無乳鏈球菌抗原Ⅰ和Ⅱ的製作方法

2023-04-24 20:39:51 1

專利名稱：無乳鏈球菌抗原Ⅰ和Ⅱ的製作方法
無乳鏈球菌抗原丨和I I本申請是2004年05月06日提交的2004800012219. 8號發明專利申請「無乳鏈球 菌抗原I和II」的分案申請。本發明涉及編碼無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)抗原的分離的核酸分 子，所述分子適合用於預防和治療無乳鏈球菌引起的細菌感染的藥物藥劑的製備無乳鏈球菌是革蘭氏陽性細菌，基於其血瓊脂上的溶血模式屬於B組鏈球菌 (GBS)。所述生物體是有莢膜的，莢膜是致病重要的元素。莢膜是抗原性的，並形成通過血 清型分類GBS的基礎。已經鑑定出九個截然不同的GBS血清型la、lb、II、III、IV、V、VI、 VII和VIII。顯示多數無乳鏈球菌血清型引起嚴重的疾病，估計兩個最普遍的血清型-in 和V型-負責世界上大多數的侵入性疾病。分級和血清型的流行因年齡組和地理範圍而不 同。在美國，GBS III型造成多於50%的嬰兒疾病，V型造成大約40%的非孕成人疾病，la 型造成大約三分之一任何患者群的疾病。無乳鏈球菌在極端年齡和有潛在疾病的那些人是很重要的人類疾病的原因。B組 鏈球菌是新生兒全身和局部感染的主要原因。自從二十世紀七十年代，GBS是美國新生兒 的主要病原體。細菌感染能導致威脅生命的疾病，例如敗血症、肺炎和腦膜炎。存活者變成 有聽力、學習和視力殘疾的終身殘廢。新生兒通常在分娩期或他們有GBS群集(colonized) 的母親生產時獲得所述生物體。另外，GBS也是懷孕婦女以及慢性疾病和年長患者感染的常 見原因，例如遭受糖尿病、惡性腫瘤、免疫缺陷性疾病等等的那些人(Baiter，S等的綜述， 革蘭氏陽性病原體，Fischetti V. A.等編輯，ASM Press 2000，154-160 頁)。10-35%懷孕婦女有GBS群集，但是無症狀。然而，因為垂直轉播的危險，GBS群集 很重要。50-70%有群集的婦女所生的新生兒-就是5-15%所有的新生兒-在分娩過程中 變成有GBS群集。群集是感染和疾病的先決條件。多數早產兒由於很低的母親抗體轉遞和 不成熟的免疫系統，對於侵入性疾病有最高的危險。懷孕時GBS的攜帶可以是慢性的、間 歇的或暫時的。很難評價攜帶的持續時間，因為婦女在從後三個月至出生前的檢查之中已 經被篩選過一次了。一些研究提示妊娠末三個月中和分娩時的群集狀態之間有相關性( 90%)。分離物的血清型指出相同類型的持續最普遍(Balter，S.等的綜述，革蘭氏陽性病 原體，Fischetti V. A.等編輯，ASM Press 2000，154-160 頁)。沒有預防性的幹預，1至2%所有的新生兒和15%有嚴重群集的婦女所分娩的新 生兒形成了侵入性疾病(敗血症、肺炎和/或腦膜炎)。在美國，GBS感染影響1-5個新生 兒/1000個安全出生兒。美國每年發生大約17，000個病例的GBS疾病，7，500個發生於預 防前的新生兒。GBS是細菌腦膜炎最普遍的原因，造成 40%這個年齡組報告的所有病例。 在美國侵入性GBS疾病的總發病率是0.2-0. 7/100，000。在歐洲稍微低些。侵入性疾病沒 有預防幹預的死亡率是6%，每16個感染的新生兒死亡，20%的倖存者終生殘疾。嚴重B組鏈球菌感染的比率在新生兒中要比任何其它年齡組中要高很多。然而， 嚴重的B組鏈球菌感染發生在男性和女性的其他年齡組。非孕成人中，嚴重疾病的比例在 每100，000個人4.1至7. 2個病例的範圍。侵入性感染(細菌進入通常不暴露於細菌的體 內部分的感染)平均死亡率對於年齡在18-64歲的成人是8-10%，在65歲及以上的成人
18是15-25%。死亡率在更年輕的成人和沒有其它疾病狀態的成人要低些。嚴重B組鏈球菌 疾病的比率隨著年齡而增加。非孕成人中病例的平均年齡是大約60歲。多數成人B組鏈 球菌疾病發生在有嚴重疾病狀態的成人中。這些包括糖尿病；肝臟疾病；中風史；癌症史； 或褥瘡。在年長者，嚴重B組鏈球菌疾病的比率在護理院居住者中和臥床住院病人更為普 遍。非孕成人中通常在新近外傷後或在接受例如手術的某些侵入性醫院操作後得B組鏈球 菌疾病({Farley, M. , 2001} ； {Jackson, L.等人，1995} ；www. cdc. gov/groupbstrep/)。預防前新生兒疾病的直接醫療花費是每年兩億九千四百萬美金，GBS仍然是相當 大的經濟負擔。無乳鏈球菌感染的確診一般依賴於生物體從子宮頸棉棒取樣、血或其它通常無菌 的身體位點的分離。也可利用檢測體液中莢膜多糖抗原的測試。青黴素G是已經確定的GBS病例的治療選擇。對於菌血症、肺炎和軟組織感染推 薦十天的治療，而對於腦膜炎推薦2-3周，對於骨髓炎3-4周。自從1994年在北美已經建立了預防，方法是通過在懷孕35-37周陰道和肛門直腸 棉棒採樣篩選攜帶GBS懷孕婦女或者通過在分娩入院時無培養物鑑別危險因子。為預防候 選者的婦女在分娩過程中給予產時抗生素治療以防止早期發作的新生兒疾病。在美國這個 預防的方法在1993至1999年之間使得GBS疾病的發生率從1. 7降低到0. 4/1000個安全 出生兒。儘管能通過產時預防(青黴素G或氨苄西林)預防多數新生兒GBS疾病，但是目 前可利用的策略不理想，尤其是對於早產嬰兒晚期發作(> 7天的年齡)的感染和疾病的 預防。總是有些個體由於一些原因逃脫攜帶的篩選，例如在32-35周測試陰性但是在分娩 時變陽性的間歇性攜帶者、未參加、疏忽或者篩選日期(32-35周)前分娩。最後，抗生素的廣泛使用通常誘導在一段時間後出現的抗株。已經顯示青黴素和 其它的抗生素的大量使用(每3-5個婦女接受高劑量治療)穩定增加了抗生素抗性臨床分 離物的百分比(ref)。另外，基於預防的抗生物的效率對於後期發作疾病不是那麼有效，因 為它是針對早期發作的(分娩後48小時內)。另一個關注是並未解決易感成人群的預防。缺乏對對抗GBS攜帶和疾病的保護性免疫元素足夠的了解阻礙了疫苗的發展。沒 有很好地理解攜帶與天然免疫的關係。另外，沒有很好地定義允許疾病在攜帶者發生的免 疫機制。然而，有提示病原體特異性抗體的母體血清水平與新生兒GBS疾病相關。已經很 堅定地確定分娩時母體抗莢膜多糖抗體水平和侵入性新生兒疾病負性相關。{Campbell， J.等人，2000}儘管對於GBS所有的株B組糖抗原很普遍，不幸地，它沒有很強的免疫原性並且 抗體也不保護實驗模型中致死攻擊(challenge)。由多糖製成的GBS莢膜本身是有免疫原 性的並且能夠誘導保護抗體。然而，這個保護是類型特異性的。儘管莢膜特異性抗體已經 顯示很高的保護性，什麼濃度的這些血清型特異性抗體可對抗疾病而有保護作用仍然不清 楚，就在最近，已經清楚調理活性和這些抗體的親合力是比濃度更關鍵的保護決定因素。已經理解了表面蛋白質對人類針對無乳鏈球菌的免疫中的重要性。很明顯所有 血清型表達帶有與宿主免疫防禦相關活性的表面蛋白質。a C蛋白質、0 C蛋白質、Rib和 Sip蛋白質在生化和基因上有很好地特徵描述，也在動物模型中顯示了免疫性和保護性 ({Michel, J.等人，1991} ； {Brodeur, B.等人，2000} ； {Larsson, C.等人，1999} ； {Cheng, Q.等人，2002})。這些蛋白質作為疫苗候選的主要問題似乎是它們在GBS的不同臨床分離物中的流行變異性。例如Rib蛋白質存在於III血清型GBS中，但是佔全世界疾病的重大部分的V型沒有。一些其它的表面蛋白質特徵在於是免疫原性的，但是對於鑑別多數GBS 免疫原性蛋白質只作了有限的系統工作。因而，預防或減輕GBS感染的有效治療仍然是需要的。疫苗不僅能預防GBS的感 染，也更加特異性地預防或減輕宿主組織(尤其是在產道)的群集，因而降低從母體到胚胎 傳播的發生。降低急性感染的發生和生物體的攜帶將導致新生兒中侵入性疾病-肺炎、菌 血症、腦膜炎和敗血症的預防。能夠顯示對造成人類感染的大多數無乳鏈球菌株交叉保護 作用的疫苗對於預防或減輕所有其它鏈球菌種類，也就是A、C和G組造成的感染也是有用 的。疫苗能含有全部的各種不同的抗原。抗原的實例是完全殺死的或減毒的生物體、 這些生物體/組織的細組分、蛋白質或者它們最簡單的形式肽。抗原也能以糖基化蛋白質 或肽的形式被免疫系統識別，也可以是或含有多糖或脂質。能使用短肽，因為例如細胞毒性 T細胞(CTL)識別連接於主要組織相容性抗原(MHC)的通常8-11個胺基酸長的短肽形式 的抗原。B細胞能識別短到4-5個胺基酸的線性表位以及三維結構(構象表位)。為了獲 得持續的抗原特異性免疫反應，佐劑需要激發包括免疫系統所有細胞的免疫級聯。起初，佐 劑起作用，但是不限於它們對所謂抗原遞呈細胞(APC)的作用的模式。這些細胞通常最先 遇到抗原，之後是加工的或未修飾的抗原呈遞給免疫效應細胞。也可以涉及中間細胞類型。 只有有適當特異性的效應細胞在生產免疫反應中被激活。佐劑也可以局部保留抗原和共注 射的其他因子。另外，佐劑可以起其它免疫細胞的化學趨化劑的作用，或者可以在局部和/ 或全身起免疫系統刺激劑的作用。自從二十世紀七十年代末，疫苗開發著重於莢膜多糖，但是仍然沒有安全有效的 產品。然而，對於開發和給予嬰兒和高危險成人，抗無乳鏈球菌的疫苗被列為最重要的之 一。目前抗所述感染的疫苗僅僅在開發的研究階段。成果著重於使用與或者不與蛋白質連 接的莢膜多糖(CPS)作為免疫原{Paoletti，L.等人，2002}。然而，有些爭論反對基於多糖 的疫苗的使用。多糖誘導IgG2抗體，IgG2抗體以比IgGl或IgG3抗體更低的效率穿過胚 胎。對於多數易感新生兒，流產兒，這尤其是個問題，因為在32-34周之前胎盤抗體轉移很 低。估計 10%的分娩發生在第34個孕周之前。蛋白質偶聯疫苗無疑是抗GBS疾病戰鬥增加的一個偉大的新武器，但是疫苗僅含 有有限數量的GBS血清型，給與足夠的生態學壓力，非免疫血清型替換的疾病仍然是真正 的威脅，尤其在有非常高的疾病負擔的區域。此外用於活性免疫的多糖抗原在人類中不提 供免疫記憶。CPS與非GBS相關免疫原性蛋白質載體結合(例如，破傷風類毒素、霍亂毒素 B亞單位等等)已經顯示在誘導疫苗接種者更高的抗體濃度是有利的，但是它不提供在真 正的感染過程中招募記憶B和T細胞以支持最有效宿主反應的病原體特異性B細胞和T細 胞表位。為了能夠用符合這些標準的蛋白質補充CPS疫苗，鑑別保守免疫原性GBS特異性 表面蛋白質是必須的。所有這些不足提示需要開發新一代疫苗，所述疫苗由蛋白質或其衍生物組成，其 在體內條件下由所有株表達，在人類有誘導調理和/或中和抗體的能力。基於被動抗體的治療有很大的潛力。為了預防已經嘗試使用人類靜脈內免疫球 蛋白(IVIG)的製備物。單克隆抗體生產技術的最新進展提供了產生人類抗體試劑和再引入抗體治療的方法，而避免與血清治療相關的毒性。免疫球蛋白是極端多樣類型的抗微生物蛋白質，能用於預防和治療出現的感染疾病。抗體治療抵抗各種不同的微生物是有效的 ({Burnie,J.等人，1998}的綜述)。抗GBS單克隆抗體能治療性地給予每一個顯現侵入性 疾病的新生兒或者預防性地給予低出生體重的和早產的新生兒。在過去十年，在一些動物模型中描述了一些GBS蛋白質的免疫原性和保護能力， 為了基於種屬共有蛋白質的疫苗的開發現在正在對這些進行探究。這樣的蛋白質是GBS表 面蛋白質 Sip{Brodeur，B.等人，2000}、rib，α 蛋白質和{Michel, J.等人，1991}。展示在顯著造成疾病發生的革蘭氏陽性生物體表面上的某些蛋白質或酶參與了 這些病原體引起的疾病過程。通常，這些蛋白質參與了與宿主組織直接的相互作用或隱 藏細菌表面以逃脫宿主防禦機制{Navarre，W.等人，1999}。無乳鏈球菌在這點上並不例 夕卜。一些表面蛋白質具有對GBS治病性很重要的毒力因子的特徵((革蘭氏陽性病原體 中 Paoletti, L. C 等人的綜述，Fischetti V. A 等人編輯，ASM Press2000,137-153 頁)； {Paoletti, L.等人，2002})。如果抗這些蛋白質的抗體對人類能提供比多糖更好的保護， 它們能提供新型基於蛋白質的GBS疫苗的來源以連接於或替代更加傳統的莢膜多糖疫苗 而使用。一些作為可能疫苗的抗原以及許多額外候選的上面描述的蛋白質的用途主要由基 於鑑別的容易或可獲得的機會的挑選產生。以更加全面的方式鑑別無乳鏈球菌相關抗原是 有需求的。本發明者已經開發了從特異性病原體尤其是從金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus^idermidis)鑑別、分離和生產超免疫血清反 應性抗原的方法(W002/059148)。然而，假設生物特性致病功能和遺傳背景的不同，無乳鏈 球菌與葡萄球菌株截然不同。重要地，為了鑑別無乳鏈球菌的抗原，血清的選擇不同於應用 於金黃色葡萄球菌篩選的那個。為了那個目的，收集了人類四個主要類型的抗體來源。首 先，GBS子宮頸和肛門直腸攜帶測試為陰性的健康懷孕婦女。這個供體組代表了抗體最重 要的來源。除了它們的血清樣品外，用子宮頸紗布收集的含有分泌型IgA(SlgA)的人子宮 頸分泌物也用於抗原的鑑別和確認。這個收集物的主要價值是SlgA能被認為是黏膜表面 上的主要免疫效應分子。其次，有GBS群集的健康懷孕婦女，其新生兒仍保持無GBS (儘管 用了抗生素預防)。第三，沒有臨床疾病的小於45歲的成人。第四，幼稚個體，5到10個月 之間的小孩，在他們已經失去母體抗體之後且由於GBS疾病的缺乏而沒有獲得GBS特異性 抗體。為了能夠挑選相關血清來源，用細菌裂解物和培養上清蛋白質進行了測量抗無乳 鏈球菌IgG和IgA抗體水平的一系列ELISA和免疫斑點實驗。來自高滴度攜帶者和非攜帶 者的血清包括在基於基因組的抗原鑑別。這個挑選人類血清的方法基本上與金黃色葡萄球 菌使用的方法非常不同，在這裡攜帶或非攜帶狀態不與抗體水平相關。本發明使用了高通量基因組方法以鑑別在感染和群集過程中有誘導人類抗體能 力的體內表達的病原體特異性蛋白質。兩個細菌種屬_無乳鏈球菌和金黃色葡萄球菌的基因組本身顯示了許多重要的 不同。無乳鏈球菌的基因組含有大約2. 2Mb，而金黃色葡萄球菌有2. 85Mb。它們分別具有 35. 7%和33%的平均GC含量，兩個病原體之間大約30%至45%的編碼基因不同。另外，對 於增殖兩個細菌種類需要不同的生長條件和培養基。兩個病原體造成的最重要疾病的列表顯示如下。金黃色葡萄球菌主要引起醫院的機會性感染膿皰病、毛囊炎、膿腫、癤子、感染 的傷口、心內膜炎、腦膜炎、膿毒性關節炎、肺炎、骨髓炎、皮膚燙傷綜合症(SSS)、毒性休克 綜合症。無乳鏈球菌主要引起新生兒感染和老年人的疾病，例如菌血症、敗血症、傷口感染、 骨髓炎和腦膜炎。指定為NEM316(ATCC 12403)的無乳鏈球菌莢膜血清型III的分離物的完全 基因組序列由隨機鳥槍測序策略測定(GenBank註冊號AL732656 ；見誦.tigr. org/ tigrscripts/CMR2/CMRHomePage. spl) {Glaser, P.等人，2002}。本發明潛在的難題是提供 開發例如抗無乳鏈球菌感染疫苗的藥劑的方法。更加特 別地，所述難題提供了能用於生產所述藥劑的一套有效、相關和全面的來自無乳鏈球菌的 核酸分子或超免疫血清反應性抗原。所以，本發明提供了編碼高免疫反應血清反應抗原或其片段的分離的核酸分子， 包含如下核酸序列，選自a)與選自Seq ID No 14，90，157-216的核酸分子至少具有70%序列相同性的核 酸分子，b)互補於a)的核酸分子的核酸分子，c)包含a)或b)的核酸分子至少15個連續鹼基的核酸分子d)在嚴格雜交條件下退火於a)、b)或C)的核酸分子的核酸分子e)由於遺傳密碼的簡併性，否則將雜交於a)、b)、c)或d)中定義的核酸分子的核 酸分子。根據本發明的優選實施方案，序列相同性是至少80 %，優選地至少95 %，尤其是 100%。此外，本發明提供了編碼超免疫血清反應性抗原或其片段的的分離的核酸分子， 包含如下核酸序列，選自a)與選自 Seq ID No 1，3，5-13，15，18-25，27-31，33-36，39-68，70-85，92-100， 103-126，128-145，147，149-156，217，435-448 和 463-474 的核酸分子至少具有 96% 或高於 96%，優選地至少98%，尤其是100%序列相同性的核酸分子，b)互補於a)的核酸分子的核酸分子，c)包含a)或b)的核酸分子至少15個連續鹼基的核酸分子d)在嚴格雜交條件下退火於a)、b)或C)的核酸分子的核酸分子e)由於遺傳密碼的簡併性，否則將雜交於a)、b)、c)或d)中定義的核酸分子的核 酸分子。根據另一個方面，本發明提供了編碼超免疫血清反應性抗原或其片段的分離的核 酸分子，包含如下核酸序列，選自a)與選自Seq ID No 32，86，91，101，127的核酸分子具有98%或高於98%，尤其 是100%序列相同性的核酸分子，b)互補於a)的核酸分子的核酸分子，c)由於遺傳密碼的簡併性，否則將雜交於a)、b)、c)或d)中定義的核酸分子的核 酸分子優選地，核酸分子是DNA或RNA。
