黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法

2023-08-08 10:28:01

專利名稱：黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法
技術領域：
本發明涉及ー種黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法，屬於植物生物技術領域。
背景技術：
黃瓜品質性狀的改善是育種研究的重要目標，而果長是黃瓜的重要品質性狀之一，直接影響經濟效益。隨著商品經濟的快速發展和人們生活條件的改善，黃瓜的消費形式日趨多樣化，如鮮食、涼拌、炒食、湯食、泡菜、鹽漬、糖漬、制幹、制罐等。人們對不同用途的黃瓜長短要求不同，如酸漬加工需要短果型品種，而鹽漬切片加工則需要長果型品種；具有整齊長度的黃瓜果實可以滿足機械化採摘和エ業流水線產品加工的要求。因此，黃瓜果長相關研究在滿足人們消費需求方面具有重要的意義。黃瓜果實屬於瓠果，由子房和花託ー並發育而成，果皮其實是花託的外表，可食部分為果皮和胎座。黃瓜具有単性結實能力，能力強弱因品種而異，而授粉能提高坐果率並促進果實發育。黃瓜果實生長曲線呈S型，謝花後生長緩慢，以後逐漸加速，生長到一定程度後又逐漸減慢，一般開花後10 15天達到商品成熟。日生長量夜間較大，白天較小。夜間生長以傍晚較快，黎明較慢。黃瓜果實的生長曲線符合Y = a+bX+cX2+dX3數學模型，第一拐點處為果實生長速率較快時期，是黃瓜產量與品質形成的關鍵時期，但相對生長速率最快時期因品種而異(見參考文獻，潘丹丹.黃瓜果實發育的細胞學研究.東北農業大學碩士學位論文，2009)。以往對黃瓜果實長度的研究，多集中在細胞學、內源激素與果實長度的關係、環境因素(溫度、光照、水分、CO2、礦質營養)對黃瓜果實發育的影響等方面，而對黃瓜果實長度進行遺傳分析和分子標記相關研究的報導較少。因此尋找與黃瓜果實長度相關基因緊密連鎖的分子標記，對於加快黃瓜育種進程具有重要的實際應用價值。

發明內容
本發明的目的是針對上述存在的問題提供ー種黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法，能夠更好地利用上述黃瓜果實長度相關基因分子標記，並將黃瓜果實長度相關基因分子標記應用於黃瓜育種的輔助選擇。上述的目的通過以下的技術方案實現黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法，該方法包括如下步驟以果實長度未知的黃瓜品種或品系的DNA為模板，以CSWCT28為引物進行PCR 擴增，對擴增產物進行3%瓊脂糖凝膠電泳檢測或者對擴增產物進行7. 5%的變性聚丙烯醯胺凝膠電泳檢測，如果擴增得到的帶型與已知的短果實長度的黃瓜東農803帶型一致， 則該果實長度未知的黃瓜品種或品係為短果實長度的品種或品系，所述PCR擴增的程序為94°C預變性5min，94°C變性30s，47°C退火lmin，;35個循環，72°C延伸lmin，72°C延伸 lOmin，最後4°C保存，所述的CSWCI^8為引物 1 5，-GAATTCAAAAGCATTTCAAAACTA-3，，
引物 2 5，-GAATTCAATTGGGTTTTTGAACCC-3，。所述的黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法，所述PCR擴增中，每20μ 1的 PCR 反應體系如下10Xbuffer :2μ l，2mM dNTP :2 μ 1，lOpmol/μ 1 的 Primer 1 :0. 8 μ 1， lOpmol/μ 1 的 Primer 2 :0. 8 μ l,25mM MgCl2 2. 5μ l,5U/y 1 的 TaqDNA 聚合酶0. 2 μ 1， 60ng/ μ 1 的模板 DNA 1 μ 1，ddH20 10. 7 μ 1。黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法在輔助選擇黃瓜育種材料中的應用。有益效果1.本發明直接以DNA的形式表現，在生物體的各個組織、各個發育階段均可檢測到，不受季節、環境限制，不存在表達與否等問題，因此，本發明在苗期就能夠通過分子標記對黃瓜品種和品系的果實長度進行鑑定和篩選，減少人力和物力的浪費，提高育種效率。同吋，DNA分子標記技術操作簡單，成本低廉，用時短，在一天內即可完成全部的檢測過程。2.所需樣本數量少，操作比較簡便，效率高，成本低廉。3.本發明易於掌握，不受環境條件影響，重複性高。


