一種紫杉醇磁性納米脂質體的製備方法

2023-07-14 03:17:51

專利名稱：一種紫杉醇磁性納米脂質體的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種抗癌藥物脂質體製劑及其製備方法，尤其涉及紫杉醇脂質 體的製備方法。
背景糹支術
紫杉醇[5"是近20年來抗肺瘤藥物領域的重大發現，分子式為C47H5^4N ，分子
質量853. 9，具有高度親脂性，不溶於水，血漿蛋白結合率89。/。-98%,終末半衰 期平均值為5. 3-17. 4h，主要經肝臟代謝，腎臟清除僅5%。此藥於1983年開始 用開卵巢癌和乳腺癌的臨床研究，1992年經FDA批准上市。它作用機理獨特， 可促進微管蛋白裝配成微管，但抑制微管的解聚，從而導致細胞死亡，從而 導致維管束的排列異常，使紡錘體失去正常功能導致細胞死亡，其對多種腫 瘤有治療效果，尤其對乳腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌及黑色素瘤治療效果 更突出。紫杉醇主要從紅豆杉中提取，但紅豆杉中紫杉醇含量並不高，如紫 杉醇含量最高的樹皮中含量也^f又為0. 01 %-0. 02 % ,提取lkg的紫杉醇需要 15-30噸樹皮，〗旦紫杉醇的市場需求量卻4支高，目前美國的年需求為300kg, 而且以每年20%的速度增長。 現有的上市劑型為注射型，以聚羥乙基蓖麻油乙醇(l:l)為溶劑，濃度為6g/L 的紫杉醇注射液，在4'C下可穩定5個月，使用前用右旋葡糖苷等稀釋至稀釋到 0.3- 1. 2mg/ml，用藥量為135 mg/m2。由於溶劑及紫杉醇本身的毒副作用阻礙 了其在臨床上的進一步應用。為改變這一現狀，研究人員對紫杉醇進行了生產 及藥物劑型改變的研究。在生產上實現其它工藝生產紫杉醇，如合成法、生物 技術法、真菌發酵法等。藥劑學方面的改性方法有前體藥物法、乳劑法、脂質 體法、和環糊精包埋等。其中脂質體法可以提高藥物的給藥量，實現藥物在體內的緩慢釋放，增加了藥物在體內的代謝時間，同時，因脂質體可以使用水作 溶劑，避免了因使用有機溶劑產生的毒副作用，具有4交好的發展前景。
目前，紫杉醇尚未有具有4交好靶向效果的靶向製劑。

發明內容
本發明的目的就是為了克服目前沒有較好的靶向作用的製劑的缺點，提供 紫杉醇磁性納米脂質體，本發明還提供了這種磁性脂質體的製備方法。 本發明的製備方法
1、 FeA納米石茲核的製備
以共沉澱法製備Fe304磁性納米粒子，在反應體系中加入一定體積pH為8-12 的氨水，不斷攪拌下滴加Fe"、 Fe,昆合液(按Fe"/Fe、2-G的比例混合)， 並用pH=12的氨水保持體系pH值，同時施加超聲作用。鐵鹽溶液滴加完畢 後，繼續攪拌反應一段時間，於恆溫水浴熟化，之後用去離子水離心清洗，
至檢測無cr存在為止，再用無水乙醇洗滌，在清洗的過程中施加超聲作用。
溶液真空千燥，研磨，即得Fe304磁性納米粒子粉末。經研究其顯著影響因 素和適合的反應條件為沉澱劑氨水的用量以鐵鹽混合液與氨7jc體積比為 1: 8最佳，維持反應體系pH=10,並施加氮氣保護；鐵鹽溶液濃度以1. Omol 1 為宜，且Fe、Fe'、l: 2,在合成階段和清洗階段分別施加超聲處理，合成 階段適宜的超聲條件聲強為348 w. cm—2、處理次數6次；清洗階段適宜的 超聲條件聲強為276 w. crrT2、處理次數4次。可以製得平均粒徑在10nm 左右、質量磁化率為9. 05 x 10—2 m3 kg—的Fe304磁性納米粒子。
2. Fe34磁性納米粒子表明改性
