一個治療肺動脈高壓的新靶點的製作方法
2023-07-29 02:12:01 2
一個治療肺動脈高壓的新靶點的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一個治療肺動脈高壓的新靶點。該治療肺動脈高壓新靶點針對五羥色胺2B型受體(5-HT2BR)，肺動脈高壓的顯著性特點為肺動脈的高收縮性，抑制5-HT2BR活性可明顯抑制肺動脈的收縮功能，該受體可以作為新的肺動脈高壓的治療靶點。
【專利說明】一 ^Iv治療肺動脈高壓的新朝點
【技術領域】
[0001]本發明涉及五羥色胺2B型受體(5-HT2BR)通過參與肺動脈的收縮從而在肺動脈高壓過程中起到重要作用，從而作為治療肺動脈高壓的新靶點。 【背景技術】
[0002]肺動脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)是以肺動脈高收縮性和血管重構為特點並伴隨肺動脈壓カ增高，右心室衰竭的慢性疾病[1]，PAH已成為一類嚴重威脅人類身心健康的常見疾病。正常人在靜息狀態下肺動脈壓カ為12-16mmHg，而當肺動脈壓カ高於25mmHg吋，即被定義為肺動脈高壓。PAH的主要症狀包括呼吸短促，頭暈和暈厥，胸疼等。PAH分為原發性與繼發性。繼發性肺動脈高壓常與藥物、毒素、HIV感染、膠原血管病-硬皮病、慢性阻塞性肺病(COPD)、間質性肺病(ILD)、睡眠呼吸障礙、肺泡通氣不足等有關。PAH沒有有效的治療藥物，現有治療方法僅能緩解PAH發病過程。利尿藥和強心藥通過調節心臟功能緩解PAH症狀，但不針對PAH發病原因；鈣離子通道阻斷劑和內皮素受體阻斷劑屬於血管舒張類藥物，僅適用於少數人群；吸氧是常規治療方法。因此目前對PAH潛在的有效治療靶點的研究有廣闊的應用前景。
[0003]PAH與內皮素-1 (ET-1)、血栓素A2 (TXA2)、一氧化氮(NO)、前列環素(PGI2)、轉化生長因子(TGFP)等血管舒縮及細胞增殖相關因子有密切關係。五羥色胺(5-hydroxytryptamin, 5-HT)在PAH中有重要的病理生理意義,這種觀點於20世紀中旬被提出。這是由於減肥藥aminorex的使用在20世紀60年代在奧地利、德國及瑞士等國家引起PAH的廣泛流行，而fenfluramine與dexfenfIuramine於20世紀末在歐美國家廣泛使用導致了又ー批PAH的高發。Aminorex和fenfluramine藥物具有抑制5-HT的吸收作用且促進5-HT的釋放，造成患者血漿中5-HT濃度明顯增高，從而誘導了 PAH的發生[2_4]。研究發現，連續服用dexfenf Iuramine三個月，摧患PAH的機率增加了 23倍[4]。上述事實提示5-HT在PAH發病過程中具有重要作用。
[0004]5-HT具有多種受體，其中受體5_HT1B、2A和2B存在於肺動脈中[5]。PAH肺動脈5-HT2BR的表達水平升高，而敲除5-HT2BR或使用其抑制劑可以逆轉缺氧誘導的小鼠PAH的發生發展過程[6]。提示5-HT2BR在PAH發病過程中具有關鍵作用。但5-HT2BR在PAH中的作用機制及其調控還不清楚。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種在肺動脈高壓過程中參與血管收縮的受體5-HT2BR，作為肺動脈高壓治療的新祀點。
[0006]本發明所提供5-HT2BR蛋白序列號為:NP_058946.1【專利附圖】
【附圖說明】
[0007]圖1為5-HT2BR在肺動脈高壓大鼠中表達增高[0008]A, B為在肺動脈中利用免疫組化染色檢測5-HT2BR表達結果
[0009]C，D為在肺動脈中利用western blot檢測5-HT2BR表達結果
[0010]E，F為在肺動脈中利用PCR檢測5-HT2BR表達結果
[0011]圖2為5-HT2BR特異性激動劑誘導的肺動脈收縮在肺動脈高壓大鼠中增強
[0012]A,B為在野百合鹼(monocrotaline,MCT)誘導的肺動脈高壓大鼠中5-HT2BR介導的肺動脈收縮
[0013]C，D為在慢性缺氧誘導的肺動脈高壓大鼠中5-HT2BR介導的肺動脈收縮【具體實施方式】
[0014]圖1為5-HT2BR在肺動脈高壓大鼠中表達增高
[0015]實驗建立了兩種肺動脈高壓大鼠模型，野百合鹼(monocrotaline, MCT)及慢性缺氧(chronic hypoxia, CH)誘導的PAH大鼠模型。單次皮下注射60mg/Kg劑量的MCT, 3周後即可形成PAH大鼠模型。慢性缺氧PAH大鼠模型的建立是將大鼠置於10%氧氣濃度的環境下持3周，即可形成肺動脈高壓大鼠模型。
[0016]我們利用免疫組化實驗方法觀察肺動脈5-HT2BR在PAH疾病過程中的表達。使用肺動脈冰凍切片進行5-HT2BR免疫組化染色，發現在MCT及CH大鼠肺動脈平滑肌中，5-HT2BR表達增高。提取肺動脈蛋白及mRNA，利用Western blot和RT-qPCR檢測5-HT2BR表達水平，也證實了這ー變化。
[0017]圖2為5-HT2BR特異性激動劑誘導的肺動脈收縮在肺動脈高壓大鼠中增強
[0018]在5-HT2BR表達變化的基礎上，我們利用離體微血管張カ測定儀檢測5-HT2BR介導的肺動脈收縮功能的變化 。分離大鼠的肺動脈，置於微血管離體張力測定儀中，在37°C預熱的krebs液平衡90分鐘，L-NAME預處理10分鐘以排除內皮舒張功能。使用5-HT2BR特異性激動劑BW723C86刺激血管，觀察血管張カ變化。結果顯示正常大鼠肺動脈對於5-HT2BR激動劑基本無收縮反應，但在MCT或慢性缺氧誘導的PAH大鼠中，BW723C86誘導的肺動脈收縮明顯增強，這ー實驗說明PAH肺動脈的高收縮性是由5-HT2BR介導的。
【權利要求】
1.ー個治療肺動脈高壓的新靶點。該治療肺動脈高壓新靶點針對五羥色胺2B型受體(5-HT2BR)，肺動脈高壓的顯著性特點為肺動脈的高收縮性，抑制5-HT2BR活性可明顯抑制肺動脈的收縮功能，該受體可以 作為新的肺動脈高壓的治療靶點。
【文檔編號】C07K14/705GK103467596SQ201210183131
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2012年6月6日 優先權日:2012年6月6日
【發明者】汪南平, 劉雅涵, 趙蓓蕾 申請人:北京大學