根據本發明優選的實施方案，核酸分子從尤其是無乳鏈球菌基因組DNA的基因組DNA分離。根據本發明，提供了包含根據本發明的任一核酸分子的載體。在優選實施方案中，載體經改造以適於根據本發明的核酸分子編碼的超免疫血清 反應性抗原或其片段的重組表達。 本發明也提供了包含根據本發明的載體的宿主細胞。根據另一方面本發明進一步提供了包含根據本發明的核酸分子編碼的胺基酸序 列的超免疫血清反應性抗原。優選的實施方案中，胺基酸序列(多肽)選自Seq ID No 231，307，374-433。另一優選實施方案中胺基酸序列(多肽)選自Seq ID No 218，220，222-230，232， 235-242，244-248，250-253，256-285，287-302，309-317，320-343，345-362，364，366-373， 434,449-462 和 475-486。進一步優選的實施方案中，胺基酸序列(多肽)選自Seq ID No 249,303,308, 318,344ο根據另一方面，本發明提供了選自包含表IA 「推定的免疫原性胺基酸」和「鑑別的 免疫原性區域位置」縱欄的胺基酸序列的超免疫血清反應性抗原之片段的肽，尤其是包含 選自如下胺基酸的肽Seq ID No 218 的 4-20，35-44，65-70，73-87，92-98，112-137， 152-161，177-186，193-200，206-213，229-255，282-294，308-313，320-326，349-355， 373-384，388-406，420-425 和 115-199 ；Seq ID No 219 的 5-24，35-41，44-70，73-89， 103-109，127-143，155—161，185—190，192—207，212—219，246—262，304—336，372—382， 384-393，398-407，412-418，438-444，1-75,76-161 和 164-239 ；Seq ID No 220 的 4-10, 16-58,60-71，77-92，100-126，132-146，149-164，166-172，190-209，214-220，223-229， 241-256，297-312，314-319，337-343，351-359，378-387，398-418，421-428，430-437， 440-448,462-471,510-519,525-536,552-559,561-568,573-582,596-602,608-630, 637-649,651-665,681-702,714-732,739-745,757-778,790-805,807-815,821-829, 836-842,846-873,880-903,908-914,916-923,931-940,943-948,956-970,975-986, 996-1015,1031-1040,1051-1069,1072-1095,1114-1119,1130-1148, 1150-1157, 1169-1176，1229-1238 和 802-812 ;Seq ID No 221 的 5-12，14-26，35-47，52-67，72-78， 83-98,121-141,152-159,163-183,186-207,209-257,264-277,282-299,301-309, 312-318，324-339，358-368，372-378，387-397，425-431 和 46-291 ；Seq ID No 222 的 29-38,44-64,70-76,78-87,94-100,102-112,119-134,140-149,163-173, 178-186, 188-194，207-234，247-262，269-290 和 73-92 ；Seq ID No 223 的 10-28，36-63，77-87， 103-119，127-136，141—169，171—183，195—200，207—232，236—246，251—265，268—283， 287-297,314-322,335-343,354-363,384-390,405-411,419-436,443-455,467-473, 480-513,518-529,550-557,565-585,602-608,616-625,632-660,665-677,685-701, 726-736，738-747，752-761，785-796，801-813，838-853，866-871 和 757-774 ；Seq ID No224 的 31-38,61-66,74-81,90-115,123-145，154-167，169-179，182-193，200-206，238-244， 267-272 和 235-251 ；Seq ID No 225 的 19-25，38-54，56-64，66-72，74-92，94-100， 116-129，143-149，156-183，204-232，253-266，269-275，294-307 和 241-313 ；Seq ID No226 的 5-34，50-56，60-65，74-85，89-97，108-119，159-165，181-199，209-225，230-240， 245-251，257-262，274-282，300-305 和 64-75 ；Seq ID No 227 的 5-13，16-21，27-42， 45-52，58-66，74-87，108-114，119-131 和 39-51 ；Seq ID No 228 的 6-23，46-54，59-65， 78-84,100-120,128-133,140-146,159-165,171-183,190-204,224-232,240-248, 250-259，274-280，288-296，306-315 和 267-274 ；Seq ID No 229 的 5-12，15-24，26-36， 42-65,68-80,82-104,111-116,125-144，159-167，184-189，209-218，235-243，254-265， 269-283，287-300，306-316，318-336，338-352，374-392 和 162-174 ;Seq ID No 230 的 30-42，45-54 和 25-37 ;Seq ID No 231 的 10-30，53-59，86-95，116-130，132-147，169-189， 195-201，212-221，247-256，258-265，278-283，291-298，310-316，329-339，341-352， 360-367，388-396，398-411，416-432，443-452，460-466，506-512，515-521，542-548 和 419-431 ；Seq ID No 232 的 4_27，30-53，60-67，70-90，92-151，159-185，189-195， 198-210,215-239 和 173-189 ；Seq ID No 233 的 4-26，41-54，71-78，116-127，140-149，
151-158，161-175，190-196，201-208，220-226，240-252，266-281，298-305，308-318， 321-329，344-353，372-378，384-405，418-426，429-442，457-463，494-505，514-522 和 174-188 ；Seq IDNo 234 的 17—25，27—39，61—67，81—89，99—110，120—131，133—139， 147-161，167-172，179-185，192-198，203-213，226-238，243-258，261-267，284-290， 296-307，311-328，340-352，356-371 和 2 39-256 ；Seq ID No 235 的 8-30，40-49，67-80， 114-123，126-142，152-162，188-194 和 57-70 ；Seq ID No 236 的 4-23，28-34，36-47， 50-61,76-81,89-94,96-104,112-119,126-146，155-181，195-200，208-214，220-229， 244-260,263-276,282-288,292-300,317-323,336-351,353-359,363-375,382-399, 415-432, 444-455,458-471,476-481,484-492,499-517,522-529,535-541,543-568,
572-584，586-600，607-617，626-637，656-675和 282-297 ;Seq ID No 237 的 6-24，30-35， 38-45，63-91，134-140，146-160，167-188，214-220，226-234，244-250，260-270，286-301， 316-329，340-371,429-446，448-459，474-481,485-491，512-526，537-544，550-565，
573-583，596-613，621-630，652-658和 87-97 ；Seq ID No 238 的 8-20，26-48，56-67， 76-86,94-109,115-121，123-129，143-160，178-186，191-198，201-208，221-236，238-244， 260-268 和 237-247 ；Seq ID No 239 的 4-40，42-57，73-87，98-117，126-135，150-156， 166-174，196-217，231-236，248-258，276-284，293-301，307-313，339-347，359-365， 375-387, 395-402,428-440,445-456,485-490,497-505,535-541,547-555,610-625, 648-656,665-671 和 448-528 ；Seq ID No 240 的 10-18，39-45，51-61，80-96，98-106， 110-115，158-172，174-183，191-200，220-237，249-255，274-289，308-324，33卜341， 372-381，384-397，405-414 和 322-338 ;Seq ID No 241 的 30-36，38-56，85-108，134-147， 149-160，163-183，188-201，206-211，219-238，247-254 和 5-13 ;Seq ID No 242 的 11-40， 98-103，110-115，133-145，151-159，172-179，192-201，204-212，222-228，235-245， 258-268,283-296,298-309,322-329,342-351,354-362,372-378,385-393,407-418, 495-516 和 1-148 ；Seq ID No 243 的 5-19，21-36，73-94，112-119，122-137，139-145，
152-167,184-190,198-204,208-224,249-265,267-281,299-304,309-317,326-333, 356-364，368-374，381-389，391-414，419-425，430-435 和 113-140 ；Seq IDNo 244 的 45-54，59-67，78-91和 15-23 ;Seq ID No 245 的 11-22，33-47，52-80，88-112，124-129 和6-25 ；Seq ID No 246 的 26-41,51-63,80-89,93-115,150-163,187-193,220-237, 240-249,286-294,296-306,316-329,345-353,361-370,407-425,428-437,474-482, 484-494,504-517,533-541,549-558,595-613,616-625,660-668,673-685,711-726, 736-744,749-761,787-802,812-820,825-837,863-878,888-896,901-913,939-954, 964-972,977-989,1003-1008，1016-1022，1028-1034，1041-1053，1059-1074，1101-1122， 420-511 和 581-704 ；Seq ID No 247 的 18-25，27-55，71-83，89-95，102-113，120-146， 150-156,174-185 和 159-175 ；Seq ID No 248 的 24-30，38-56，63-68，87-93，136-142， 153-164，183-199，213-219，226-234，244-261，269-278，283-289，291-297，320-328， 330-336,340-346,348-356,358-366,382-387,401-408,414-419,449-455,468-491, 504-512,531-537,554-560,597-608,621-627,632-643,650-662,667-692,703-716, 724-737，743-758，783-794，800-818，846-856 和 806-884 ;Seq ID No 249 的4-14，21-39， 86-92,99-107,121-131，136-144，147-154，158-166，176-185，193-199，207-222，224-230 和 117-136 ；Seq ID No 250 的 65-76，85-97，103-109，115-121，125-146，163-169， 196-205,212-219,228-237,241-247,254-262,269-288,294-303,305-313,328-367, 395-401，405-412，418-429，437-447，481-488，506-513，519-524，530-541， 546-557 和 266-284 ；Seq ID No 251 的 5-14，37-42，49-71，78-92，97-112，127-136，147-154， 156-163，186-198，216-225，233-243，248-253，295-307，323-332，359-366，368-374，
380-398和 194-223 ；Seq ID No 252 的 4-11，33-39，45-72，100-113，119-129，136-144， 169-175，177-185,200-208,210-219,262-276,278-297,320-326，336-344，347-362,
381-394,443-453和 438-454 ；Seq ID No 253 的 4-29，31-52，55-61，95-110，138-158， 162-171，179-187，202-229，239-248，251-256，262-267，269-285，304-310，351-360， 362-368，381-388，415-428，435-440，448-458 和 161-178 ；Seq ID No 254 的 4-17，19-28， 32-43,47-59,89-110,112-126,128-134，140-148，152-161，169-184，191-204，230-235， 255-264，328-338，341-347，401-409，413-419，433-441，449-458，463-468，476-482， 486-492，500-506，529-545 和 305-381 ;Seq ID No 255 的 10-29，38-45，53-61，134-145， 152-160，163-170,202-208,219-229,248-258,266-275,282-288,315-320,328-334, 377-385,392-402,418-424,447-453,460-471,479-487,491-497,500-507,531-537, 581-594,615-623,629-635,644-652,659-666,668-678,710-717,719-728,736-741, 747-760，766-773，784-789，794-800，805-817，855-861，866-887 和 698-715 ;Seq IDNo 256 的 16-26，29-37，44-58，62-68，74-80，88-95，97-120，125-144，165-196 和 58-72 ；Seq ID No 257 的 14-21，23-46，49-60，63-74，78-92，96-103，117-129，134-161，169-211， 217-231，239-248，252-281，292-299，313-343 和 243-257 ;Seq ID No 258 的 11-27，46-52， 67-72，76-84，91-112，116-153，160-175，187-196，202-211，213-220 和 43-76 ；Seq ID No 259 的 5-29，37-56，78-86，108-118，152-161 和 120-130 ;Seq ID No 260 的 8-14，19-41， 52-66，75-82，87-92，106-121，127-133，136-143，158-175，180-187，196-204，221-228， 239-245，259-265，291-306，318-323，328-340，352-358，361-368，375-381，391-399， 411-418,431-442,446-455,484-496,498-510,527-533,541-549,558-565,575-585, 587-594，644-655，661-668，671-677 和 184-196 ；Seq ID No 261 的 4-22，29-38，55-62， 75-81,102-107,110-134,143-150,161-167,172-179,191-215,223-233,241-247,251-264，266-272，288-309，340-352，354-366，394-402，414-438 和 198-218 ；Seq ID No 262 的 24-44，49-70，80-91，105-118，128-136，140-154 和 77-92 ;Seq ID No 263 的 5-22，
