用於提高動物免疫力的含半胱胺組合物的製作方法

2024-01-21 11:37:15

專利名稱：用於提高動物免疫力的含半胱胺組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及半胱胺或含半胱胺組合物在調節動物免疫力，尤其是提高脊椎動物免疫力方面的用途。
背景技術：
動物的生存依賴於有效的免疫系統。動物、尤其是脊椎動物的免疫系統由許多器官和細胞構成，免疫系統保護身體免受感染、疾病和異物如病毒和細菌的侵害。已提出各種提高身體免疫力的組合物來治療疾病或僅僅改善身體的全面良好狀態。例如，某些用於HIV感染治療的藥物通過設法提高患者的全身免疫力來治療感染HIV的患者。然而，這些藥物並非總是可靠的並且傾向於導致許多不受歡迎的副作用。

發明內容
因而本發明的目的是解決以上問題，或者至少向公眾提供一種有用的替代物。本發明提供用於調節動物免疫力的組合物；該組合物可單獨使用或與其它現有組合物或藥物組合使用。
根據本發明的第一方面，提供半胱胺、半胱胺鹽、或含有半胱胺或其鹽的組合物用於提高動物免疫力的用途。
根據本發明的第二方面，提供用於提高動物免疫力的組合物，包含半胱胺、半胱胺鹽、或含有半胱胺或其鹽的組合物。
根據本發明的第三方面，提供含有上述組合物的用來提高動物免疫力的動物飼料添加劑。
根據本發明的第四方面，提供含有上述組合物的用來提高動物免疫力的動物飼料。
根據本發明的第五方面，提供一種提高動物免疫力的方法，包括將半胱胺、半胱胺鹽、或含有半胱胺或其鹽的組合物施用到動物體內。
提高免疫力可以包括增加動物體內白介素-2(IL-2)的水平。提高免疫力還可包括增加動物體內白介素-6(IL-6)的水平。具體地，提高免疫力還可包括刺激動物體內淋巴細胞的產生。研究表明IL-2或IL-6的水平越高則免疫系統通常就相應地越強。已經確定上述用途對於脊椎動物如牛和家禽尤其有效。
優選的是，所述組合物可包含1-95重量％的半胱胺或其鹽，和包含選自環糊精及其衍生物的穩定劑的包合物主分子(host material)組合物。合適的是，含半胱胺組合物可包含1-75重量％的半胱胺或其鹽。更合適的是，含半胱胺組合物可包含1-40重量％的半胱胺或其鹽。
優選的是，所述含半胱胺組合物可包含1-60重量％的包合物主分子組合物。合適的是，所述含半胱胺組合物可包含10-40重量％的包合物主分子組合物。所述包含在包合物主分子組合物中的穩定劑可選自環糊精(-CD)、甲基β-環糊精(M-β-CD)、羥丙基β-環糊精(HP-β-CD)、羥乙基β-環糊精(HE-β-CD)、聚環糊精、乙基β-環糊精(E-β-CD)和支化環糊精。
優選的是，所述含半胱胺組合物可包含填料、崩解劑、粘結劑、調味劑和氣味劑、以及包衣材料中的至少一種。具體地，所述含半胱胺組合物可包含1-20重量％的包衣材料。有利的是，所述包衣材料可為腸溶性的，並選自鄰苯二甲酸醋酸纖維素、鄰苯二甲酸醋酸澱粉(starch acetate phthalate)、鄰苯二甲酸甲基纖維素、鄰苯二甲酸的葡萄糖或果糖衍生物、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚甲基乙烯基醚、馬來酸酐共聚物的部分酯化物和甲明膠。
優選的是，所述含半胱胺組合物可包含1-90重量％的填料。合適的是，所述含半胱胺組合物可包含1-60重量％的填料，並且所述填料可選自粉末狀的纖維素、澱粉和硫酸鈣。
優選的是，所述含半胱胺組合物可包含5-50重量％的粘結劑和崩解劑。合適的是，所述含半胱胺組合物可包含15-35重量％的粘結劑和崩解劑。所述粘結劑和崩解劑可選自羥丙基澱粉、微生物藻酸鹽、微晶纖維素和澱粉。
優選的是，所述含半胱胺組合物可包含0.05-0.3重量％的用來增強其味道的調味劑和氣味劑。
合適的是，所述含半胱胺組合物可形成為顆粒，每個顆粒包含至少一層包衣材料。所述含半胱胺組合物可優選形成為顆粒，其中的半胱胺或其鹽受到所述包合物主分子組合物的保護而免受其周圍環境的影響。每個所述含半胱胺組合物顆粒可具有0.28-0.90mm尺寸的直徑。該尺寸範圍內的所述顆粒能夠更容易被動物吞服。所述含半胱胺組合物可優選由腸溶性包衣材料包封。