將已制好的Fe^磁性納米粒粉末加入到已調好PH值的100mL氨水中，加熱 攪拌至某一溫度，緩慢加入一定量的油酸，保溫20min,冷卻，用i茲鐵將絮 狀沉澱吸住，傾去廢液。餘下的絮沉物加入一定量丙酮處理，除去多餘的 油酸及丙酮，即得產品。考察不同的pH值、油酸用量及改性溫度對改性效果的影響。pH值選擇範圍為pH=6-10;油酸用量為油酸f茲粉 (W/W)=l: 1. 5-1: 5;溫度考察範圍在40-80°C。結果表明，pH=9，油酸用量 為油酸:磁粉=1:2,溫度為7(TC時有較理想的表面改性效果。油酸的包覆過 程需要吸收能量，在7(TC以下，隨著溫度的升高油酸吸附量增大，至7(TC 時達到平衡，再隨著溫度繼續升高，解吸的速度也迅速增大甚至大於吸附 速度，使吸附量反而下降。 紫杉醇磁性納米脂質體的製備
油相(硬脂酸)、表面活性劑(吐溫-80)、助表面活性劑(乙醇)在73土2 。C水浴中混合，滴加入一定量的蒸餾水，形成透明體系，迅速加入分散好 的磁液，攪拌均勻，形成含磁懸液，將該混懸液注入置於冰浴中的水分散， 得到產品粒子懸液，將懸液透析清洗，冷凍乾燥，即得磁性固體脂質納米 粒產品。較理想的紫杉醇磁性固體脂質納米粒給藥體系的製備條件為硬 脂酸為0.5g, K(硬脂酸/(Tween80+乙醇))=1:8,吐溫80:乙醇水 =9. 8: 39. 3: 50. 9,硬脂酸改性磁粒=1: 1 (W/W),紫杉醇用量為100mg,所制 得的紫杉醇磁性固體脂質納米粒平均粒徑為150-170nm,包封藥量為98.29 mg,藥物包封率為98. 29%(w/w)。 4.體內外》茲耙向性
本發明的紫杉醇磁性納米脂質體，體外釋放實驗表明，具有足夠的磁響應 性，其在外加磁場的作用下可以順利的到達並聚集在靶部位。在體外磁導 向定位實驗中，在設定的磁場範圍(0. 4T、 0. 6T、 0. 8T)、作用時間(10-120min) 條件下，所製備的紫杉醇磁性固體脂質納米粒子顯示出良好的體外磁靶向 性，尤其是在磁場強度為0. 8T，作用時間為30min時，可以達到在靶區的 100%滯留率。
體內的靶向實驗分別給予大鼠紫杉醇脂質體和紫杉醇磁性納米脂質體，在肝
部位施加O. 5T的磁場，處死後測定耙部位的紫杉醇濃度，實驗證明耙部位與非靶向部位存在顯著差別(P<0. 2)。 5.靶向治療棵鼠胂瘤
取對數生長期的SPCA-I細胞，注射棵鼠前肢腋下，待胂瘤生長至6mm時， 將棵鼠隨機分為六組，分別給予注射藥物分別為l)尾靜脈注射生理鹽水 (NS)組；2)尾靜脈注射空白脂質體(LPS); 3 )尾靜脈紫杉醇脂質體(Taxol -LPS ); 4 )尾靜脈注射磁性空白脂質體(Mag - LPS ); 5 )尾靜脈注射磁性 靶向脂質體(Taxol-Mag),體外不施加磁場；6 )尾靜脈注射磁性靶向脂 質體(Taxol-Mag )，體外施加》茲場，f茲場強度為0. 5特斯^立(T )。注射的 紫杉醇磁性納米脂質體乳液中紫杉醇的含量為，注射量為0. 05ml/10g。重 量抑瘤率為
分組
抑制率(％ )
生理鹽水組
0. 316
空白脂質體 -8. 01
紫杉醇脂質體 10. 10
磁性脂質體 1. 74
磁性紫杉醇脂質體(無磁場) 19. 16
磁性紫杉醇脂質體(加磁場) 27. 53
重(g)
0.718 ±
0. 775 ± 0. 350
0. 645 ± 0. 257
0. 705 ± 0. 165
0. 580 ± 0. 066
0. 520 ± 0. 189*
注 *為P < 0. 05,相對生理鹽水。從已有的試驗結果我們可以看到磁性脂質體作為 一種藥物劑型還是有較大的發