31-36，41-47，67-74，83-90，105-122，135-143，160-167和 118-129 ；Seq ID No 264 的 4-25,33-73,81-93,96-106,114-120,122-128，130-172，179-208，210-241，251-283， 296-301 和 92-100 ；Seq ID No265 的 14-24，29-38，43-50，52-72，86-97，101-107，110-125， 127-141，145-157，168-175，177-184，186-195，205-226，238-250，255-261，284-290， 293-304,307-314,316-323,325-356,363-371,383-390,405-415,423-432,442-454, 466-485,502-511,519-527,535-556,558-565,569-574,612-634,641-655,672-686, 698-709,715-722,724-732,743-753,760-769,783-792,818-825,830-839,842-849, 884-896，905-918，926-940，957-969，979-1007，1015-1021，1049-1057 和 336-349 ；Seq ID No 266 的 6-16，26-31，33-39，62-73，75-85，87-100，113-123，127-152，157-164，168-181， 191-198，208-214，219-226，233-254，259-266，286-329 和 181-195 ；Seq I DNo 267 的 4-13,
32-39,53-76,99-108,110-116,124-135，137-146，149-157，162-174，182-190，207-231， 242-253, 255-264, 274-283,291-323,334-345,351-360,375-388,418-425,456-474, 486-492，508-517，520-536，547-560，562-577，31-45 和 419-443 ;Seq ID N0268 的 15-26， 30-37,42-49,58-90,93-99,128-134,147-154,174-179,190-197,199-205,221-230, 262-274，277-287，300-314，327-333，343-351，359-377，388-396，408-413，416-425， 431-446 和 246-256 ;Seq ID No 269 的 5-26，34-42，47-54，61-67，71-104，107-115， 131-138，144-153，157-189，196-202，204-210，228-245，288-309，316-329，332-341， 379-386,393-399,404-412,414-421,457-468,483-489,500-506,508-517,523-534, 543-557,565-580,587-605,609-617,619-627,631-636,640-646,662-668,675-682, 705-710, 716-723,727-732,750-758,784-789,795-809,869-874,14-138,166-286, 372-503,674-696 和 754-859 ；Seq ID No 270 的 5-17，32-38，40-47，80-89，113-119， 125-137，140-154，157-163，170-177，185-199，213-225，228-236，242-248，277-290， 292-305，323-333，347-353，364-370，385-394，399-406，423-433，441-451，462-474， 477-487 和 116-124 ;Seq ID No 271 的 7-16，18-30，32-49，53-61，63-85，95-101，105-115， 119-134，143-150，159-178，185-202，212-229，236-250，254-265，268-294 和 63-72 ；Seq ID No 272 的 4-12，19-47，73-81，97-103，153-169，188-198，207-213，217-223，236-242， 255-265,270-278,298-305,309-317,335-347,354-363,373-394,419-424,442-465, 486-492,500-507,542-549,551-558,560-572,580-589,607-614,617-623,647-653, 666-676，694-704，706-714，748-754，765-772，786-792，795-806 和 358-370 ;Seq IDNo 273 的 18-28，30-38，40-46，49-55，69-78，82-98，104-134，147-153，180-190，196-202， 218-236，244-261，266-273，275-286，290-295，301-314，378-387，390-395，427-434 和 290-305 ；Seq IDNo 274 的 4-13，20-31，39-51，54-61，69-84，87-105，117-124 和 108-125 ； Seq ID No 275 的 24-34，43-54，56-66，68-79 和 50-69 ;Seq ID No 276 的 5-43，71-77， 102-131，141-148，150-156，159-186，191-207，209-234，255-268，280-286，293-299， 317-323,350-357,363-372,391-397,406-418,428-435,455-465,484-497,499-505, 525-531,575-582,593-607,621-633,638-649,655-673,684-698,711-725,736-741, 743-752,759-769,781-793,813-831,843-853,894-905,908-916,929-946,953-963,970-978，1001-1007，1011-1033，165-178 和 818-974 ；Seq ID No 277 的16-44,63-86,
98-108,185-191,222-237,261-274,282-294,335-345,349-362,374-384,409-420, 424-430，440-447，453-460，465-473，475-504，522-534，538-551，554-560，567-582， 598-607,611-619,627-640,643-653,655-661,669-680,684-690,701-707,715-731, 744-750,756-763,768-804,829-837,845-853,855-879,884-890,910-928, 77-90,
144-212，279-355，434-536，782-810和 875-902 ;Seq ID No 278 的 4-22，29-41，45-51， 53-66,70-77,86-95,98-104,106-124，129-135，142-151，153-161，169-176，228-251，
284-299,331-337,339-370,380-387,393-398,406-411,423-433,440-452,461-469, 488-498，501-516，523-530，532-559，562-567，570-602，612-628，630-645，649-659， 666-672，677-696，714-723，727-747 和 212-227 ；Seq IDNo 279 的 4-9，17-31，35-41， 56-61，66-75，81-87，90-124，133-138，149-163，173-192，213-219，221-262，265-275， 277-282,292-298,301-307,333-346,353-363,371-378,419-430,435-448,456-469, 551-570，583-599，603-612 和 275-291 ;Seq ID No 280 的 28-34，53-58，72-81，100-128，
145-154，159-168，172-189，217-225，227-249，256-263，299-309，322-330，361-379， 381-388,392-401,404-417,425-436,440-446,451-464,469-487,502-511,543-551, 559-564，595-601，606-612，615-626，633-642，644-650，664-670，674-684，692-701， 715-723,726-734,749-756,763-771,781-787,810-843,860-869,882-889,907-917, 931-936,941-948,951-958,964-971,976-993,1039-1049,1051-1065,1092-1121, 1126-1132,1145-1151,1158-1173,1181-1192,1194-1208,1218-1223,1229-1243, 1249-1254,1265-1279,1287-1297,1303-1320,1334-1341,1343-1358,1372-1382, 1406-1417,1419-1425,1428-1434,1441-1448,1460-1473,1494-1504,1509-1514, 1529-1550，654-669 和 1400-1483 ；Seq IDNo 281 的 10-16，20-25，58-65，97-109，118-132， 134-146，148-155，186-195，226-233，244-262，275-284，295-310，317-322，330-339， 345-351,366-375,392-403,408-415,423-430,435-444,446-457,467-479,486-499, 503-510,525-537,540-585,602-612,614-623,625-634,639-645,650-669,700-707, 717-724，727-739，205-230 和 733-754 ；Seq ID No 282 的 5-22，37-43，72-81，105-113， 128-133，148-160，188-194，204-230，238-245，251-257 和 194-213 ;Seq IDNo 283 的 16-21，35-41，56-72，74-92，103-109 和 62-68 ;Seq IDNo 284 的 4-15，17-82，90-104， 107-159，163-170，188-221，234-245，252-265 和 220-235 ;Seq ID No 285 的 16-22，36-46， 61-75，92-107，113-121，139-145，148-160 和 30-42 ;Seq ID No 286 的 4-12，20-26，43-49， 55-62,66-78,121-127，135-141，146-161，164-170，178-189，196-205，233-238，269-279，
288-318，325-332，381-386，400-407和 328-346 ；Seq ID No 287 的 5-12，31-49，57-63， 69-79,89-97,99-114,116-127,134-142，147-154，160-173，185-193，199-204，211-222， 229-236，243-249，256-274 和 58-68 ;Seq ID No 288 的 10-20，28-34，39-53，68-79，84-90，
99-106和 73-79 ;Seq ID No 289 的 14-37，45-50，61-66，77-82，93-98，109-114，125-130， 141-146，157-162，173-178，189-194，205-210，221-226，237-242，253-258，269-274，
285-290，301-306，316-332，349-359，371-378，385-406，34-307和 312-385 ；Seq ID No 290 的 4-10，17-38，50-85，93-99，109-116，128-185，189-197，199-210，223-256，263-287，
289-312,327-337,371-386,389-394,406-419,424-432,438-450,458-463,475-502,507-513，519-526，535-542，550-567 和 361-376 ；Seq IDNo 291 的 10-39，42-93，100-144， 155-176,178-224,230-244,246-255,273-282,292-301,308-325,332-351,356-361, 368-379，386-393，400-421 和 138-155 ；Seq ID No 292 的 5-11，17-34，40-45，50-55， 72-80,101-123,145-151,164-172,182-187,189-195,208-218, 220-241, 243-252, 255-270,325-331,365-371,391-398,402-418,422-428,430-435,443-452,463-469, 476-484，486-494，503-509，529-553，560-565，570-590，608-614，619-627，654-661， 744-750,772-780,784-790,806-816,836-853,876-885,912-918,926-933,961-975, 980-987，996-1006，1016-1028，1043-1053，1057-1062，994-1003 和 1033-1056 ；Seq ID No 293 的 17-45,64-71,73-81,99-109,186-192,223-238,262-275,283-295,336-346, 350-363,375-385,410-421,425-431,441-448,454-463,468-474,476-512,523-537, 539-552,568-583,599-608,612-620,628-641,644-654,656-662,670-681,685-695, 702-708,716-723,725-735,757-764,769-798,800-806,808-816,826-840,846-854, 856-862，874-881，885-902，907-928，274-350 和 443-513 ;Seq ID No 294 的 4-22，29-41， 45-51,53-61,70-76,85-92,99-104,111-122,134-140,142-154,163-174,224-232, 255-265，273-279，283-297，330-335，337-348，356-367，373-385，391-396，421-431， 442-455,475-485,493-505,526-538,544-561,587-599,605-620,622-651,662-670, 675-681，687-692，697-712，714-735 和 252-262 ；Seq ID No 295 的 4-12，15-35，40-46， 50-59,67-94，110-128，143-169，182-188，207-215，218-228，238-250 和 74-90 ；Seq ID No 296 的 9-18，42-58，78-85，88-95，97-106，115-122，128-134，140-145，154-181，186-202， 204-223，261-267，269-278，284-293，300-336，358-368 和 12-29 ;Seq ID No 297 的 7-34，