所述含半胱胺組合物可用於製造動物飼料添加劑。所述含半胱胺組合物還可用於製造動物飼料。具體地，所述含半胱胺組合物可適用於動物口服。不過，用於提高動物免疫力的半胱胺可通過其它手段如通過直接注射來施用於動物。
本發明基於以下論證，即當施用於動物如牛時，半胱胺或含半胱胺組合物具有調節免疫力尤其是提高其免疫力的功效。在此發現之前，不存在半胱胺或其變體或衍生物會具有這種功效的提示或充分的暗示。本發明還提供用於提高動物免疫力的飼料和飼料添加劑以及提高動物免疫力的方法。
具體實施例方式
在中國專利公開No.CN1358499和國際專利公開No.WO02/48110中描述了半胱胺的一種作用，其內容在此處引入。然而，先前未知的半胱胺的作用是其對提高動物免疫力的作用。半胱胺或含半胱胺組合物對動物免疫力的作用闡述如下。具有生理活性的半胱胺被認為起生長刺激劑的作用。天然半胱胺是泛酸輔酶模式的輔酶A(也稱為CoA-SH或CoA)的一部分。在新陳代謝過程中，輔酶A充當二氫磺醯基或氫磺醯基變體的載體，其連結輔酶A的氫磺醯基。
對其它動物如豬、家禽、禽鳥、山羊、兔和魚進行的實驗已表明半胱胺能夠減少動物體內的生長激素抑制素(SS)。這增加動物血液中生長激素的水平，同時提高包括胰島素樣生長因子I(IGF-I)、胰島素、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、四碘甲狀腺原氨酸(trthyroxine，T4)和β-內啡肽(β-END)的各種其它生長刺激因子的水平。
至於本發明，表明半胱胺可以通過增加白介素-2(IL-2)和/或白介素-6(IL-6)的水平來提高免疫力。
IL-2屬於稱作細胞因子的一類可溶性的調節蛋白。IL-2是由T(H)淋巴細胞和其它細胞受抗原、有絲分裂原和其它細胞因子活化後分泌的133-胺基酸糖蛋白。IL-2刺激T淋巴細胞的增殖和細胞毒性，增強NK細胞、B-淋巴細胞、巨噬細胞和單核細胞的微生物殺傷活性和細胞毒性(Sule NS，Nerurkar RP，Kamath S；2001；Interleukin as a therapeutic agent；J Assoc Physicians India.49897-900)。表明IL-2在免疫系統中起著重要的作用。
研究已表明IL-2導致在HIV疾病的所有階段的HIV感染患者中限制HIV的傳播(Paredes R，Lopez Benaldo de Quiros JC，Femandez-Cruz E，Clotet B，Lane HC；2002；The potential role of interleukin-2 in patients with HIV infection.AIDS Rev4(1)36-40)。IL-2還是一種有前景的免疫治療藥，介導人體內慢性生長癌(RosenbergSA.200；Progress in the development of immunotherapy for the treatment of patients withcancer；J Intern Med 250(6)462-75)、轉移性黑細胞癌、急性粒細胞白血病和轉移性腎細胞癌(Atkins MB；2002；Interleukin-2Clinical applications；Semin Oncol 29(3 Suppl7)12-7)的消退。
然而，在提交本申請時，自醫學文獻中出現第一例IL-2陽性臨床報告以來已有約15年，自歐洲批准中等劑量連續輸注IL-2以來已有10年，自美國批准通用高劑量IL-2丸劑也已有5年，現在IL-2已被當作一種標準療法，單獨或結合化學療法或生物療法用於疾病治療(Dillman RO.1999.What to do with IL-2？Cancer BiotherRadiopharm 14(6)423-34)。在IL-2被廣泛接受用於提高動物免疫力之前經歷了相當長的時間。