展前景的。
權利要求
1、採用微乳液-低溫固化的方法製備紫杉醇磁性納米脂質體，其過程如下油相(硬脂酸)、表面活性劑(吐溫-80)、助表面活性劑(乙醇)在73±2℃水浴中混合，滴加入一定量的蒸餾水，形成透明體系，迅速加入分散好的磁液，攪拌均勻，形成含磁懸液，將該混懸液注入置於冰浴中的水分散，得到產品粒子懸液，將懸液透析清洗，冷凍乾燥，即得磁性固體脂質納米粒產品。
2、 權利要求1所述的磁性納米脂質體，其配方為硬脂酸為5-10g，油酸 為1. 5-2. 5g, FeA為5-10g，吐溫-80為6-12g,乙醇為2-5g,水為35-65g 時製備的脂質體粒子粒徑在150nm 170nm之間，脂質體具有較好的穩定性 和磁響應性；當紫杉醇用量為lg時具有最大的藥物包封率，為98. 29%(W/W)。
3、 權利要求1所述的磁性納米脂質體，其脂質體內核為Fe304磁性納米粒子， 可以藉助外加磁場的作用將脂質體送到靶部位。
4、 權利要求1所述的紫杉醇磁性納米脂質體的製備方法由以下步驟構成 (1)以鐵鹽和氨水共沉澱法製備Fe304磁性納米粒子，經研究其顯著影響因 素和適合的反應條件為沉澱劑氨水的用量以鐵鹽混合液與氨水體積比為 1: 8最佳，維持反應體系pH=10,並施加氮氣保護；鐵鹽溶液濃度以1. Omol -L一1 為宜，且Fe":Fe'、l: 2,在合成階段和清洗階段分別施加超聲處理，可以 製得平均粒徑在10mn左右、質量磁化率為9. 05 x l(T2 m3 , kg—1的FeA磁性 納米粒子；(2 )選擇微乳液-低溫固化法製備紫杉醇磁靶向固體脂質納米粒給藥系 統，結果如下油酸能有效地對Fe^磁性納米粒子U茲核)進行表面親油改 性，使其能很好地被脂質材料包埋，並保持穩定；較理想的紫杉醇磁性納 米脂質體的製備條件為硬脂酸為Q. 5g, 改性的FeA粒子為0. 5g,吐溫-80為0. 8g,乙醇為3.2g，水為4g,紫杉醇用量為100mg;所製得的紫杉醇/F茲性固體脂質納米粒平均粒徑200rnn左右，藥物包封率為87. 70%(w/w), 可見微乳液-低溫固化法是較理想的製備紫杉醇磁性固體脂質納米粒的方法；(3) 對於製備的脂質體進行低溫冷凍乾燥，得到紫杉醇磁性固體納米脂質 體；(4) 施加的聚乙二醇的量對實驗結果的影響脂質體各組分的配比為Fe304 l.OOg,吐溫-80 1.60g,乙醇6.40g,硬脂酸1. OOg,水8g混合反應製備 紫杉醇磁性納米脂質體乳液後，倒入含有6g聚乙二醇-800的36ml生理鹽 水組中，具有4交好的穩定性。
全文摘要
紫杉醇是近20年來抗腫瘤藥物領域的重大發現，具有高度親脂性，不溶於水。現有的上市劑型為注射型，以聚羥乙基蓖麻油∶乙醇(1∶1)為溶劑，使用前用右旋葡糖苷等稀釋至稀釋到0.3-1.2mg/ml。由於溶劑及紫杉醇本身的毒副作用阻礙了其在臨床上的應用。目前，紫杉醇尚未有較好靶向效果的靶向製劑。本發明的目的就是提供紫杉醇磁性納米脂質體靶向製劑，這種磁性脂質體的製備方法是採用微乳液-低溫固化的方法製備，其過程如下油相(硬脂酸)、表面活性劑(吐溫-80)、助表面活性劑(乙醇)在73±2℃水浴中混合，滴加入一定量的蒸餾水，形成透明體系，迅速加入分散好的磁液，攪拌均勻，形成含磁懸液，將該混懸液注入置於冰浴中的水分散，得到產品粒子懸液，將懸液透析清洗，冷凍乾燥，即得磁性固體脂質納米粒產品。
文檔編號A61K47/02GK101590017SQ200810028379
公開日2009年12月2日 申請日期2008年5月29日 優先權日2008年5月29日
發明者吳新榮, 辛勝昌 申請人:廣州軍區廣州總醫院