46-53，62-72，82-88，100-105，111-117，132-137，144-160，166-180，183-189,209-221， 231-236，246-253，268-282，286-293，323-336，364-372，378-392，422-433 和 388-405 ；Seq ID No 298 的 21-27，34-50，72-77，80-95，164-177，192-198，202-220，226-236，239-247， 270-279，285-292，315-320，327-334，348-355，364-371，388-397，453-476，488-497， 534-545,556-576,582-588,601-607,609-616,642-662,674-681,687-697,709-715, 721-727,741-755 和 621-739 ;Seq ID No 299 的 4-14，16-77，79-109 和 25-99 ;Seq ID No 300 的 4-9，17-23，30-37，44-55，65-72，77-93，102-121，123-132，146-153和 17-29 ；Seq ID No 301 的 4-18，25-41，52-60，83-92，104-112，117-123，149-155，159-167，170-192， 201-210，220-227，245-250 和 124-137 ；Seq ID No 302 的 8-25，50-55，89-95，138-143， 148-153，159-169，173-179，223-238，262-268，288-295，297-308，325-335，403-409， 411-417,432-446,463-475,492-501,524-530,542-548,561-574,576-593,604-609, 612-622,637-654,665-672,678-685,720-725,731-739,762-767,777-783,820-838, 851-865,901-908,913-920,958-970,1000-1006,1009-1015,1020-1026,1043-1052, 1055-1061，1-128，252-341，771-793 和 1043-1058 ；Seq ID No 303 的 16-26,33-46 和 64-76 ；Seq ID No 304 的 4-27，69-77，79-101，117-123，126-142，155-161，171-186， 200-206，213-231，233-244，267-273，313-329，335-344，347-370，374-379，399-408， 422-443,445-453,461-468,476-482,518-534,544-553,556-567,578-595,601-620, 626-636,646-658,666-681,715-721,762-768,778-785,789-803,809-819,22-108, 153-318,391-527 和 638-757 ;Seq ID No 305 的 6-21，32-43，62-92，104-123，135-141，145-152，199-216，218-226，237-247，260-269，274-283，297-303，1-72 和 127-211 ；Seq ID No 306 的 6-26,50-56,83-89,108-114,123-131,172-181,194-200,221-238,241-247, 251-259，263-271，284-292，304-319，321-335，353-358，384-391，408-417，424-430， 442-448,459-466,487-500,514-528,541-556,572-578,595-601,605-613,620-631, 635-648,660-670,673-679,686-693,702-708,716-725,730-735,749-755,770-777, 805-811,831-837,843-851,854-860,863-869,895-901,904-914,922-929,933-938, 947-952,956-963,1000-1005，1008-1014，1021-1030，1097-1103，1120-1130，1132-1140， 1-213，269-592 和 992-1120 ;Seq ID No 307 的 9-16，33-39，47-59，65-79，81-95，103-108， 115-123，138-148，163-171，176-185，191-196，205-211，213-221，224-256，261-276， 294-302，357-363，384-390，95-111 和 161-189 ；Seq ID No 308 的 21-27，35-45，70-76， 92-105,129-143,145-155,161-166,170-191,204-211,214-231,234-246,249-255, 259-275 和 1-18 ；Seq ID No 309 的 21-35，45-53，56-64，69-97 和 1-16 ；SeqID No 310 的 25-33,41-47,61-68,86-101,106-114,116-129，134-142，144-156，163-176，181-190， 228-251,255-261,276-292,295-305,334-357,368-380,395-410,424-429,454-460, 469-482,510-516,518-527,531-546,558-570,579-606,628-636,638-645,651-656, 668-674,691-698,717-734,742-754,765-770,792-797,827-835,847-859,874-881, 903-909,926-933,942-961,964-977,989-1004,1010-1028,1031-1047,1057-1075, 1081-1095,1108-1117,1138-1144,1182-1189,1193-1206,1220-1229,1239-1246, 1257-1267,1271-1279,1284-1301,1312-1320,1329-1335,1341-1347, 1358-1371, 1399-1404,1417-1426,1458-1463,1468-1476,1478-1485,1493-1506,1535-1541, 1559-1574,1583-1590,1595-1601,1603-1611,1622-1628,1634-1644, 1671-1685, 1689-1696,1715-1720,1734-1746,1766-1775,1801-1806,1838-1844,1858-1871, 1910-1917,1948-1955,1960-1974,2000-2015,2019-2036,2041-2063,748-847 禾P 1381-1391 ；Seq IDNo 311 的 5-12，18-24，27-53，56-63，96-113，119-124，131-136， 157-163，203-209，215-223，233-246，264-273，311-316，380-389，393-399，425-433， 445-450,457-462,464-470,475-482,507-513,527-535,542-548,550-565,591-602, 607-613,627-642,644-664,673-712,714-732,739-764,769-782,812-818,826-838, 848-854，860-871，892-906，930-938，940-954，9 5 7 -973，990-998，1002-1021，1024-1033， 1037-1042,1050-1060,1077-1083,1085-1092,1100-1129,1144-1161,1169-1175, 1178-1189,1192-1198,1201-1207,1211-1221,1229-1239,1250-1270,1278-1292, 1294-1300,1314-1335,1344-1352,1360-1374,1394-1405,1407-1414,1416-1424, 1432-1452,1456-1462,1474-1497,1500-1510,1516-1522,1534-1542,1550-1559, 1584-1603，1608-1627，187-273 和 306-441 ；Seq ID No 312 的 70-80，90-97，118-125， 128-140，142-148，154-162，189-202，214-222，224-232，254-260，275-313，317-332， 355-360，392-398，425-432，448-456，464-470，476-482，491-505，521-528，533-546， 560-567，592-597，605-614，618-626，637-644，646-653，660-666，677-691 和 207-227 ；Seq ID No 313 的 5-19，26-34，37-55，57-66，69-83，86-102，115-134，138-143，154-172， 178-195，209-246，251-257，290-302，306-311 和 256-266 ;Seq ID No 314 的 10-20，22-28， 35-57,72-79,87-103,108-128，130-144，158-171， 190-198，225-242，274-291，301-315，317-324，374-385 和 353-365 ;Seq ID No 315 的 4-9，17-30，34-54，59-66，73-94，118-130， 135-150,158-171,189-198,219-239,269-275,283-301,89-106 和 176-193 ；Seq ID No 316 的 14-20,22-74,77-86,89-99,104-109,126-135,154-165,181-195,197-212, 216-224,264-275 和 107-118 ；Seq ID No 317 的 4-18，21-38，63-72，101-109，156-162， 165-179，183-192，195-210，212-218，230-239，241-256，278-290，299-311，313-322，
332-341,348-366,386-401,420-426,435-450,455-460,468-479,491-498,510-518, 532-538, 545-552,557-563,567-573,586-595,599-609,620-626,628-636,652-657, 665-681 和 1-198 ;Seq ID No 318 的 4-10，16-38，51-68，73-79，94-115，120-125，132-178， 201-208, 216-223,238-266,269-295,297-304,337-342,347-356,374-401,403-422, 440-447，478-504，510-516，519-530，537-544 和 191-206 ;Seq ID No 319 的 12-40，42-48， 66-71,77-86,95-102,113-120,129-137，141-148，155-174，208-214，218-225，234-240， 256-267,275-283,300-306,313-321,343-350,359-367,370-383,398-405,432-439, 443-461，492-508，516-526，528-535 和 370-478 ；Seq ID No 320 的 6-14，20-37，56-62， 90-95,97-113，118-125，140-145，161-170，183-202， 237-244，275-284，286-305，309-316，
333-359，373-401，405-412和 176-187 ；Seq ID No 321 的 33-44，50-55，59-80，86-101， 129-139，147-153，157—163，171—176，189—201，203—224，239—245，257—262，281—287， 290-297，304-320，322-331，334-350，372-390，396-401，71-88 和 353-372 ;Seq ID No 322 的 5-11，15-24，26-33，40-47，75-88，95-103，105-112 和 17-30 ；Seq ID No 323 的 5-11, 16-39，46-54，62-82，100-107，111-124，126-150，154-165，167-183，204-238，245-295， 301-313,316-335 和 8-16 ；Seq ID No 324 的 4-19，34-48，69-74，79-107，115-127， 129-135，143-153，160-169，171-182 和 142-153 ;Seq ID No 325 的 4-30，65-74，82-106， 110-120，124-132，135-140，146-175，179-184，190-196，217-223，228-233，250-267， 275-292，303-315，322-332 和 174-186 ；Seq IDNo 326 的 9-16，29-41，47-57，68-84， 87-109, 113-119, 162-180, 186-193, 195-201, 203-208, 218-230, 234-243, 265-271, 281-292,305-312,323-332,341-347,349-363,368-374,383-390,396-410,434-440, 446-452,455-464,466-473,515-522,529-542,565-570,589-600,602-613,618-623, 637-644，1019-1027，1238-1244，1258-1264，1268-1276，1281-1292，1296-1302 禾P 883-936 ；Seq IDNo 327 的 10-17，23-32，39-44，54-72，75-81，88-111，138-154，160-167， 178-185，201-210，236-252，327-334，336-342，366-376，388-400，410-430，472-482， 493-526，552-558，586-592，598-603，612-621，630-635，641-660 和 384-393 ；Seq ID No 328 的 4-22，24-39，50-59，73-84，100-105，111-117，130-138，155-161，173-178，182-189， 205-215,266-284,308-313,321-328,330-337,346-363,368-374,388-395,397-405, 426-434,453-459,482-492,501-507,509-515,518-523,527-544,559-590,598-612, 614-629，646-659，663-684，686-694，698-721 和 445-461 ;Seq ID No 329 的 14-22，27-33 和 3-17 ；Seq ID No 330 的 29-41，66-73，81-87，90-108，140-146，150-159，165-184， 186-196，216-226，230-238，247-253，261-269 和 126-140 ;Seq ID No 331 的 5-12，16-25， 27-33，36-45，60-68，83-88，103-126 和 86-101 ；Seq ID No 332 的 14-23，36-47，56-66， 84-89,94-105,111-127，140-153，160-174，176-183，189-203，219-225，231-237，250-257 和 194-227 ;Seq ID No 333 的 4-25，54-60，64-71，73-82，89-106，117-124，157-169，183-188，199-210，221-232，236-244，255-264 和 58-98 ;Seq ID No 334 的 13-19，26-36，
41-53,55-71,77-84,86-108,114-135，157-172，177-183，187-194，208-213，218-226， 110-125 和 156-170 ；Seq ID No 335 的 5-24，63-69，77-85，94-112，120-137，140-146， 152-159，166-172，179-187，193-199，206-212，222-228，234-240，244-252，257-264， 270-289，298-309，316-328，337-348，363-375，1-56 和 340-352 ；Seq ID No 336 的 18-39，