大量報導已表明重組(rb)IL-2對重要乳腺免疫細胞功能的免疫調節作用。體外或體內研究表明rbIL-2顯著增強單核細胞的增殖(Torre，PM.Konur PK.and OliverSP；1992；Proliferative response of mammary gland mononuclear cells to recombinatantbovine interleukin-2；Vet；Immunol.Immunopathol.32351)。研究已表明分離自乳腺組織的淋巴細胞群在與經IL-2體外培養後增加了細胞毒性和殺菌活性(Shafer WeaverKA.and Sordillo LM；1996；Enhancing bactericidal activity of bovine lymphoid cellsduring the peripartument period；J.Dairy Sci.791347)(Sordillo LM.Campos M.andBabiuk LA；1991；Antibacterial activity of bovine mammary gland lymphocytes followingtreatment with interluekine-2；J.Dairy Sci.743370)。
至於IL-6，IL-6作用於免疫系統的大多數主要效應細胞，包括B-淋巴細胞、輔助T-淋巴細胞、細胞毒性T-淋巴細胞和殺傷細胞。在體外培養的B-淋巴細胞中，IL-6作為後期分化因子在B-細胞轉化為分泌免疫球蛋白的漿細胞的過程中是必需的。此外，已表明IL-6在體內增加二級、而非初級的抗體應答。這些和其它數據表明IL-6在抗原特異性免疫應答的進程中起著主要作用。
許多研究表明IL-6可以影響外周和胸腺T-細胞的增殖。此外，IL-6可以刺激細胞毒性T-細胞從胸腺前體的分化。已表明IL-6增加自然殺傷細胞的活性。
近期對造血過程中細胞因子功能的研究已經表明IL-6與白介素-3(IL-3)協同增強幹細胞的分化。
在體內，IL-6在炎症中的作用是啟動生成急性期蛋白質的肝應答，所述的急性期蛋白如膠原酶、基質溶素和72-kDa明膠酶，這些蛋白質催化降解結締組織基質。IL-6還可能通過調節組織降解活性的平衡在局部組織部位的炎症中發揮作用。(Richards CD，Scamurra RW，and Murtaugh MP.Interleukin-6.p155-157.InCytokinesin animal health and disease.1995.Edited by Michael J.Myers and Michael P.Murtaugh.Marcel Deckker，Inc.New York，Basel，Hong Kong)兩種效應物機制介導免疫應答。稱作抗體的特異分子介導某些免疫應答。抗體的合成發生在稱作B-淋巴細胞或B-細胞的淋巴細胞亞群中。抗體介導的免疫稱作體液免疫。其它免疫應答由細胞介導。血液中所有類型的淋巴細胞均參與細胞介導的免疫。然而，應答的特異性取決於稱為T-淋巴細胞或T-細胞的淋巴細胞亞群。成熟的T-細胞包括輔助T-細胞、細胞毒性抑制T-細胞和記憶T-細胞。需要輔助T-細胞通過識別外來抗原並釋放能促進其它淋巴細胞(B-細胞和T-細胞)對該抗原應答的因子來啟動免疫應答。細胞毒性T-細胞在接觸靶細胞時，給予「致命一擊」以破壞靶細胞，如腫瘤或外源細胞。
某些天然化合物具有引起淋巴細胞分裂的能力。這些化合物中最重要的是稱為凝集素的一類蛋白質，其通常分離自植物。凝集素的實例包括可得自紅芸豆(菜豆)的植物血凝素(PHA)和可得自刀豆(canavalis ensiformis)的伴刀豆球蛋白A(ConA)。這些凝集素能夠特異性結合淋巴細胞膜上的糖以刺激核苷酸摻入、磷脂合成、DNA合成和細胞分裂。PHA刺激原代T-細胞分裂。這些有絲分裂圓可用來幫助T-細胞分化，以及通過測量所引起的應答來證明T-細胞系統應答非免疫刺激的能力(Sule NS，Nerurkar RP，Kamath S.2001.Interleukin-2 as a therapeutic agent.J AssocPhysicians India.49P897-900)。
