一種啤酒嚴格厭氧菌檢測專用培養基的製作方法
2023-11-12 04:51:22
專利名稱：一種啤酒嚴格厭氧菌檢測專用培養基的製作方法
技術領域：
本發明涉及到一種啤酒嚴格厭氧菌檢測專用培養基，屬於微生物發酵領域。
背景技術：
嚴格厭氧菌在國外較多報導，國內啤酒業較少報導有檢出。一是國內很少有專門針對嚴格厭氧菌的檢測內容，二是嚴格厭氧菌對氧的要求比較苛刻，而國內早期啤酒釀造對氧的質控水平較低。目前隨著中國啤酒釀造質控水平的提高，啤酒中溶氧量的越來越低， 以前只在國外培養到的絕對厭氧菌如果膠桿菌(Pectinatus sp.)和巨球菌(Megasphaera cerevisiae)的汙染風險不斷增加。嚴格厭氧菌的生長會產生過多的乙酸、丁酸、乳酸等多種脂肪酸以及H2S和甲醇硫等一些嚴重影響風味的物質，使被汙染啤酒產生令人討厭的臭雞蛋氣味的生長會產生過多的乙酸、丁酸、乳酸等多種脂肪酸以及H2S和甲醇硫等一些嚴重影響風味的物質，使被汙染啤酒產生令人討厭的臭雞蛋氣味。因此，對嚴格厭氧菌的檢測技術和選擇培養基進行預研，建立起實用的檢測技術，能夠增強對產品的質量控制和檢測水平，應對可能出現的嚴格厭氧菌汙染風險。由於嚴格厭氧菌的獨特的特性，現在很少有報導關於該種類有害菌的培養分離報導，本發明開發了一種利用嚴格厭氧菌產生獨特的代謝產物的特性，與培養基中的組分產生顯色反應的篩選培養基。
發明內容
該發明培養基配方和製作方法如下酵母浸提物0. 3-0. 6 %，蛋白腖0. 2-0. 4 %，乳酸鈉1_3 %，抗壞血酸 0. 1-0. 3% ；硫代硫酸鈉(Na2S204 · 5H20) :0. 01-0. 03%，醋酸鉛0. 01-0. 03%，亞甲藍(美蘭):0. 0002-0. 0005%，苯乙醇(PEA) 0. 1-0. 3%，瓊脂粉(ager) 1. 5%0各成分精確稱量後裝入一定體積(根據實驗需要)的錐形瓶內加蒸餾水，各成分混勻後，在電爐上加熱煮沸3-5分鐘(培養基由藍色變成無色)，各成分完全溶解為止。溫度降到50°C左右倒平板使用。該平板一定要在嚴格厭氧的厭氧盒或者厭氧罐或者厭氧管中使用。
圖1是有氧時培養基。圖2是無氧時培養基。圖3是pc和乳酸菌混合接種。圖 4是pf和乳酸菌混合接種。
具體實施例方式實施例1培養基的配製方法稱取酵母浸提物0. 5g，蛋白腖0. 3g，乳酸鈉1. 7g，抗壞血酸0. Ig ；硫代硫酸鈉 (Na2S204 ·5Η20) :0. Olg，醋酸鉛0. 02g，亞甲藍(美蘭):0. 0002g，苯乙醇(PEA) :0. 2g，瓊脂粉(ager) 1. 5g。各成分精確稱量後裝入一定體積(根據實驗需要)的錐形瓶內加蒸餾水100ml， 各成分混勻後，在電爐上加熱煮沸3-5分鐘(培養基由藍色變成無色)，各成分完全溶解為止。溫度降到50°C左右倒平板使用。該平板一定要在嚴格厭氧的厭氧盒或者厭氧罐或者厭氧管中使用。實施例2培養基的使用方法接種菌種為果膠桿菌的兩個菌株Pectinatus cerevisiiphilus和 Pectinatusfrisingensis以及乳酸菌，接種梯度為10_3梯度，在厭氧培養兩個星期。 醋酸鉛和被果膠桿菌釋放的硫化氫反應生成硫化鉛形成了黑色菌落。由於乳酸菌不產生硫化氫，它們的菌落仍然是乳白色的。因此可以很明顯的區分鑑定出嚴格厭氧菌。具體的菌落顏色和效果可以見說明書附圖部分。
權利要求
1.一種啤酒嚴格厭氧菌檢測鑑定專用培養基，其配方如下酵母浸提物0. 3-0. 6 %，蛋白腖0. 2-0. 4 %，乳酸鈉:1-3%,抗壞血酸0. 1-0. 3 % ； 硫代硫酸鈉(Na2S204 · 5H20) :0. 01-0. 03 %，醋酸鉛.0· 01-0. 03 %，亞甲藍(美蘭) 0. 0002-0. 0005%，苯乙醇(PEA) 0. 1-0. 3%，瓊脂粉(ager) 1. 5%0
2.如權利要求1所述的啤酒嚴格厭氧菌檢測鑑定專用培養基，其製作使用方法如下 將以上各成分精確稱量後裝入一定體積(根據實驗需要)的錐形瓶內加蒸餾水，各成分混勻後，在電爐上加熱煮沸3-5分鐘(培養基由藍色變成無色)，各成分完全溶解為止，溫度降到50°C左右倒平板使用。該平板一定要在嚴格厭氧的厭氧盒或者厭氧罐或者厭氧管中使用。
3.如權利要求1所述的啤酒嚴格厭氧菌檢測鑑定專用培養基，其各組分優選為稱取酵母浸提物0. 5g，蛋白腖0. 3g，乳酸鈉1. 7g，抗壞血酸0. Ig ；硫代硫酸鈉 (Na2S204 *5H20) :0. Olg，醋酸鉛0. 02g，亞甲藍(美蘭):0. 0002g，苯乙醇(PEA) :0.2g，瓊脂粉(ager) 1. 5g，溶解於IOOml水中。
4.如權利要求1所述的啤酒嚴格厭氧菌檢測鑑定專用培養基用於分離啤酒中嚴格厭氧菌的用途。
全文摘要
本發明提供一種啤酒嚴格厭氧菌檢測鑑定專用培養基，利用嚴格厭氧菌產生獨特的代謝產物的特性，與培養基中的組分產生顯色反應的篩選培養基，醋酸鉛和被果膠桿菌釋放的硫化氫反應生成硫化鉛生成黑色菌落。其他汙染菌不產生硫化氫，它們的菌落仍然是乳白色的。因此可以很明顯的區分鑑定出嚴格厭氧菌，該發明對嚴格厭氧菌的檢測鑑定更簡單明了，能夠增強對產品的質量控制和檢測水平，應對可能出現的嚴格厭氧菌汙染風險，效果顯著。
文檔編號C12R1/01GK102533929SQ201110383270
公開日2012年7月4日 申請日期2011年11月28日 優先權日2011年11月28日
發明者宋緒磊, 林智平, 王德良, 袁雪萍, 賈鳳超, 郭立芸 申請人:中國食品發酵工業研究院, 北京燕京啤酒股份有限公司