42-71，78-120，124-144，152-173，179-189，199-209，213-222，228-258，269-304，329-361， 364-372，374-389，396-441 和 313-327 ;Seq ID No 337 的 19-25，91-98，108-120，156-162， 168-174，191-204，211-216，232-266，272-278，286-308，316-321，327-333，344-355， 358-364，384-391，395-428，464-476，487-495，497-511，544-561，563-573，575-582， 588-594，10-25 和 322-338 ;Seq ID No 338 的 14-26，32-49，51-57，59-72，80-91，102-112， 119-125，147-161，164-173，175-183，188-213，217-222，246-254，260-276，282-303， 308-318,321-328,333-350,352-359,371-378,392-401, 407-414,416-443,448-463, 471-484,490-497,501-514,519-527,539-551,557-570,578-590,592-598,600-610, 618-629,633-647,654-667,676-689,702-709,718-726,728-737,741-760,764-780, 786-795,808-826,836-842,845-852,865-874,881-887,931-945,949-957,968-974, 979-986，1003-1009，1023-1029 和 90-103 ;Seq ID No 339 的 11-16，37-56，60-66，69-77， 80-88，93-106，117-139，166-171 和 72-90 ；Seq ID No 340 的 59-84，123-133，145-150， 161-167,178-189 和 115-128 ;Seq ID No 341 的 15-33，39-46，52-64，74-87，108-124， 127-144，150-156，173-179，184-194，201-208，219-236，243-269，272-295，302-309， 343-349, 356-361,370-379,405-411,414-423,430-451,457-464,466-475,477-483, 496-502,507-522,541-548,557-563,571-577,579-585,590-605,626-642,650-662, 671-691,7 0 4 -7 1 0 , 751-7 6 9 , 7 7 5 - 781,7 8 6 - 791,7 9 4 -8 2 9 , 851-8 5 8 , 868 -8 7 8 , 8 8 4 -9 0 4, 913-919,931-939 和 132-142 ；Seq ID No 342 的 33-58，64-71，74-80，83-88，96-120， 122-139，146-157，167-177，207-213，220-225，236-242，264-279，300-305，326-336， 340-347，350-360，97-115 和 199-211 ；Seq ID No343 的 4-26，43-57，70-99，102-117， 121-133，142-148，151-168，170-183，192-220，235-249，258-279 和 30-41 ；Seq ID No 344 的 34-42，48-58，70-94，110-130，154-160，164-172，178-183，195-203，211-222，229-250， 256-261，274-284，286-292，312-323 和 222-233 ；Seq ID No 345 的 4-9，15-36，38-45， 49-74，78-88，100-112，136-191，211-220，226-233，239-246，254-274，287-307，316-322， 342-353，356-366，373-378，384-393，405-431，449-457，459-468，487-511，515-524， 529-541，544-552，562-568，571-576 和 208-280 ；Seq IDNo 346 的 10-27，31-37，39-54， 71-108,124-143 和 2-107 ;Seq IDNo 347 的 16-27，38-57，64-70，90-102，104-113， 116-137,160-166 和 1-80 ；Seq ID No 348 的 13-21，31-36，56-67，127-136，153-171， 173-180，184-200，214-222，225-231，239-263，267-273 和 135-159 ；Seq ID No 349 的 12-27,31-51,68-74,77-87,94-101,108-114,117-123,127-134,138-168,173-196, 201-207，212-217，227-237，247-257，264-280 和 205-223 ;Seq ID No 350 的 17-22，25-54， 70-76，92-100 和 98-110 ;Seq ID No 351 的 7-29，40-50，60-67，87-96，105-111，119-164， 172-199，206-212，220-227，237-259，272-279，282-293，295-309，313-319，321-328， 345-363，376-386 和 159-176 ;Seq ID No 352 的 4-19，24-30，36-43，50-68，71-89，93-106，141-152，154-172，179-197，199-215，229-239，246-252，255-263，281-298，319-325， 329-356, 358-368,374-390,397-409,420-429,432-444,450-456,459-475,483-494, 496-502，520-528，532-556 和 362-377 ；Seq ID No 353 的 18-25，40-62，77-85，91-97， 105-116，123-133，139-184，189-197 和 122-140 ；Seq ID No 354 的 4-49，52-58，62-70， 79-105, 109-133,142-150,163-168,206-214,220-228,233-240,243-254,274-281, 303-311,327-338,357-373,378-396,403-413,420-436,441-453,461-467,475-481, 484-498,506-512,514-521,523-529,562-579,589-595,598-603,615-648,714-722, 728-742，749-758，777-792，795-807 和 643-658 ；Seq IDNo 355 的 8-27，37-48，51-56， 72-79，87-106，120-138，140-147，167-176，187-197，205-216，222-229，234-239，243-249， 277-288,292-315,334-343,347-353,363-391,398-404,430-447,461-467,478-492, 498-507 和 456-470 ；Seq ID No 356 的 5-12，18-24，59-69，80-93，95-109，119-125， 130-137，139-1 47，158-163，168-176，182-202，206-215，222-239，241-249，267-277， 291-298, 311-318,321-327,338-344,348-355,373-386,393-406,411-417,434-443, 446-465，473-484，514-521，532-553，584-594 和 221-237 ；Seq IDNo 357 的 4-14，27-34， 50-58，63-72，79-106，109-114，121-142，146-154，161-167，169-175，178-201，223-238， 249-254，259-264，278-292，294-312，319-330 和 167-191 ；Seq ID No 358 的 7-28，36-42， 50-61,63-80,122-152,161-174,176-191 和 140-190 ；SeqID No 359 的 20-57,59-65, 70-78，86-102，119-133，142-161，163-173，177-188，192-202，204-220，222-236，240-253， 279-319，326-331，337-383，390-399，406-412，420-427，431-438 和 381-395 ；Seq ID No 360 的 13-18，28-34，37-43，50-59，75-81,83-97，105-121，139-147，200-206，209-227， 231-247，260-271，318-327，366-381，388-394，399-406 和 182-201 ;Seq ID No 361 的 6-29,37-43,51-56,70-77,82-102,110-119,127-143,178-190,201-209,216-243, 261-269，281-292，305-313，327-339，341-354，356-373，391-397，423-429，438-445， 450-478和 21-314 ;Seq ID No 362 的 4-12，15-21，32-41，59-76，80-89，96-104和90-103 ； Seq ID No 363 的 9-28，30-41，44-54，69-74，77-82，90-97，104-123，125-135，149-155， 164-173，177-184，217-226，230-235，238-244，258-272，282-297，300-305，309-315， 317-322,327-336,348-362,368-374,380-387,400-411,414-424,451-458,460-466, 483-494, 497-503,506-511,521-528,540-553,569-587,598-606,628-642,661-681, 688-700，718-733，740-749，752-764，769-783，823-834，848-854，862-872，878-884， 886-898，915-920，938-951，954-961，963-972，982-989，996-1003，1010-1016，1021-1032， 1038-1044,1047-1057,1060-1070,1079-1088,1094-1102,1117-1127,1129-1135, 1142-1153,1158-1204,1212-1229,1234-1263,1269-1277,1308-1313,1327-1338, 1344-1376，1400-1415，1436-1443，1448-1458，1497-1504，1511-1522，1544-1566，3-82 和 509-576 ；Seq ID No 364 的 8-36，40-64，71-79，88-94，102-109，118-127，138-148， 151-159，163-174，192—198，200—206，220—233，268—273，290—301，304—309，316—323， 331-349，378-391,414-420,427-437,455-475，494-510，541-547，549-555，616-640，1-60, 55-139，212-308，386-458 和 458-624 ；Seq ID No 365 的 16-31，35-42，70-77，91-101， 120-130，132-140，143-153，185-190，195-202，215-222，228-238，241-251，257-264， 268-277,288-302,312-324,326-333,341-348,364-382,415-429,438-454,458-466,491-499,501-521 和 273-281 ;Seq ID No 366 的 8-14，32-57，74-149，155-177，179-212， 221-266, 271-296,304-324,329-346,349-359,368-401,413-419,426-454,465-478, 493-510 和 466-490 ；Seq ID No 367 的 22-28，33-51，64-89，96-119，126-132，138-146， 152-159，161-169，172-179，193-198，205-211，221-231，235-254，273-280，297-303， 312-320，328-346，351-373，378-384，391-398，448-454，460-468，470-481，516-558， 574-593,597-602,613-623,626-646,649-656,668-673,675-683,696-708,715-722, 724-739，745-751，759-777，780-804，816-822 和 102-113 ;Seq ID No 368 的 12-28，41-91， 98-107，112-120，125-131，151-193，215-221，240-250，263-280 和 128-138 ；Seq ID No 369 的 16-24，32-38，46-62，68-81，90-105，127-133，144-150，160-166，178-184，186-202， 210-219，232-240，252-258，264-273，293-324，337-344，349-357，360-369，385-398， 410-416,419-427,441-449,458-476,508-515,523-539,544-549,562-569,571-579, 96-109 和 127-139 ;Seq ID No 370 的 19-25，28-34，56-61，85-97，110-116 和 39-53 ;Seq ID No 371 的 4-37，41-50，62-72，91-97，99-109，114-125，136-141，149-158，160-166， 201-215 和 27-225 ;Seq ID No 372 的 15-31，44-51，96-105，122-130，149-157，162-168， 178-183,185-192,198-204,206-213,221-234,239-245,248-255,257-266,289-335, 349-357，415-422，425-441，448-454，462-468 和 463-481 ;Seq ID No 373 的 5-31，39-55， 63-72，76-99，106-155，160-177，179-199，207-217，223-240，245-255，261-267，294-316， 321-343,354-378,382-452,477-488,529-536,555-569,584-591,593-612,620-627, 632-640，647-654，671-680，698-704，723-730，732-750，769-775，781-788，822-852 和 505-525 ；Seq ID No 374 的 3-18 ；Seq ID No 375 的 4-14 和 12-24 ；Seq ID No 376 的 4-11，22-30 和 12-25 ；Seq ID No377 的 5-12 和 4-18 ；Seq ID No 378 的 4-28 和 7-14 ；Seq ID No379 的 6-16 和 8-16 ;Seq ID No 380 的 4-15，18-33 和 24-36 ;Seq ID No 381 的 4-10， 16-21和 20-31 ；Seq ID No 382 的 6-19 ；Seq ID No 383 的 11-18和 3-10 ；Seq ID No 384 的 13-24 和 3-15 ；Seq ID No 385 的 15-27 和 7-16 ；Seq ID No 386 的 11-16 和 1-15 ；Seq ID No 387 的 4-16 和 9-21 ;Seq ID No 388 的 4-24，40-48，54-67 和 22-39 ;Seq ID No 389 的 