本發明教導半胱胺用於提高動物免疫力的用途。據信，半胱胺降低生長激素抑制素的水平並提高生長激素的水平，這導致促分裂素誘導的淋巴細胞增殖增加。具體而言，本發明採用含半胱胺組合物，即包封在微膠囊中的半胱胺化合物。以下實驗試圖證明半胱胺或含半胱胺組合物對動物的免疫系統和免疫力的影響。所述實驗還試圖證明半胱胺或含半胱胺組合物對動物體內血清IL-2濃度和血漿IL-6濃度的影響。
所述適用於本發明的含半胱胺組合物包含兩種主要成份，即1-95重量％的半胱胺(或其鹽，例如半胱胺鹽酸鹽，或半胱胺的其它藥學上可接受的酸加成鹽)和1-80重量％的載體，如包合物主分子。半胱胺的化學式為HSCH2CH2NH2。下文所提到的術語「半胱胺」指半胱胺和/或其鹽類化合物。半胱胺及其鹽在化學文獻中是公知的。
半胱胺鹽的通用化學式為C2H7NS·X，其中X可以是HCl、H3PO4、酒石酸氫鹽、水楊酸鹽等。所用半胱胺優選達到藥學上可接受的標準，並且其中碳、氫、氮和硫的含量基本上分別為31.14重量％、9.15重量％、18.16重量％和41.56重量％。雖然含半胱胺組合物中半胱胺的可用含量為1-95重量％，但是可使用優選1-75重量％、更優選1-40重量％的半胱胺。半胱胺是含半胱胺組合物的主要活性成分之一。然而，已經確認如果含半胱胺組合物中半胱胺的含量超過95重量％，則該組合物與基礎飼料的混合會相當困難，並且該組合物提高動物免疫力的效果將受到妨礙。
所述包合物主分子可主要包含選自甲基β-環糊精(M-β-CD)、羥丙基β-環糊精(HP-β-CD)、羥乙基β-環糊精(HE-β-CD)、聚環糊精、乙基β-環糊精(E-β-CD)和支化環糊精的環糊精和/或其衍生物。環糊精的通用化學式為(C6O5H9)n·(C6O5H9)2並且其結構式如下。
其中α-CD n＝4；β-CD n＝5；γ-CD n＝6。(環糊精是α-D-吡喃型葡萄糖的環狀低聚體)。
值得注意的是，優選使用β-CD形式的環糊精，因為其分子內徑為約6-8，使其特別適合選擇用作製備含半胱胺組合物包括使用包合方法的包合物主分子。下文所提到的術語「環糊精」指環糊精和/或其衍生物。可以使用具有穩定並保護半胱胺免受降解的性質的任何環糊精衍生物。例如，可以使用以上提及的任意一種環糊精或其衍生物。
雖然含半胱胺組合物中包合物主分子的可用含量為1-80重量％，但是也可使用優選可用範圍1-60重量％和更優選可用範圍10-40重量％的包合物主分子。在製備含半胱胺組合物時，所述包合物主分子的實際用量將取決於半胱胺的實際用量。
所述含半胱胺組合物還可以包含1-90重量％的填料，但是也可以在該組合物中使用優選可用範圍1-60重量、更優選可用範圍1-40重量％的填料。實際含量將取決於半胱胺和包合物主分子的實際用量。所述填料可選自粉末狀的纖維素、澱粉和硫酸鈣(如CaSO4·2H2O)。應該注意的是，如果在含半胱胺組合物中填料含量超過90重量％，則主要活性成分的含量會因此減少，並且所述含半胱胺組合物在提高施用該組合物的動物的免疫力方面的效果下降。
含半胱胺組合物還可以包含5-50重量％的崩解劑和粘結劑，但是也可使用10-40重量％的優選可用範圍和15-35重量％的更優選可用範圍。實際含量將取決於半胱胺、包合物主分子和其它成分的實際用量。粘結劑和崩解劑可選自羥丙基澱粉、微生物藻酸鹽、微晶纖維素和澱粉。已確認如果該組合物中崩解劑和粘結劑的含量低於5重量％，則所製得的該組合物顆粒將失去所需硬度。
此外，該組合物的製造將變得非常困難。然而，如果崩解劑和粘結劑的含量大於50重量％，則所得組合物將具有過大的硬度，在粘結劑的含量佔據崩解劑和粘結劑混合物的大部分時尤其如此。這將導致該組合物難以被動物的腸所吸收。