圖1黃瓜果實長度相關基因分子標記檢測結果(東農804)。M :DL2000DNAMarker ； 1 對照東農803 ；2 8 東農804單株。
具體實施例方式下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規生化試劑商店購買得到的。所有引物合成均由生エ生物工程(上海)有限公司完成。以下實施例中所有用到的黃瓜材料均為公知公用。實施例1 黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法，該方法包括如下步驟以果實長度未知的黃瓜品種或品系的DNA為模板，以CSWCI^S為引物進行PCR 擴增，對擴增產物進行3%瓊脂糖凝膠電泳檢測或者對擴增產物進行7. 5%的變性聚丙烯醯胺凝膠電泳檢測，如果擴增得到的帶型與已知的短果實長度的黃瓜東農803帶型一致， 則該果實長度未知的黃瓜品種或品係為短果實長度的品種或品系，所述PCR擴增的程序為94°C預變性5min，94°C變性30s，47°C退火lmin，;35個循環，72°C延伸lmin，72°C延伸 lOmin，最後4°C保存，所述的CSWCI^8為 引物 1 5，-GAATTCAAAAGCATTTCAAAACTA-3，，引物 2 5，-GAATTCAATTGGGTTTTTGAACCC-3，。實施例2 所述的黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法，所述PCR擴增中，每20μ 1的 PCR 反應體系如下10Xbuffer :2μ l，2mM dNTP :2 μ 1，lOpmol/μ 1 的 Primer 1 :0. 8 μ 1， lOpmol/μ 1 的 Primer 2 :0. 8 μ l,25mM MgCl2 2. 5μ l,5U/y 1 的 TaqDNA 聚合酶0. 2 μ 1， 60ng/ μ 1 的模板 DNA 1 μ 1，ddH20 10. 7 μ 1。實施例3 黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法在輔助選擇黃瓜育種材料中的應用。
4
以東北農業大學園藝學院黃瓜課題組培育出的黃瓜雜交新品種東農804為材料； 提取其單個植株DNA為模板，以本發明提供的1個黃瓜果實長度分子標記CSWCU8為引物進行PCR擴增，結果表明，東農804單株的PCR擴增帶型與短果實長度對照東農803擴增帶型完全一致，且PCR檢測結果與田間鑑定的吻合率為100%，證明了 CSWCI^8是ー個實用的黃瓜果實長度檢測的分子標記。
權利要求
1.ー種黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法，其特徵是該方法包括如下步驟以果實長度未知的黃瓜品種或品系的DNA為模板，以CSWCU8為引物進行PCR擴增，對擴增產物進行3%瓊脂糖凝膠電泳檢測或者對擴增產物進行7. 5%的變性聚丙烯醯胺凝膠電泳檢測，如果擴增得到的帶型與已知的短果實長度的黃瓜東農803帶型一致，則該果實長度未知的黃瓜品種或品係為短果實長度的品種或品系，所述PCR擴增的程序為94°C預變性5min，94°C變性30s，47°C退火lmin，;35個循環，72°C延伸lmin，72°C延伸lOmin，最後 4°C保存，所述的CSWCI^S為引物 1 :5，-GAATTCAAAAGCATTTCAAAACTA-3，，引物 2 :5，-GAATTCAATTGGGTTTTTGAACCC-3，。
2.根據權利要求1所述的黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法，其特徵是所述 PCR 擴增中，每 20 μ 1 的 PCR 反應體系如下10 X buffer :2μ l,2mM dNTP :2μ 1，IOpmol/ μ 1 的 Primer 1 :0. 8 μ 1，lOpmol/μ 1 的 Primer 2 :0. 8 μ l,25mM MgCl2 2. 5μ l,5U/y 1 的 TaqDNA 聚合酶0. 2 μ 1，60ng/ μ 1 的模板 DNA 1 μ 1，ddH20 10. 7 μ 1。
3.—種上述黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法在輔助選擇黃瓜育種材料中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種黃瓜果實長度相關基因的分子標記鑑定方法。本發明的方法包括以果實長度未知的黃瓜品種或品系的DNA為模板，以CSWCT28為引物進行PCR擴增，對擴增產物進行3％瓊脂糖凝膠電泳檢測或者對擴增產物進行7.5％的變性聚丙烯醯胺凝膠電泳檢測，如果擴增得到的帶型與已知的短果實長度的黃瓜東農803帶型一致，則該果實長度未知的黃瓜品種或品係為短果實長度的品種或品系，所述PCR擴增的程序為94℃預變性5min，94℃變性30s，47℃退火1min，35個循環，72℃延伸1min，72℃延伸10min，最後4℃保存。本發明用於鑑定黃瓜果實長度相關基因。
文檔編號C12Q1/68GK102586405SQ20111000410
公開日2012年7月18日 申請日期2011年1月11日 優先權日2011年1月11日
發明者周秀豔, 武濤, 王成, 秦智偉, 辛明 申請人:東北農業大學