6-30，34-55，62-68，78-106 和 68-74 ;Seq ID No 390 的 3-14 ;Seq ID No 391 的 9-19 和 6-21 ；Seq ID No 392 的 4-17 和 1-9 ；Seq ID No 393 的 5-30 和 1-8 ；SeqID No 394 的 4-16， 23-46，51-56 和 45-55 ;Seq ID No 395 的 7-16 ;Seq ID No 396 的 2-14 ;Seq ID No 397 的 4-36，43-65 和 50-62 ；Seq ID No 398 的 10-30 和 14-21 ；Seq ID No 399 的 9-17 和 1-10 ； Seq ID No 400 的 4-12 和 3-16 ；Seq ID No 401 的 4-15 和 5-23 ；Seq ID No 402 的 10-21 ； Seq ID No 403 的 6-16 ;Seq ID No 404 的 4-29，31-38 和 2-14 ;Seq ID No 405 的 4-35 和 33-42 ；Seq ID No406 的 2-17 ；Seq ID No 407 的 9-18，30-35 和 15-33 ；Seq ID No408 的 4-9 和 6-12 ；Seq ID No 409 的 3-17 ；Seq ID No 410 的 12-21，37-44，52-61，72-80 和 38-48 ；Seq ID No 411 的 4-10，29-44，54-61，69-78 和 13-27 ;Seq ID No 412 的 13-23， 36-53和 2-15 ;Seq ID No 413 的 4-25，28-46，56-72，81-99，120-132，134-142，154-160和 129-141 ；Seq ID No 414 的 4-15，24-33，35-41，64-86 和 21-33 ;Seq ID No 415 的 9-15 和 4-13 ；Seq ID No 416 的 4-11，13-19，34-48 和 15-32 ;Seq ID No 417 的 4-21 和 11-31 ;Seq ID No 418 的 23-57 和 38-50 ;Seq ID No 419 的 4-32 和 3-13 ;Seq ID No 420 的 4-10， 13-25，32-42，56-68，72-84 和 26-38 ；SeqID No 421 的 4-20，31-48，52-58，65-71，80-93，99-108，114-123和 37-49 ;Seq ID No 422 的 6-12，14-20和 3-25 ;Seq ID No 423 的 14-25， 27-38 和 5-14 ;Seq ID No 424 的 4-41，57-105，109-118，123-136，144-152 和 86-99 ;Seq ID No 425 的 6-19 ；Seq ID No 426 的 2-19 ；Seq ID No 427 的 14-47 和 1-14 ；Seq ID No 428 的 4-21，29-44 和 2-18 ；Seq ID No 429 的 23-29 和 10-28 ；Seq ID No 430 的 6-16, 22-36 和 11-22 ；Seq ID No 431 的 4-19，30-44 和 18-27 ；Seq ID No 432 的 5-15，37-45， 58-65 和 38-47 ；Seq ID No 433 的 4-15，23-34 和 4-15 ；Seq ID No 434 的 30-36，44-54， 79-85,101-114,138-152,154-164,170-175,179-200,213-220, 223-240, 243-255, 258-264,268-284和10-28 ；包含表IB的「相同區域」縱欄的胺基酸序列的肽，尤其是包含 如下胺基酸的肽Seq ID No 449 的 210-226 和 738-753 ;Seq ID No 450 的 326-344，
326-348，338-354，371-392，801-809和877-901；Seq ID No 451 的893-906 ;Seq ID No452 的 51-69 ；Seq ID No 453 的 110-125 ；Seq ID No 454 的 291-305 ；Seq ID No 455 的 210-226 和 738-753 ;Seq ID No 456 的 326-344，326-348，338-354，371-392，801-809 和 877-901 ；Seq ID No 457 的 893-906 ；Seq ID No 458 的 51-69 ；Seq ID No 459 的 110-125 ； SeqID No 460 的 291-305 ;Seq ID No 461 的 32-44 ;Seq ID No 462 的 399-410 ；表 2 的「氨 基酸從」到「胺基酸至」縱欄中指定的血清反應性表位，尤其是包含如下胺基酸的肽Seq ID No 218 的 120-143，138-161 和 156-179 ;Seq ID No 219 的 110-129 和 168-184 ;Seq ID No 222 的 74-90 ；Seq ID No 223 的 759-773 ；Seq ID No 224 的 237-260；Seq ID No 225 的 265-284 ；Seq ID No 226 的 65-74 ；Seq ID No 227 的 41-50 ；Seq ID No 229 的 163-174 ； Seq ID No 230 的 26-37 ；Seq ID No 232 的 174-189 ；Seq ID No 234 的 240-256 ；Seq ID No236 的 285-297 ；Seq ID No 238 的 238-247 ；Seq ID No 239 的 491-519 ；Seq ID No 243 的 114-140 ;Seq ID No 250 的 267-284 ;Seq ID No 252 的 439-453 ;Seq ID No 253 的 162-178 ；Seq ID No254 的 347-364 ；Seq ID No 255 的 699-715 ；Seq ID No 256 的 60-71 ； Seq ID No 257 的 244-257 ;Seq ID No 258 的 44-63 和 57-76 ;Seq ID No 260 的 185-196 ; Seq ID No 263 的 119-129 ;SeqID No 266 的 182-195 ;Seq ID No 267 的 32-44和 424-442 ; Seq IDNo 268 的 247-256 ;Seq ID No 269 的 678-694，785-805，55-77 和 72-94 ;Seq ID No 281 的 210-226 ；Seq ID No 289 的 37-59 ；SeqID No 296 的 13-29 ；Seq ID No 348 的 136-159 ；Seq ID No 349 的 205-222 ;Seq ID No 350 的 99-110 ;Seq ID No 351 的 160-176 ；Seq ID No 355 的 457-470 ；Seq ID No 356 的 221-237 ；Seq ID No357 的 167-190 ；Seq ID No 361 的 96-120 ;Seq ID No 364 的 399-417，503-519 和 544-563 ;Seq ID No 371 的 46-68，159-183 和 184-198 ；Seq ID No 372 的 463-481 ；表 4 的「胺基酸從」 到「胺基酸至」縱欄中指定的免疫原性表位；尤其是包含如下胺基酸的肽Seq ID No219的 110-129 和 168-184 ；Seq ID No 277 的 877-901，333-354，326-344 和 801-809 ;Seq ID No 347 的 l_54;Seq ID No 364 的 544-563，31-51，107-119，399-417 和 503-519 ;Seq ID No 218 的 120-198 ;Seq ID No 219 的 20-35 ;Seq ID No 221 的 118-201 ;SeqID No 242 的 48-132 ；Seq ID No 249 的 118-136 ;Seq ID No 253 的 162-178 ;Seq ID No 254 的 347-364 ；Seq ID No 255 的 699-715 ；Seq ID No 258 的 50-76 ；Seq ID No 269 的 785-819 和 44-128 ；SeqID No 274 的 90-128 ；Seq ID No 289 的 314-384 ；Seq ID No 293 的
327-349；Seq ID No 304 的 242-314，405-478 和 23-100 ;Seq ID No305 的 129-210 ;Seq ID No 307 的 162-188 ；Seq ID No 310 的 750-772 ；Seq ID No 335 的 1-56 ；Seq ID No 337 的322-337 ；SeqID No 339 的 72-90 ；Seq ID No 345 的 374-395 ；Seq ID No 348 的 136-159 ； Seq ID No 358 的 141-164 ；Seq ID No 361 的 96-157 ；Seq ID No 363 的 1-82 ；Seq ID No 364的489-556 ；Seq ID No 371的159-183和49-133 ；包含表5的「推定的免疫原性氨基 酸」和「鑑別的免疫原性區域(aa)的位置」縱欄的胺基酸序列的肽，尤其是包含如下胺基酸 的肽Seq ID No 475 的 4-26，35-41，53-61，73-84，103-108，114-120，140-146，156-162， 192-208，214-219，227-233，239-252，260-268，284-297，1-48 和 113-133 ;Seq ID No 476 的 4-27，38-44，50-56，59-64，72-79，83-89，92-97，108-116，123-148，152-167，183-196， 200-220，232-244，255-261，265-274，282-302，309-317，1-79 和 231-302 ;Seq ID No 477 的 6-28，66-72，85-105，115-121，144-151，160-170，176-185，223-230，252-288，296-310， 319-333，367-374，458-464，471-480，483-488，520-528，530-549，559-564，593-601， 606-616,636-643,655-662,676-682,684-699,719-726,735-750,757-764,777-785, 799-810，812-843，846-853，868-873，880-889，891-899，909-929，934-940，963-969， 998-1004，1007-1014，1016-1022，1030-1046，1-80 和 808-821 ；Seq ID No 478 的 7-24, 35-41,75-81,91-114,122-132，137-144，148-156，183-192，194-200，212-228，233-238， 251-258，275-295，326-332，337-346，1-79 和 305-321 ；Seq ID No 479 的 31-38，42-52， 66-72,86-92,98-104,115-122,127-146，154-164，169-187，198-212，225-237，255-269， 13-92 和 135-142 ；Seq ID No 480 的 4-36，39-49，63-69，71-77，81-88，123-131，133-139， 160-169，174-180，188-194，210-217，273-278，289-300，317-334，336-341，383-401， 425-438，1-68,212-270 和 402-446 ;Seq ID No 481 的 21-29，31-42，49-63，72-79，81-93， 112-132，159-165，188-195，197-232，262-267，279-286，294-301，318-326，348-366， 381-405,409-426,436-465,471-480,484-492,497-505,521-544,554-561,567-577, 581-589,601-609,611-622,636-651,653-667,669-685,700-708,716-722,729-744, 749-766，780-786，789-811，814-864，1-57 和 84-106 ；Seq ID No482 的 6-24，35-48，57-63， 72-78,87-92，113-119，123-137，147-153，173-181,212-233 和 1-124 ；Seq ID No 483 的 13-34,62-69,78-83,86-91,98-104,107-115,146-159,179-188,195-205,209-221, 226-233,239-253,276-282,284-294,297-308,331-354,375-382, 388-399, 421-433, 449-458,464-469,472-491,508-513,525-531,534-550,575-593,601-618,629-635, 654-661，666-680，706-721，723-740，771-805，810-830，845-851 和 1-84 ；Seq ID No484 的 4-32,45-64,73-83,86-92,100-111,125-147,157-163,170-175, 177-188,226-232, 245-252，258-274，320-335，348-359 和 1-71 ;Seq ID No 485 的 13-40，43-71，76-83， 87-101,109-119,125-156,162-175,182-219,226-232,240-262,270-287,306-318, 326-342，344-408，414-444，449-456 和 1-51 ;Seq ID No 486 的 4-16，18-34，45-54， 99-108,134-140,203-212,241-257,266-274,279-291,308-315,330-336,355-370, 374-382，402-410，428-455，466-472，474-480，531-554，560-566，572-580，597-618， 632-660，664-674，676-685，691-705，708-735，750-768，1-87 和 342-480 ；表 6 的「胺基酸 從」到「胺基酸至」的縱欄中指定的血清反應性表位，尤其是包含如下胺基酸的肽No 475 的 115-132 和 1-26 ；Seq ID No 476 的 33-55 ；Seq ID No 478 的 1-25 ；Seq ID No 479 的 37-61 ；SeqID No 480 的 1-24 ；Seq ID No 481 的 1-23 ；Seq ID No 482 的 46-60 ；Seq ID No 483 的 1-28，23-50 和 45-71 ；Seq ID No 484 的 1-22 和 17—38 ；Seq ID No 485 的 1-22 和17-38 ；Seq ID No 486的1-27，22-47和422-447 ；表7的「胺基酸從」到「胺基酸至」縱欄 中指定的免疫原性表位，尤其是包含如下胺基酸的肽Seq ID No 475的115-132和1_47 ； Seq ID No 476 的 1-55 ；Seq ID No 477 的 22-85 ；Seq ID No478 的 307-320 和 1-44 ；Seq ID No 479 的 15-76 和 40-92 ；SeqID No 480 的 1-59，213-269 和 403-445 ；Seq ID No 481 的 1-56 和 85-105 ;Seq ID No 482 的 37-121 ;Seq ID No 483 的 1-71 ;Seq IDNo 484 的 1-38 ；Seq ID No 485 的 1-38 ；Seq ID No 486 的 1-47。本發明也提供了生產根據本發明的無乳鏈球菌超免疫血清反應性抗原或其片段 的方法，包括在合適的表達系統中表達根據本發明的一個或多個核酸分子。此外，本發明提供了生產表達根據本發明的無乳鏈球菌超免疫血清反應性抗原或 其片段的細胞的方法，包括用根據本發明的載體轉化或轉染合適的宿主細胞。根據本發明提供了尤其是疫苗的藥物組合物，其包含如本發明定義的超免疫血清 反應性抗原或其片段或如本發明定義的核酸分子。優選實施方案中，藥物組合物進一步包含了免疫刺激物質，優選地選自尤其是聚 陽離子肽的聚陽離子聚合物、免疫刺激脫氧核苷酸(0DN)、含有尤其是KLKL5KLK的至少兩 個LysLeuLys基團的肽、尤其是人生長激素的神經活性化合物、明礬(alumn)、弗氏完全或 不完全佐劑或它們的組合。更加優選的實施方案中，免疫刺激物質是聚陽離子聚合物和免疫刺激脫氧核苷酸 或含有至少兩個LysLeuLys基團的肽和免疫刺激脫氧核苷酸的組合。還更優選的實施方案中，聚陽離子聚合物是聚陽離子肽，尤其是聚精氨酸。根據本發明，提供了根據本發明的核酸或根據本發明的超免疫血清反應性抗原或 其片段用於藥物製備物的生產的用途，尤其是用於抗無乳鏈球菌感染的疫苗的生產。同此，也提供了至少結合於根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段的選擇 性部分的抗體或其至少有效部分。優選的實施方案中抗體是單克隆抗體。另一優選的實施方案中抗體的有效部分包含Fab片段。進一步優選的實施方案中抗體是嵌合抗體。還優選的實施方案中抗體是人源化抗體。本發明也提供了產生根據本發明的抗體的雜交瘤細胞系。此外，本發明提供了產生根據本發明的抗體的方法，特徵在於如下的步驟 通過給予非人的動物如本發明中定義的超免疫血清反應性抗原或其片段啟動 所述動物的免疫反應， 從所述動物移出含抗體的體液，以及 通過進一步純化步驟處理含所述抗體的體液產生抗體。相應地，本發明也提供了一種產生根據本發明的抗體的方法，特徵在於如下的步 驟 通過給予非人的動物如本發明中定義的超免疫血清反應性抗原或其片段啟動 所述動物的免疫反應， 從所述動物移出脾或脾細胞， 生產所述脾或脾細胞的雜交瘤細胞