該含半胱胺組合物還可以包含0.05-0.3重量％的可為香精的調味劑和氣味劑。
該含半胱胺組合物還可以包含1-20重量％的包衣材料，但優選可用範圍是1-15重量％，更優選可用範圍是2-10重量％。實際含量將取決於半胱胺、包合物主分子和其它成分的實際用量。該包衣材料優選為腸溶性的，可溶解於鹼性環境如腸內環境。該包衣材料可由選自鄰苯二甲酸醋酸纖維素、鄰苯二甲酸醋酸澱粉、鄰苯二甲酸甲基纖維素、鄰苯二甲酸的葡萄糖或果糖衍生物、丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、聚甲基乙烯基醚、馬來酸酐共聚物的部分酯化物、蟲膠和甲明膠的物質製得。已經確認如果包衣材料含量低於1重量％，則組合物顆粒不能完全被作為保護層的包衣材料所包覆。因而該含半胱胺組合物可在經腸管吸收至動物血流中之前降解。另一方面，如果包衣材料含量超過15重量％，則組合物中的活性成分可能不能從該組合物中有效釋放。因而，將不能實現預期的免疫調節。
用於本發明的含半胱胺組合物為小顆粒形式，每一個小顆粒均具有基本上為0.28-0.90mm的優選直徑。這些顆粒使用微膠囊法製備。該方法包括使用具有包合性質的大分子物質。該大分子物質可以是上述包合物主分子(其可主要包含環糊精)。該大分子物質作為分子膠囊以吞沒半胱胺分子，由此保護組合物中的半胱胺並使其與周圍的光、熱、空氣和水分隔離。從而保持半胱胺的穩定性。用於微膠囊法的包合物主分子優選包含具有6-12個葡萄糖分子的環狀多糖化合物，通過在桿菌存在下使環糊精糖苷轉移酶和澱粉反應而生成。
各種急性、亞急性和慢性毒性測試研究已經表明該大分子物質是無毒的。在微膠囊工藝之後，每個顆粒可包覆有至少一層並優選多層上述包衣材料。以下提供用於本發明的含半胱胺組合物的製備方法的更詳細描述。
在連接聚四氟乙烯且配備聚四氟乙烯包覆攪拌器的夾套反應器中，在主要是氮氣的氣氛中加入4080g的75重量％的半胱胺鹽酸鹽乙醇溶液。所用半胱胺的純度、熔點和灼燒殘餘物分別優選為98％或以上、66-70℃和0.05％或以下。隨後同樣在氮氣保護下將1200g β-環糊精加入反應器中。(該β-環糊精的質量符合食品添加劑的要求。具體而言，幹基純度大於98％；乾燥失重小於10.0％；灼燒殘餘物少於0.2％；重金屬含量低於10ppm；砷含量低於2ppm。)隨後將該混合物於40℃加熱3小時。隨後停止加熱並繼續攪拌2小時，之後在將由此所得產物在40-50℃溫度下真空乾燥之後，將其研磨並通過篩網(例如40目)過濾器篩分。可接觸組合物成分的所述設備的所有部件應優選由不鏽鋼製造。
在一箱式混合器中，在乾燥環境的保護下加入經過上述包合工藝的4200g(以幹基計)半胱胺、2600g填料、1200g崩解劑和1700g粘結劑。隨後將這些成分充分混合，並且可加入適量的無水乙醇並隨後與之混合。所得混合物表現為具有中等硬度的軟質材料，從而其可通過手掌輕握成型為球狀。隨後使該球形所得混合物通過輕微碰觸而破碎。在氮氣保護下將該混合物經造粒機造粒之後，立刻將由此所得小顆粒引入流化床乾燥器，並且隨後在40-50℃溫度下於基本上為真空的環境中乾燥。
之後通過配方如下的方法製備腸溶性包衣材料鄰苯二甲酸醋酸纖維素8.0g、聚對苯二甲酸乙二醇酯2.4ml、乙酸乙酯33.0ml和乙酸異丙酯33.6ml。上述所得生成物顆粒在氮氣保護下均勻包覆至少一層但優選多層上述腸溶性包衣材料。該腸溶性包衣材料僅溶於鹼性環境中。這可以防止半胱胺在仍處於動物胃中時，過早地從組合物中逸出或以其它方式降解。半胱胺可不利地刺激動物胃的胃黏膜。然而，值得注意的是，半胱胺具有較小的副作用。
隨後在真空乾燥器中於40-50℃溫度下徹底乾燥含半胱胺組合物的所得顆粒。之後，除去所有溶劑。其後，將所得顆粒冷卻至室溫，並且利用懸臂雙螺旋混合器使微膠囊與適量的調味劑和氣味劑混合。該含半胱胺組合物是內部具有半胱胺鹽酸鹽和環糊精、外部包覆有腸溶性包衣材料的微膠囊。
