMSO的培養及作為對照。
[0017]實驗結果:本發明化合物的中性白細胞粘附抑制率以相對於對照(添加DMS0)的結果如下表1表示。
[0018]表1印度苦木素X的中性白細胞粘附抑制率％
【權利要求】
1.一種印度苦木素X的提取純化方法，其特徵在於，其包括以下步驟: (O以印度苦木為原料，粉碎，用60-80%乙醇溶液回流提取2-3次，每次0.5-lh，提取液濃縮得浸膏； (2)將浸膏用酸水溶液超聲溶解，靜置，取上清液，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取物； (3)將萃取物用甲醇溶解，採用矽膠柱層析，乙酸乙酯-甲醇混合溶劑按體積比為1: 1-5洗脫，分段收集，薄層色譜跟蹤檢識，合併含有印度苦木素X的流分，減壓濃縮，自然析晶，得到白色印度苦木素X結晶。
2.如權利要求1所述的提取純化方法，其特徵在於步驟(1)中所述乙醇溶液用量為藥材重量的6-10倍。
3.如權利要求1所述的提取純化方法，其特徵在於步驟(2)中所述酸水溶液為0.5%乙酸水溶液，用量為量為浸膏重量的3-4倍。
4.如權利要求1所述的提取純化方法，其特徵在於步驟(3)中所述矽膠為200-300目。
5.一種如權利要求f 4任一項所述的提取純化方法所得到的植物提取物。
6.如權利要 求5所述的植物提取物在製備抑制中性白細胞粘附於由腫瘤壞死因子誘導的內皮細胞藥物中的應用。
【文檔編號】C07D493/10GK104072515SQ201410266367
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年6月16日 優先權日:2014年6月16日
【發明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司