挑選和克隆特異於所述超免疫血清反應性抗原或其片段的雜交瘤細胞， 通過所述克隆的雜交瘤細胞的培養和可選的進一步純化步驟產生抗體。根據上面方法提供或生產的抗體可以用於治療或預防無乳鏈球菌感染的藥劑的 製備。根據另一方面，本發明提供了結合根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段 的拮抗劑。所述能夠結合根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段的拮抗劑可以通過 包含如下步驟的方法鑑別a)將分離的或固定化的根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段在允許候 選拮抗劑和所述超免疫血清反應性抗原或其片段結合的條件下，在能夠提供應答於候選拮 抗劑和所述超免疫血清反應性抗原或其片段結合的可檢測信號的組分的存在下，與所述候 選拮抗劑接觸；以及b)檢測應答於拮抗劑與超免疫血清反應性抗原或其片段結合的信號的存在或不 存在。能夠降低或抑制根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段與其相互反應伴 侶的相互反應活性的拮抗劑可以通過包含如下步驟的方法鑑別a)提供了根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其高免疫片段，b)向所述超免疫血清反應性抗原或其片段，提供相互反應伴侶，尤其是根據本發 明的抗體，c)允許所述超免疫血清反應性抗原或其片段與所述相互反應伴侶的相互反應以 形成相互反應複合物，d)提供候選拮抗劑，e)允許候選拮抗劑和相互反應複合物之間發生競爭反應，f)測定候選拮抗劑是否抑制或降低超免疫血清反應性抗原或其片段與相互反應 伴侶的相互反應活性。根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段可用於所述超免疫血清反應性抗 原或其片段的相互反應伴侶的分離和/或純化和/或鑑別。本發明也提供了體外診斷與根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段的表 達相關的疾病的方法，包括測定根據本發明編碼所述超免疫血清反應性抗原或其片段的核 酸序列的存在，或根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段的存在。本發明也提供了尤其是無乳鏈球菌感染的細菌感染體外診斷的方法，包括分析根 據本發明編碼所述超免疫血清反應性抗原或其片段的核酸序列的存在或根據本發明的超 免疫血清反應性抗原或其片段的存在。此外，本發明提供了根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段的用途其 用以產生結合於所述超免疫血清反應性抗原或其片段的肽，其中所述肽是抗促成素 (anticaline)0本發明也提供了根據本發明的超免疫血清反應性抗原或其片段的用途，其用以生 產功能性核酸，其中所述功能性核酸選自適體(aptamer)和鏡面體(spiegelmers)。根據本發明的核酸分子也可用於功能性核糖核酸的生產，其中所述功能性核糖核酸選自核酶、反義核酸和siRNA。本發明有利地提供了使用來自多個人血漿合併物的抗體製備物和來源於無乳鏈 球菌基因組的表面表達文庫，從無乳鏈球菌鑑別出來的一套有效的、相關的和全面的分離 的核酸分子和它們編碼的超免疫血清反應性抗原或其片段。因而，本發明滿足了在製備抗 體和鑑別有效對抗無乳鏈球菌感染的化合物的過程中有用的無乳鏈球菌抗原、疫苗、診斷 和產品的廣泛需要。有效疫苗應當由所有株表達的並能誘導抗無乳鏈球菌細胞表面組分的高親和力、 豐富抗體的蛋白質或多肽組成。對於調理作用，抗體應當是IgGl和/或IgG3，對於粘附和毒 素作用的中和，是任何IgG亞型和IgA。化學限定的疫苗必須是明確地比全細胞疫苗優良， 因為與人類組織交叉反應或抑制調理作用的無乳鏈球菌的組分能被去除，並且誘導保護抗 體和/或保護免疫反應的個體蛋白質能被挑選出來。本發明採用的方法是基於GBS蛋白質或肽與人血清中存在的抗體的相互作用。人 免疫系統產生的並且在人血清中存在的抗無乳鏈球菌抗體是抗原蛋白質的體內表達和它 們的免疫原性的指徵。另外，在用個體選擇或產生的血清進行的第二和第三輪篩選中處理 抗原蛋白質，所述抗原蛋白質是使用預選血清的合併物通過細菌表面展示表達文庫鑑別 的。因而，本發明提供了作為藥物組合物尤其是預防無乳鏈球菌感染的疫苗的一套有效、相 關、全面的GBS抗原。在鑑別根據本發明的一全套抗原的抗原鑑別程序中，用一些血清合併物或血漿級 分或其它合併的含有抗體的體液(抗體合併物)篩選了至少兩個不同的細菌表面表達文 庫。抗體合併物來源於已經測試了抗無乳鏈球菌抗原化合物的血清收集物，例如全部細胞 提取物和培養上清蛋白質。優選地，使用三個截然不同的血清收集物，得自ad 1.健康懷孕 婦女，子宮頸和肛門直腸GBS攜帶測試陰性，ad 2.健康懷孕婦女，子宮頸和/或肛門直腸 GBS攜帶測試陽性，其新生兒仍然無GBS(儘管用了抗生物預防)，ad 3.低於45歲沒有臨 床疾病的成人。為了考慮是超免疫的並因而在本發明採用的篩選方法中是相關的，血清必 須與多個GBS特異性抗原反應。如本發明中使用的表達文庫應當允許所有可能抗原的表達，例如源自無乳鏈球 菌所有分泌的和表面蛋白質。細菌表面展示文庫由在細菌宿主膜的兩個挑選的外膜蛋白 質(LamB和FhuA)的呈示無乳鏈球菌一(總)套表達肽序列的細菌宿主的重組文庫表示 {Georgiou, G. , 1997} ； {Etz, H.等人，2001}。使用重組表達文庫一個優點是鑑別的超免疫 血清反應性抗原可以立即由篩選的和挑選的表達超免疫血清反應性抗原的克隆的編碼序 列的表達產生，沒有進一步的重組DNA技術或必要的克隆步驟。進一步用一或多個額外輪的篩選，分析通過根據本發明描述的程序鑑別的全套抗 原。所以，使用了被鑑別有免疫原性的個體抗體製備物或產生的抗所選肽的抗體。根據優 選實施方案，用於第二輪篩選的個體抗體製備物來源於顯示抗體滴度高於某個最低水平的 懷孕婦女和非孕成人，例如抗體滴度高於80百分數的測試人(患者或健康個體)血清，優 選地高於90百分數，尤其高於95百分數。在第二輪篩選使用這樣高滴度的個體抗體製備 物允許超免疫血清反應性抗原和其片段從無乳鏈球菌的非常有選擇性的鑑別。全面篩選過程之後，通過一系列ELISA和Western斑點試驗在第二輪篩選中測試 了挑選的抗原蛋白質以評價它們對大量的人血清收集物(最少 150健康和患者血清)的
38免疫原性，所述抗原蛋白質在原核表達系統中不能表達的情況下表達為重組蛋白質或體外 翻譯產物，或者鑑別的抗原性肽(合成產生)。個體抗體製備物(其也可是挑選的血清)允許所有超免疫血清反應性抗原最有希 望的候選物從第一輪的所有有希望的候選物中的選擇性鑑別是重要的。所以，優選地至少 10個個體抗體製備物(即來自至少10個已經遭受所選病原體感染的不同個體的抗體製備 物(例如血清))應當用於在第二輪篩選中鑑別這些抗原。當然，也可使用少於10個個體 製備物，然而，步驟的選擇性與低數量的個體抗體製備物可能不是最佳的。另一方面，如果 給定的超免疫血清反應性抗原(或其抗原片段)被至少10個個體抗體製備物，優選地至少 30個，尤其是至少50個個體抗體製備物識別，那麼超免疫血清反應性抗原的鑑別對正確鑑 別也有足夠的選擇性。當然也可以與儘可能多的個體製備物(例如與多於100或甚至與多 於1，000個)測試超免疫血清反應。所以，根據本發明的方法之超免疫血清反應抗體製備物的相關部分應當優選地至 少10個，更加優選地至少30個，尤其是至少50個個體抗體製備物。或者(或聯合地)超 免疫血清反應性抗原優選地也可用第二輪篩選中使用的至少20%，優選地至少30%，尤其 是至少40%的所有個體抗體製備物進行鑑別。根據本發明的優選實施方案，用於第二輪篩選個體抗體製備物從其製備的血清通 過它們抗無乳鏈球菌的滴度(例如抗這個病原體的製備物，例如裂解物，細胞壁組分和重 組蛋白質)進行挑選。優選地，當ELISA中全生物體(總裂解物或總細胞)用作抗原時， 挑選有總IgA滴度高於300U尤其是高於500U的和/或IgG滴度高於5，000U尤其是高於 10，000U(U =單位，從在給定稀釋度的0D4(l5nm讀數計算)的一些血清。人免疫系統產生的抗鏈球菌、並存在於人血清中的抗體是抗原蛋白質的體內表達 和它們的免疫原性的指徵。血清抗體識別的線性表位之識別能基於如4-5個胺基酸短的序 列。當然，它不是一定意味著這些短肽能夠體內誘導給定的抗體。為了那個原因，定義的表 位、多肽和蛋白質進一步地在動物(主要是小鼠)中測試它們誘導抗體內挑選蛋白質的抗 體的能力。優選的抗原位於細胞表面或被分泌，並且因而可胞外接近。期望抗細胞壁蛋白質 的抗體起多個作用抑制粘附、幹擾營養的獲得、抑制免疫逃避和促進噬菌作用{Hornef， M.等人，2002}。抗分泌蛋白質抗體對它們作為毒素或毒力組分的功能的中和是有益的。細 菌通過分泌蛋白質相互聯繫也是已知的。抗這些蛋白質之中和抗體將幹擾鏈球菌類之間或 鏈球菌內的促進生長的聯繫(cross talk)。生物信息分析(信號序列、細胞壁定位信號、跨 膜結構域)證明對於評價細胞表面定位或分泌是非常有用的。實驗室方法包括有相應表位 的抗體和蛋白質從人血清的分離，以及小鼠中抗細菌表面展示篩選挑選的(多)肽的免疫 血清的產生。這些血清然後作為下面試驗中的試劑用於第三輪篩選在不同條件下生長的 無乳鏈球菌的細胞表面染色(FACS或顯微鏡)、中和能力的測定(毒素、粘附)以及調理作 用和噬菌作用的促進(體外噬菌試驗)。為了所述目的，將細菌大腸桿菌菌落直接注射進小鼠，收集免疫血清並在相關體 外試驗中測試功能性調理或中和抗體。或者，可以使用肽或蛋白質作為底物從人或小鼠血 清純化特異性抗體。針對無乳鏈球菌的宿主防禦主要依賴調理噬菌性殺死機制。通過疫苗接種誘導高親和力的調理和中和類型的抗體幫助先天免疫系統清除細菌和毒素。這個使得根據本發明 的方法成為GBS抗原蛋白質鑑別的最佳工具。皮膚和黏膜的膜是強大的抗鏈球菌入侵的屏障。然而，一旦皮膚或粘附的膜被破 壞，第一道非適應性細胞防疫通過補體和噬菌細胞尤其是多形核白細胞(PMN)開始它的合 作作用。這些細胞能被當作清除入侵細菌的基石。因為無乳鏈球菌是主要的細胞外病原體， 主要的抗鏈球菌適應性反應來自免疫系統的體液途徑，並由三個主要機制介導調理作用 的促進、毒素的中和和粘附的抑制。相信調理作用因為它對有效噬菌作用的要求是尤其重 要的。對於有效的調理作用，為了 PMN通過IgG分子Fc片段或激活的C3b的受體的識別， 微生物表面必須用抗體和補體因子包被。調理作用之後，鏈球菌被吞噬和殺死。結合於細 菌細胞表面上的特異性抗原的抗體起附著於PMN的配體和促進噬菌作用的作用。期望結合 於粘附素和其它細胞表面蛋白質的非常一樣的抗體中和粘附以及阻止群集。本發明提供的 抗原的選擇因而非常適於鑑別將導致抗動物模型或人類中抗感染保護的那些抗原。根據此處使用的抗原鑑別方法，本發明驚人地提供了尤其如下描述的一套全面的 無乳鏈球菌新型核酸和新型超免疫血清反應性抗原和其片段。根據一個方面，本發明尤 其涉及編碼超免疫血清反應性抗原的核苷酸序列，所述序列列於序列列表中Seq ID No 1-217,435-448和463-474，以及代表超免疫血清反應性抗原的相應的編碼胺基酸序列列 於序列列表中 Seq ID No 218-434，449-462 和 475-486。本發明優選實施方案中，提供了其全長展示了與Seq ID No 14，90，157-216列 出的核苷酸序列70%相同性的核酸分子。最優選的是包含其全長與Seq ID No 14,90, 157-216列出的核酸分子至少80%或至少85%相同性的區域之核酸。在這點上，核酸分子 就其全長與Seq ID No 14，90，157-216列出的核酸分子至少90%、91 %、92%、93%、94%、 95 %或96 %相同是尤其優選的。此外，有至少97 %相同性的那些是優選的，有至少98 % 和至少99%的那些是尤其高度優選的，有至少99%或99. 5%是更加優選的，有100%相同 性是尤其優選的。另外，這點上優選實施方案是編碼基本上保留了與Seq ID No 14,90, 157-216列出的所述核酸編碼的成熟多肽相同生物功能或活性的超免疫血清反應性抗原或 其片段的核酸。如本領域已知並此處使用的相同性是通過比較序列測定的兩個或兩個以上多肽 序列或兩個或兩個以上多核苷酸序列之間的關係。本領域中，相同性也指多肽或聚核苷 酸序列之間序列相關的程度，就如在本情況下可以是這樣的序列串(strings)之間的匹配 測定的。能很容易地計算相同性。雖然有許多方法測量兩個聚核苷酸或兩個多肽序列之 間的相同性，所述術語對於技術人員是眾所周知的(例如分子生物學中的序列分析，von Heinje, G.，Academic Press，1987)。設計測定相同性的優選方法以給予測試的序列之間 最大的匹配。在電腦程式中編碼測定相同性的方法。測定兩個序列之間相同性的優選 電腦程式方法包括但不限於GCG程序包{Devereux，J.等人，1984}、BLASTP、BLASTN和 FASTA {Altschul, S.等人，1990}。根據本發明的另一方面，提供了展現與Seq ID No 1，3，5-13，15，18-25，27-31， 33-36，39-68，70-85，92-100，103-126，128-145，147，149-156，217，435-448 和 463-474 列 出的核酸序列有96%或高於96%，尤其是100%序列相同性的核酸分子。根據本發明的另一方面，提供了與核酸分子具有98 %或高於98 %，尤其是100 %序列相同性的核酸分子，所述核酸分子與Seq ID No 32，86，91，101，127列出的核酸序列相同。根據本發明的核酸分子作為第二備擇方案也可是至少基本上互補於上述第一備 擇方案的核酸的核酸分子。如此處使用地，互補是指核酸鏈經由Watson-Crick鹼基配對與 第二個核酸鏈是鹼基配對的。如此處使用地基本上互補的是指鹼基配對不發生在各個鏈所 有的鹼基而留有一定數量或百分比的未配對或錯配的鹼基。正確配對鹼基的百分比優選地 是至少70%，更加優選地80%，甚至更加優選地90%以及最優選地高於90%的任何百分 比。要注意70%配對鹼基的百分比被認為有同源性，具有這個程度配對鹼基對的雜交被認 為是嚴格的。這種嚴格雜交的雜交條件可以從分子生物學現代試驗方案(John Wiley and Sons, Inc. ,1987)獲得。更加特別地，雜交條件如下 例如在 5xSSPE，5xDenhardt' s 試劑，0. 1% SDS，100g/mL 剪切的 DNA 中在 68°C 進行的雜交 0. 2xSSC，0. 1% SDS中在42°C的中等嚴格清洗 0. lxSSC，0. 1% SDS 中在 68°C 的高嚴格清洗有50%GC含量的基因組DNA具有大約96°C的Tm。對於1 %的錯配，Tm降低大約 1°C。另外，此處描述的任何進一步的雜交條件原則上也可應用。當然，編碼與如本發明鑑別的那些相同的多肽分子之所有核酸序列分子包括任何 公開的給定編碼序列，因為遺傳密碼的簡併性可直接應用以清楚地測定編碼給定多肽分子 的所有可能的核酸分子，即使這樣簡併的核酸分子的數量可以很高。這個也可應用於給定 多肽的片段，只要在免疫接種這點上所述片段編碼適合用作例如作為主動或被動疫苗的多 肽。根據本發明的核酸分子作為第三備擇方案也能是包含了根據上面總結的根據本 發明的核酸分子第一和第二備擇方案的核酸分子至少15個鹼基的延伸的核酸。優選地，鹼 基形成了鹼基連續的延伸。然而，所述延伸由許多鹼基分開的兩個或兩個以上的基團組成， 也在本發明的範圍內。本核酸優選地由此處公開的序列至少20個，甚至更加優選地至少30個，尤其是至 少50個連續鹼基組成。由於用途的計劃區域(例如作為(PCR)引物、探針、(例如在(DNA) 晶片上的)捕獲分子等等)，很容易地優化合適的長度。