所製得的組合物將表現為具有平滑表面、良好流動性和易於與各種動物飼料混合的小顆粒(或微粒)形狀。該組合物的每個顆粒均具有優選0.28-0.90mm的直徑。該組合物也具有優異的穩定性。已經發現，該組合物在用密封塑膠袋包裝並在涼爽、黑暗和乾燥場所儲存一年之後，其性質保持不變。因此，其符合飼料添加劑的要求。
具有上述具體構造的組合物具有優於半胱胺本身的許多功能優點。第一，該組合物生產出來之後，包含在組合物中的半胱胺的活性保持不變。這在將組合物用作飼料添加劑並在使用前儲存較長時間的情況下是重要的。第二，該組合物不會對服用其的動物產生任何可覺察的胃部副反應。第三，不僅在儲存期間而且更重要的是直至到達動物腸道時，該組合物的活性都保持不變。第四，該組合物可以容易地大規模地低成本地施用於飼養動物，這是因為該組合物可以方便地與任意基礎飼料混合。完全不需要分離程序或注射。
已經進行了各種實驗以證明施用具有半胱胺或含半胱胺組合物的飼料提高動物的免疫力，其中的兩個實驗詳述如下。
實驗實驗1背景信息本實驗使用100頭荷爾斯坦因種奶牛(Holstein cow)。所述奶牛的平均重量為約600kg。所述奶牛以上述含半胱胺組合物預處理2天。實際實驗持續13周。
材料製成微型藥丸形式的含半胱胺組合物包含約30重量％的半胱胺以及包括用作穩定劑的環糊精的其它成分。該組合物中環糊精含量為10重量％。該組合物由Walcom Bio-Chemicals Industry Limited製備。
程序所述奶牛分為測試組和對照組。測試組通過它們的玉米粉膳食施用預定量的含半胱胺組合物，對照組不施用含半胱胺組合物。所述奶牛每天三次於07:30、14:30和21:30餵食。
十五周治療期結束時通過尾部靜脈穿刺收集所述奶牛的血液樣本。將2ml各血液樣本以1500rpm離心15分鐘。收集上層清液並儲存於-20℃用於IL-2分析。利用IL-2RIA試劑盒(由中國軍隊醫院放免技術研究所生產)測定IL-2濃度。還對所述奶牛血液樣本測定淋巴細胞數量。同樣測定IL-6濃度。
將測試組和對照組奶牛的數據進行分析並表示為平均±標準誤差。所述兩組奶牛的結果通過T-檢驗進行比較。
結果和討論施用30g/天的含半胱胺組合物的測試組奶牛的IL-2血清濃度比對照組奶牛高約29％。以下表1總結了所述兩組奶牛的IL-2、IL-6和白細胞(leukocyte)的水平。
表1

IL-2濃度增加29％具有顯著的統計學意義(P＜0.01)。應該注意的是，同樣測定了外周血白細胞的數量，但發現在測試組和對照組奶牛之間並無明顯差異。這表明所檢測到的IL-2高濃度是由含半胱胺組合物而非其它因素所導致的。
該結果還顯示測試組奶牛具有高出22.8％的血漿IL-6濃度。
實驗結果表明半胱胺通過增加IL-2和IL-6水平來調節和強化動物的免疫系統。
實驗2背景信息本實驗使用64頭荷爾斯坦因種奶牛(Holstein cow)。所述奶牛被隨機分成測試組和對照組，每組32頭奶牛。
材料本實驗使用實驗1中所用的相同的含半胱胺組合物。
程序從產犢後約20周開始，測試組的每頭奶牛初次施用用量為20g/天的含半胱胺組合物。隨後該含半胱胺組合物的劑量逐步增加直至60g/天，接著在接近實驗末期時降低至30g/天。用含半胱胺組合物的處理持續140天。所述奶牛通過日常飲食施用含半胱胺組合物。所述飲食包含玉米粉。對照組奶牛不施用任何含半胱胺組合物。所述奶牛每天餵食三次。
140天實驗周期結束時，通過尾部靜脈得到所述兩組奶牛的血液樣本。為了抗凝，將所述血液樣本與肝素混合。將所述血液樣本在培養基(RMPI 1640)中培養並從中分離出白細胞。
從測試組奶牛樣本中分離出的白細胞分成兩批。一批加入植物血凝素(PHA)，另一批不加入任何PHA。隨後，在這兩批血液樣本中加入3H-TdR並孵育72小時。
之後通過閃爍計數儀測量所述樣本中的3H-TdR摻入水平。3H-TdR摻入水平以cpm表示。
隨後，基於以下公式計算刺激指數(SI) 同樣處理來自對照組奶牛的血液樣本並計算其SI。
