抗口蹄疫血清的製備方法
2023-07-11 17:09:41
專利名稱：抗口蹄疫血清的製備方法
技術領域：
本發明屬生物製品領域，具體涉及抗口蹄疫血清的製備方法背景技術口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的反芻動物一種急性烈性傳染病。口蹄疫感染率和發病率均高，潛伏期3天左右。口蹄疫病毒的嗜好組織是蹄部有毛與無毛交界處的上皮組織與口腔黏膜細胞，在細胞漿內複製病毒粒子，使細胞受損後互相連接成水泡，出現症狀後轉歸和排毒。
目前使用的抗口蹄疫的方法有口蹄疫滅活疫苗接種動物，使動物產生抗體；也有用中藥製劑治療和預防口蹄疫。
用口蹄疫滅活疫苗接種動物後，15天以上的時間，才產生較強的免疫力，但保護率只有80％左右。用中藥製劑治療和預防口蹄疫，也收效甚微。另外我國飼養家畜量大、分散、防疫體系不健全、疫苗供應和強制接種很難落實，並且疫苗質量還有待提高。在發生疫情時，對未免疫的家畜，口蹄疫抗體水平低下的家畜，處於潛伏期的家畜，接種疫苗但抗體水平還未達到抗體保護值的家畜，疫苗保護率低的牲畜群將產生嚴重危害。
抗口蹄疫血清克服了上述已有抗口蹄疫技術不足之處，可以用於在發生疫情時對未免疫的家畜，口蹄疫抗體水平低下的家畜的緊急預防和治療。也可以用於家畜在長途運輸中的預防用途。
發明內容
本發明的目的是提供一種抗口蹄疫血清的製備方法。
本發明方法是通過如下技術方案和步驟實現1)選擇健康家畜，包括豬、馬、牛；2)用口蹄疫滅活疫苗對家畜進行基礎免疫，免疫途徑為頸、背部皮下，注射兩次，第一次3ml，6個點，每點0.5ml；間隔14天，第二次注射6ml，6個點，每點1ml；3)用口蹄疫滅活疫苗對家畜進行強化免疫，基礎免疫完成後的21天開始，免疫途徑為頸、背部皮下、肌肉。注射三次，第一次注射7ml，皮下4個點，肌肉3個點，每點1ml；間隔5-7天，第三次注射11ml，皮下4個點，肌肉2個點，耳根部皮下2個點，後海穴1個點，肩部淋巴結2個點，每點1ml；4)強化免疫後的第10天，用正向間接血凝(IHA)實驗盒和液相阻斷酶聯免疫吸附實驗(LB-ELISA)實驗盒測定抗血清效價；5)採血，當抗體效價達到峰值(LBE≥3.01(1/1024)，IHA≥11log2)時，約12-15天，進行第一次採血，間隔3-5天進行第二次採血6)血清分離，採用自然凝結加壓法7)抗血清提取，採用辛酸提取法。
具體實施例方式
1.挑選健康豬2.用口蹄疫滅活疫苗對豬進行基礎免疫，免疫途徑為頸、背部皮下，注射兩次，第一次3ml，6個點，每點0.5ml；間隔14天，第二次注射6ml，6個點，每點1ml；3.用口蹄疫滅活疫苗對豬進行強化免疫，基礎免疫完成後的21天開始，免疫途徑為頸、背部皮下、肌肉。注射三次，第一次注射7ml，皮下4個點，肌肉3個點，每點1ml；間隔5-7天，第三次注射11ml，皮下4個點，肌肉2個點，耳根部皮下2個點，後海穴1個點，肩部淋巴結2個點，每點1ml；4.強化免疫後的第10天，用正向間接血凝(IHA)實驗盒和液相阻斷酶聯免疫吸附實驗(LB-ELISA)實驗盒測定抗血清效價；5.採血，當抗體效價達到峰值(LBE≥3.01(1/1024)，IHA≥11log2)時，約12-15天，進行第一次採血，間隔3-5天進行第二次採血6.血清分離，採用自然凝結加壓法7.抗血清提取，採用辛酸提取法(1)待提樣品(血清)，用60m mol/L ph4.0醋酸緩衝液3-4倍，調ph至4.5；(2)室溫，邊強力攪拌邊加入辛酸25μl/ml，攪拌30-40′；(3)10000Xg離心30′定性濾紙濾過，取濾液；(4)加1倍體積PBS，調PH至7.4；(5)冰浴溶至4℃，0.27g硫酸銨/ml混合後，攪拌30′；(6)5000xg離心15′，收集沉澱，溶於少量PBS中；(7)1500xg離心20′。取上清，用中空纖維過濾系統濾過即得。
權利要求
1.一種豬、牛等獸用的抗口蹄疫血清的製備方法，其特徵在於採用口蹄疫滅活疫苗對家畜進行免疫，產生抗血清，採血並分離得到抗血清。
2.根據權利要求1所述的抗口蹄疫血清的製備方法，其特徵在於所述方法包括下述步驟，1)選擇健康家畜，包括豬、馬、牛；2)用口蹄疫滅活疫苗對家畜進行基礎免疫，免疫途徑為頸、背部皮下，注射兩次，第一次3ml，6個點，每點0.5ml；間隔14天，第二次注射6ml，6個點，每點1ml；3)用口蹄疫滅活疫苗對家畜進行強化免疫，基礎免疫完成後的21天開始，免疫途徑為頸、背部皮下、肌肉。注射三次，第一次注射7ml，皮下4個點，肌肉3個點，每點1ml；間隔5-7天，第三次注射11ml，皮下4個點，肌肉2個點，耳根部皮下2個點，後海穴1個點，肩部淋巴結2個點，每點1ml；4)強化免疫後的第10天，用正向間接血凝(IHA)實驗盒和液相阻斷酶聯免疫吸附實驗(LB-ELISA)實驗盒測定抗血清效價；5)採血，當抗體效價達到峰值(LBE≥3.01(1/1024)，IHA≥11log2)時，約12-15天，進行第一次採血，間隔3-5天進行第二次採血6)血清分離，採用自然凝結加壓法7)抗血清提取，採用辛酸提取法。
全文摘要
本發明屬於生物製品領域，具體涉及一種抗口蹄疫血清的製備方法。本發明方法採用的技術方案是採用口蹄疫滅活疫苗對家畜進行免疫，產生抗血清，採血並分離得到抗血清。抗口蹄疫血清克服了已有抗口蹄疫技術的不足，可以用於在發生疫情時對未免疫的家畜、口蹄疫抗體水平低下的家畜的緊急預防和治療，也可以用於家畜在長途運輸中的預防用途。
文檔編號A61P31/00GK1765370SQ20041001117
公開日2006年5月3日 申請日期2004年10月26日 優先權日2004年10月26日
發明者屈國勝 申請人:屈國勝