結果與討論以下表2總結了所述兩組奶牛的平均SI值。
表2 *p＜0.05如表2所示，測試組奶牛的SI指數為29.73±3.53，這比對照組奶牛高36％。更高的SI指數意味著在測試組奶牛血液中存在更高數量的淋巴細胞，這表明免疫力普遍提高。
由上述兩個實驗，表明半胱胺或含半胱胺組合物具有提高動物免疫力的效果。具體而言，半胱胺或含半胱胺組合物具有增加白介素-2的水平以及刺激T細胞生成的效果。
進一步的研究表明半胱胺對於提高脊椎動物的免疫力尤其有效。
可以想像，隨著免疫力提高，飼養動物的飼養場將更為多產。例如，飼養肉牛的飼養場將會由於其提高的免疫力導致動物的低死亡率而具有更高的產量。還可想像，根據本發明的半胱胺或含半胱胺組合物也可以用於人類以提高患者的免疫力。例如，半胱胺可與治療HIV感染患者的傳統AIDS藥物組合使用。
上述各參考文獻的內容，包括本文所引用的和以下所列的參考文獻的內容，在此完整併入本文。應該注意的是，多種變化、改進和其它實施方案都是可能的，因此，所有這些變化、改進和實施方案都認為處於本發明的範圍之內。
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1.一種半胱胺、半胱胺鹽或含半胱胺或其鹽的組合物在提高動物免疫力方面的用途。
2.根據權利要求1的用途，其中所述提高免疫力包括增加所述動物體內白介素-2(IL-2)的水平。
3.根據權利要求1或2的用途，其中所述提高免疫力包括增加所述動物體內白介素-6(IL-6)的水平。
4.根據權利要求1、2或3的用途，其中所述提高免疫力包括刺激所述動物體內淋巴細胞的產生。
5.根據任一項前述權利要求的用途，其中所述動物是脊椎動物。
6.根據任一項前述權利要求的用途，其中所述組合物包含1-95重量％的半胱胺或其鹽、和包含選自環糊精及其衍生物的穩定劑的包合物主分子組合物。
7.根據權利要求6的用途，其中所述含半胱胺組合物包含1-60重量％的所述包合物主分子組合物。
8.根據任一項前述權利要求的用途，其中所述含半胱胺組合物包含填料、崩解劑、粘結劑和調味劑與氣味劑中的至少一種。
9.根據任一項前述權利要求的用途，其中所述含半胱胺組合物包含包衣材料。
10.根據權利要求9的用途，其中所述含半胱胺組合物包含1-20重量％的所述包衣材料。
11.根據權利要求9或10的用途，其中所述包衣材料是腸溶性的。
12.根據權利要求9-11任一項的用途，其中所述包衣材料選自鄰苯二甲酸醋酸纖維素、鄰苯二甲酸醋酸澱粉、鄰苯二甲酸甲基纖維素、鄰苯二甲酸的葡萄糖或果糖衍生物、丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、聚甲基乙烯基醚、馬來酸酐共聚物的部分酯化物和甲明膠。
13.根據權利要求8的用途，其中所述含半胱胺組合物包含1-90重量％的所述填料。
14.根據權利要求8或13的用途，其中所述填料選自粉末狀的纖維素、澱粉和硫酸鈣。
15.根據權利要求8、13或14的用途，其中所述含半胱胺組合物包含5-50重量％的所述粘結劑和所述崩解劑。
16.根據權利要求8和13-15的任一項的用途，其中所述粘結劑和所述崩解劑選自羥丙基澱粉、微生物藻酸鹽、微晶纖維素和澱粉。
17.根據權利要求8和13-16的任一項的用途，其中所述含半胱胺組合物包含0.05-0.3重量％的調味劑和氣味劑，用於增強所述組合物味道。
18.根據權利要求9-12的任一項的用途，其中所述含半胱胺組合物成型為顆粒，每個所述顆粒包含至少一層所述包衣材料。
19.根據權利要求6或7的用途，其中所述含半胱胺組合物成型為顆粒，其中的半胱胺或其鹽受到所述包合物主分子組合物的保護而免受其周圍環境的影響。
20.根據權利要求18或19的用途，其中所述含半胱胺組合物的每個所述顆粒具有0.28-0.90mm尺寸的直徑。
21.根據權利要求11的用途，其中所述含半胱胺組合物被所述腸溶性包衣材料包封。
22.根據任一項前述權利要求的用途，用於製造動物飼料添加劑。
23.根據任一項前述權利要求的用途，用於製造動物飼料。
24.一種用於提高動物免疫力的組合物，包含半胱胺或其鹽。
25.根據權利要求24的組合物，其中所述所述提高免疫力包括提高所述動物體內白介素-2(IL-2)的水平。
26.根據權利要求24或25的組合物，其中所述提高免疫力包括提高所述動物體內白介素-6(IL-6)的水平。
27.根據權利要求24、25或26的組合物，其中所述提高免疫力包括刺激所述動物體內淋巴細胞的產生。
28.根據權利要求24-27的任一項的組合物，其中所述動物是脊椎動物。
29.根據權利要求24-28的任一項的組合物，包含1-95重量％的半胱胺或其鹽、和包含選自環糊精及其衍生物的穩定劑的包合物主分子組合物。
30.根據權利要求29的組合物，其中所述含半胱胺組合物包含1-60重量％的所述包合物主分子組合物。
31.根據權利要求24-30的任一項的組合物，其中所述含半胱胺組合物包含填料、崩解劑、粘結劑和調味劑與氣味劑中的至少一種。
32.根據權利要求24-31的任一項的組合物，其中所述含半胱胺組合物包含包衣材料。
33.根據權利要求32的組合物，其中所述含半胱胺組合物包含1-20重量％的所述包衣材料。
34.根據權利要求32或33的組合物，其中所述包衣材料是腸溶性的。
35.根據權利要求32-34的任一項的組合物，其中所述包衣材料選自鄰苯二甲酸醋酸纖維素、鄰苯二甲酸醋酸澱粉、鄰苯二甲酸甲基纖維素、鄰苯二甲酸的葡萄糖或果糖衍生物、丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、聚甲基乙烯基醚、馬來酸酐共聚物的部分酯化物和甲明膠。
36.根據權利要求31的組合物，其中所述含半胱胺組合物包含1-90重量％的所述填料。
37.根據權利要求31或36的組合物，其中所述填料選自粉末狀的纖維素、澱粉和硫酸鈣。
38.根據權利要求31的組合物，其中所述含半胱胺組合物包含5-50重量％的所述粘結劑和所述崩解劑。
39.根據權利要求31或38的組合物，其中所述粘結劑和所述崩解劑選自羥丙基澱粉、微生物藻酸鹽、微晶纖維素和澱粉。
40.根據權利要求31的組合物，其中所述含半胱胺組合物包含0.05-0.3重量％的所述調味劑和氣味劑，用於增強所述組合物味道。
41.根據權利要求32-40的任一項的組合物，其中所述含半胱胺組合物成型為顆粒，每個所述顆粒包含至少一層所述包衣材料。
42.根據權利要求29或30的組合物，其中所述含半胱胺組合物成型為顆粒，其中的半胱胺或其鹽受到所述包合物主分子組合物的保護而免受其周圍環境的影響。
43.根據權利要求41或42的組合物，其中所述含半胱胺組合物的每個所述顆粒具有0.28-0.90mm尺寸的直徑。
44.根據權利要求34的組合物，其中所述含半胱胺組合物被所述腸溶性包衣材料包封。
45.一種用於提高動物免疫力的動物飼料添加劑，包含半胱胺、半胱胺鹽或權利要求24-44的任一項中所限定的含半胱胺組合物。
46.一種用於提高動物免疫力的動物飼料，包含半胱胺、半胱胺鹽或權利要求24-44的任一項中所限定的含半胱胺組合物。
47.一種用於提高動物免疫力的方法，包括在動物體內施用半胱胺、半胱胺鹽或權利要求24-44的任一項中所限定的組合物。
48.半胱胺、半胱胺鹽或含半胱胺或其鹽的組合物的用途，基本上如上文所述。
49.一種用於提高動物免疫力的組合物，基本上如上文所述。
50.一種用於提高動物免疫力的動物飼料添加劑，基本上如上文所述。
51.一種用於提高動物免疫力的動物飼料，基本上如上文所述。
52.一種用於提高動物免疫力的方法，基本上如上文所述。
全文摘要
提供半胱胺、半胱胺鹽、或含有半胱胺或其鹽的組合物在提高動物免疫力方面的一種新用途。
文檔編號A61P37/04GK1750816SQ200480004630
公開日2006年3月22日 申請日期2004年2月17日 優先權日2003年2月19日
發明者池豪, 聞芹堂 申請人:歐米加生物製藥(I.P.2)有限公司