優選的核酸分子含有一個或多個表 1和2中列出的推定的免疫原性胺基酸序列的至少連續15個鹼基部分，尤其是表2的有高 於10分，優選地高於20分，尤其是有高於25分的序列。尤其優選的是含有本應用的序列方 案中任何序列的DNA序列連續部分的核酸，所述核酸與公開的無乳鏈球菌株NEM316 (ATCC 12403)基因組({Glaser，P.等人，2002} ；GenBank登陸號AL732656)和/或任何其它公開 的無乳鏈球菌基因組序列或其部分，尤其是血清型V的2603 V/R(A909)株{Tettelin，H.等 人，2002}) ；GenBank登陸號AE009948)，顯示了一或多個，優選地多於2個，尤其是多於5個 不相同的核酸殘基。尤其優選的不相同的核酸殘基是導致不同胺基酸殘基的殘基。優選地， 核酸序列編碼與上面提到的公開的無乳鏈球菌對應物具有至少1個，優選地至少2個，優選 地至少3個不同胺基酸殘基的多肽。這樣分離的多肽也是優選的，所述多肽是此處例如序 列列表中提到的蛋白質(或全蛋白質)的片段，具有至少6、7或8個胺基酸殘基並由這些核酸編碼。根據本發明的核酸分子作為第四備擇方案也可是在嚴格雜交條件下退火於根據 上面總結的第一、第二和第三備擇方案的本發明任何核酸的核酸分子。嚴格雜交條件一般 是此處描述的那些。最後，根據本發明的核酸分子作為第五備擇方案也可是由於遺傳密碼的簡併性否 則能雜交根據上面總結的第一、第二、第三和第四備擇方案的根據本發明任何核酸分子的 任何核酸分子之核酸分子。這種核酸分子指的是優選地根據本發明的核酸編碼根據本發明 的超免疫血清反應性抗原或其片段的事實。這種核酸對於根據本發明的核酸分子的檢測， 並因而對例如無乳鏈球菌的各個微生物的診斷以及與這種微生物有關的任何疾病或疾病 狀態尤其有用。優選地，雜交將在如上面描述的第四備擇方案描述的嚴格條件下發生或進 行。如此處使用的核酸分子一般指的是任何核酸分子或脫氧核糖核酸分子，可以是非 修飾的RNA或DNA或修飾的RNA或DNA。因而，例如，如此處使用的核酸分子在其它之中指 的是單和雙鏈DNA，單和雙鏈RNA的混合物的DNA，單和雙鏈區域的混合物的RNA，包含可以 是單鏈、或更加一般地雙鏈、或三鏈、或單和雙鏈區域混合物的DNA和RNA的雜交分子。另 外，如此處使用的核酸分子指的是包含RNA、或者DNA、或者RNA和DNA的三鏈區域。這樣區 域的鏈可以來自相同的分子或來自不同分子。這些區域可以包括所有的一個或多個分子， 但更一般地只涉及一些分子的區域。一個三螺旋區域的分子通常是寡核苷酸。如此處使用 地，術語核酸分子包括如上面描述的含有一個或多個修飾鹼基的DNA或RNA。因而，有為了 穩定性或為了其它原因而修飾的骨架的DNA或RNA是此處術語所指的「核酸分子」。另外， 包含例如次黃嘌呤核苷的異常鹼基或例如三苯甲基化鹼基的修飾鹼基的DNA或RNA(只提 及兩個例子)是如此處使用的術語的核酸分子。將理解已經對有本領域技術人員已知的很 多有用目的之DNA和RNA進行非常多種的修飾。如此處採用的術語核酸分子包含這樣化學、 酶或代謝修飾形式的核酸分子，以及病毒和其中包括簡單和複雜細胞的細胞特徵的化學形 式的DNA和RNA。術語核酸分子也包含通常指的是寡核苷酸的短核酸分子。「多核苷酸」和 「核酸」或「核酸分子」通常此處交替使用。本發明提供的核酸分子也包括眾多的獨特的片段，比無乳鏈球菌編碼區域的序列 列表中列出的核酸分子序列更長和更短，能通過標準克隆方法產生。為了是獨特的，片段必 須有足夠的大小使其能從其它已知的核酸序列中區分出來，最容易通過將任何挑選的無乳 鏈球菌片段與例如GenBank的計算機資料庫中的核苷酸序列比較而測定。另外，能對本發明包含的核酸分子和多肽進行修飾。例如，能進行不影響核酸編碼 的多肽的核苷酸替代，因而編碼超免疫血清反應性抗原或其片段編碼的任何核酸分子也包 含在本發明內。此外，使用例如標準克隆技術的標準技術能將編碼本發明提供的超免疫血清反應 性抗原或其片段的任何核酸分子功能性地聯接於任何期望的調節序列，不管是無乳鏈球菌 調節序列或異源性調節序列、異源性先導序列、異源性標記序列或產生融合蛋白的異源性 編碼序列。本發明的核酸分子可以是例如mRNA或cRNA的RNA形式，或者包括例如通過克隆 得到的或化學合成技術產生的cDNA和基因組DNA或其組合的DNA形式。DNA可以是三鏈、雙鏈或單鏈。單鏈DNA可以是編碼鏈，也已知為正義鏈，或者它可以是非編碼鏈，也指的是 反義鏈。本發明還涉及此處上面描述的核酸分子的變異體，所述變異體編碼具有序列列表 中列出的推算的無乳鏈球菌胺基酸序列的超免疫血清反應性抗原和其片段的片段、類似物 和衍生物。核酸分子的變異體可以是天然發生的變異體，例如天然發生的等位基因變異體， 或者它可以是不知道是天然發生的變異體。可以通過誘變技術製造核酸分子這樣非天然發 生的變異體，包括應用於核酸分子、細胞或生物體的那些。在這點的變異體之中，變異體是不同於前面提到的核酸分子，差別在於有核苷酸 替代、刪除或增加的核酸。替代、刪除或增加可包括一個或多個核苷酸。可在編碼或非編碼 區或者這兩個區域改變變異體。編碼區的改變可產生保守或非保守胺基酸替代、刪除或增 加。優選的是編碼變異體、類似物、衍生物或片段或者片段的變異體、類似物或衍生物的核 酸分子，所述核酸分子具有如序列列表中列出的無乳鏈球菌序列，其中以任何的聯合形式 少數、5至10個、1至5個、1至3個、2個、1個或沒有胺基酸被替代、刪除或增加。這些之中 尤其優選的是沉默替代、增加或刪除，它們不改變序列列表中列出的無乳鏈球菌多肽的特 性和活性。在這點也尤其優選的是保守替代。根據本發明的肽和片段也包括修飾的表位，其中優選地根據例如{Tourdot，S.等 人，2000}中公開的法則修飾或替代給定的表位的一個或兩個胺基酸，以及編碼這樣修飾的 表位的核酸序列。很清楚根據本發明的表位涵蓋了通過改進、保存或至少不顯著阻礙表位的T細胞 激活能力的胺基酸交換而衍生於本表位的表位。所以，本表位也涵蓋了不含有源於無乳鏈 球菌的原始序列但是激發相同或優選地改進的T細胞反應的表位。這些表位指的是「不規 則變化的」；它們需要具有對MHC/HLA分子相似的或優選地對更大的親和力，並且它們需要 以相似或優選地更強的方式刺激指向原始表位的T細胞受體(TCR)的能力。能通過合理設計獲得不規則變化的表位，即考慮如例如{Rammensee，H.等人， 1999}描述的單個殘基對結合於MHC/HLA的作用，聯合可能與TCR相互作用的殘基的系統交 換以及用指向原始表位的T細胞測試得到的序列。這樣的設計對於的本領域技術人員是可 能而無需過度的試驗。另一個可能性包括用指向原始表位的T細胞對肽庫的篩選。優選的方式是合成肽 庫的位點掃描。這樣的方法已經在例如{Hemmer，B.等人，1999}有詳細描述並且此處給予參考。作為本衍生胺基酸序列代表的表位或不規則變化的表位的備擇方案，也能採用模 仿這些表位的物質，例如「肽模仿物」或「回復-反_肽」(retro-inverso-p印tides)。改進的表位設計的另一方面，是帶有增加其刺激T細胞的能力的物質之製劑或修 飾。這些包括T輔助細胞表位、脂質或脂質體或如W001/78767中描述的優選的修飾。增加表位T細胞刺激能力的另一方法是帶有免疫刺激物質的製劑，例如象白細 胞介素-2、-7、-12、-18、I和II型幹擾素(IFN)的細胞因子或化學因子，尤其是IFN-Y、 GM-CSF、TNF- a、flt3 配體等。另外如此處討論地，關於本發明的核酸分子試驗，例如如上面討論的本發明的核 酸分子可以用作RNA、cDNA和基因組DNA的雜交探針以分離編碼本發明多肽的全長cDNA和基因組克隆，以及分離與本發明核酸分子具有很高的序列相似性的其它基因的cDNA和基 因組克隆。這樣的探針一般包含至少15個鹼基。優選地，這樣的探針將具有至少20個、至 少25個或至少30個鹼基，可以具有至少50個鹼基。特別優選的探針將具有至少30個鹼 基，將具有50個或更少的鹼基，例如30、35、40、45或50個鹼基。例如，使用已知的DNA序列通過篩選相關文庫分離本發明的核酸分子的編碼區域 以合成寡核苷酸探針。具有互補於本發明基因序列的序列的標記寡核苷酸然後用於篩選 cDNA、基因組DNA或mRNA文庫以測定探針雜交於文庫的哪些成員。如此處進一步討論地，關於核酸分子試驗，本發明的核酸分子和多肽可以用作開 發尤其是人類疾病的疾病的治療和診斷的試劑和物質。作為寡核苷酸的本發明的核酸分子能用於此處描述的方法中，但是優選地是PCR， 以測定此處鑑別的無乳鏈球菌基因是否全部或部分存在於例如血液的感染組織和/或在 其中轉錄。已經認識到這樣的序列也將在病原體已經達到的感染階段和感染類型的診斷有 用途。為了這個和其它的目的，可以使用如此處描述的包含至少一個根據本發明的核酸的 陣列。根據本發明的核酸分子可以用於核酸分子和含有這些核酸的生物體或樣品的檢 測。優選地這樣的檢測是為了診斷，更加優選地是為了與無乳鏈球菌的存在或豐度相關的 或相聯的疾病的診斷。感染了無乳鏈球菌的特別是哺乳動物尤其是人的真核細胞(此處也是「個體」)是 可以鑑別的，方法是通過各種技術在DNA水平檢測的根據本發明的任何核酸分子的檢測。 能夠獲得為了從其它生物體區分無乳鏈球菌的優選的候選核酸分子。本發明提供了診斷源自無乳鏈球菌感染的疾病的方法，包含從個體分離的或來源 於個體的樣品測定具有序列列表中列出的核酸分子序列的核酸分子表達水平的增加。能使 用本領域中眾所周知的核酸分子定量的方法測量核酸分子的表達，例如PCR、RT-PCR、RNaSe 保護、Northern斑點、其它的雜交方法和此處描述的陣列。如此處使用的分離的是指「通過人工」從其天然狀態分離；即，如果它天然發生，它 將被改變或從其原始環境去除，或兩個都有可能。例如，天然存在於活的生物體的天然發生 的核酸分子或肽在其天然狀態是不「分離的」，但是從其天然狀態的共存物質中分離的相同 的核酸分子或多肽是「分離的」，如此處採用的術語。作為分離的部分或下面的分離，例如為 了誘變形成融合蛋白質以及為了宿主中的增殖或表達，這樣的核酸分子能連接於例如DNA 的其它的核酸分子。分離的核酸分子單獨或連於例如載體的其它核酸分子能被引入培養的 或全生物體的宿主細胞。引入培養的或全部生物體的宿主細胞，這樣的DNA仍然將是分離 的，如此處使用的術語，因為它們將不是它們天然發生的形式或不在它們天然發生的環境 中。相似地，核酸分子和多肽可以發生在組合物中，例如介質製劑、核酸分子或多肽引入例 如細胞內的溶液、化學或酶反應的組合物或溶液，例如，它們不是天然發生的組合物，在此 處採用的那個術語的意義之內，在那裡仍然是分離的核酸分子或多肽。根據本發明的核酸可以是化學合成的。或者，核酸能通過本領域的技術人員已知 的方法從無乳鏈球菌中分離。根據本發明的另一方面，通過使用此處描述的抗原鑑別方法提供了一套全面的新 型超免疫血清反應性抗原和其片段。本發明優選的實施方案中，提供了包含此處描述的任何一個核酸分子編碼的胺基酸序列的超免疫血清反應性抗原及其片段。本發明的另一優 選實施方案中，提供了包含選自如Seq ID No 231，307，374-433中表示的多肽序列之氨 基酸序列的一套新型超免疫血清反應性抗原及其片段。本發明另一優選的實施方案中， 提供了包含選自 Seq ID No 218，220，222-230，232，235-242，244-248，250-253，256-285， 287-302，309-317，320-343，345-362，364，366-373，434，449-462 和 475-486 中表示的多肽 序列之胺基酸序列的一套新型超免疫血清反應性抗原及其片段。本發明另一優選實施方案 中，提供了包含選自Seq ID No 249，303，308，318，344中表示的多肽序列之胺基酸序列的 一套新型超免疫血清反應性抗原及其片段。
如本發明提供的超免疫血清反應性抗原及其片段包括序列列表中列出的任何多 肽，以及如下的多肽具有與序列列表中列出的多肽至少70%相同性，優選地與序列列表 中列出的多肽至少80 %或85 %相同性，更加優選地與序列列表中列出的多肽至少90 %相 似性(更加優選地至少90%相同性)以及仍然更加優選地與序列列表中列出的多肽至 少95%、96%、97%、98%、99%或99. 5%相似性(仍然更加優選地至少95%、96%、97%、 98%、99%或99. 5%相同性)，也包括這樣的多肽的部分，所述多肽一般有含有4個胺基酸， 更加優選地至少8個，仍然更加優選地至少30個，仍然更加優選地至少50個胺基酸，例如 4，8，10，20，30，35，40，45或50個胺基酸的這樣的多肽部分。本發明還涉及這些超免疫血清反應性抗原及其片段的片段、類似物和衍生物。術 語「片段」、「衍生物」和「類似物」當指的是其胺基酸序列列於序列列表中的抗原時，是指基 本上保留了與這樣的超免疫血清反應性抗原及其片段相同的或相似的生物功能或活性的 多肽。超免疫血清反應性抗原及其片段的片段、衍生物或類似物可以是1)其中一個或 多個胺基酸殘基被保守或非保守胺基酸殘基(優選地保守的胺基酸殘基)替代的一種，並 且這樣替代的胺基酸殘基可以是或可以不是遺傳密碼編碼的一個，或者2)其中一個或多 個胺基酸殘基包括取代基團的一種，或者3)其中成熟的超免疫血清反應性抗原及其片段 與例如增加超免疫血清反應性抗原及其片段半衰期的化合物(例如，聚乙二醇)的另一種 化合物融合的一種，或者4)其中額外的胺基酸融合於成熟的超免疫血清反應性抗原及其 片段的一種，例如先導或分泌序列或用於成熟超免疫血清反應性抗原及其片段的純化的序 列或前蛋白質序列。這樣的片段、衍生物和類似物認為在本領域技術人員此處教義的範圍 內。本發明也涉及不同的無乳鏈球菌分離物的抗原。基於此處公開的核酸和胺基酸 序列可以很容易地分離這樣的同源物。至今有9個截然不同的血清型，分型基於血清型特 異性抗血清。對於每一個血清型能相應地測定任何抗原的存在。另外，測定如膿性鏈球菌 (S. pyogenes) sic基因{Hoe，N.等人，2001}描述的各種血清型中特定抗原的變異性是可能 的。各種血清型對不同GBS感染的作用在不同年齡組和地理區域是不同的。期望最有價值 的保護抗原在各種臨床株之中是保守的是一個很重要的方面。在這點序列列表中列出的超免疫血清反應性抗原及其變異體、類似物、衍生物和 片段，以及片段的變異體、類似物和衍生物在本發明尤其優選的實施方案中。額外地，包含 這樣的超免疫血清反應性抗原及其變異體、類似物、衍生物和片段以及片段的變異體、類似 物和衍生物的融合多肽也包含在本發明中。使用標準技術能很容易地製造這樣的融合多肽和蛋白質以及編碼它們的核酸分子，包括生產和表達編碼融合蛋白質的重組聚核酸的標準 重組技術。由於保守胺基酸替代而與參比不同的那些在優選變異體之中。這樣的替代是多肽 中給定胺基酸被另一個同樣特性的胺基酸替代的那些。一般視為保守替代是脂肪性胺基酸 Ala, Val, Leu和lie中互相的取代；羥基殘基Ser和Thr的交換，酸性殘基Asp和Glu的 交換，醯胺殘基Asn和Gin之間的替代，鹼性殘基Lys和Arg的交換以及芳香基殘基Phe和 Tyr之間的取代。在這點上進一步尤其優選的是具有序列列表中列出的任何多肽之胺基酸序列的 變異體、類似物、衍生物和片段，以及片段的變異體、類似物、衍生物，其中幾個、少數、5至 10個、1至5個、1至3個、2個、1個或沒有胺基酸殘基以任何聯合形式被替代、刪除或增加。 這些之中尤其優選的是不改變本發明多肽的特性和活性的沉默替代、增加和刪除。在這點 上也尤其優選的是保守替代。最高度優選的是具有序列列表中列出的沒有替代的胺基酸序 列的多肽。優選地以分離的形式提供本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段，優選地是純 化為同質的。包含具有序列列表中列出的胺基酸序列的多肽的片段以及序列列表中列出的多 肽的變異體和衍生物的片段也在本發明優選實施方案中。在這點上，片段是具有與前面提到的超免疫血清反應性抗原及其片段的部分但不 是所有胺基酸序列完全相同的胺基酸序列的多肽及其變異體或衍生物、類似物、片段。這樣 的片段可以是「游離的」，即不是其它胺基酸或多肽的部分或者與其融合，或者它們也包含 在它們形成的一部分或區域的更大的多肽內。本發明這個方面也優選的是特徵在於本發明 多肽的結構或功能屬性的片段，即包含本發明多肽的a-螺旋和a _螺旋形成區域、折 疊和摺疊形成區域、折轉和折轉形成區域、捲曲和捲曲形成區域、親水區域、疏水區域、 a兩性區域、0兩性區域、可曲(flexible)區域、表面形成區域、底物結合區域和高抗原指 示區域的片段以及這樣的片段的聯合。優選的區域是介導本發明超免疫血清反應性抗原及 其片段的活性的那些。在這點上最高度優選的是具有本發明超免疫血清反應性抗原及其片 段的化學、生物或其它活性的片段，包括有相似活性或改進活性或有降低的非期望活性的 那些。尤其優選的是包含酶受體或結構域的片段，所述酶受體或結構域賦予無乳鏈球菌存 活或造成人類疾病的能力所必須的功能。進一步優選的多肽片段是包含或含有尤其是人的 動物中抗原或免疫原性決定簇的那些。抗原片段定義為鑑別的抗原的片段，對於其本身它是抗原的或者當提供為半抗原 時可以製成抗原的。所以，本發明實現了顯示一個或(對於更長的片段)只有少數胺基酸 交換的抗原或抗原片段，假設在交換時沒有嚴重地破壞有胺基酸交換的這樣的片段的抗原 能力，即適於引發接受這個抗原免疫接種的個體的合適免疫反應以及用來自個體血清的個 體抗體製備物鑑別。高免疫反應抗原這樣的片段的優選實例選自包含表1A的「推定的免疫原性氨基 酸」欄和「鑑別的免疫原性區域的位置」的胺基酸序列的多肽，尤其是包含如下胺基酸的多 月太Seq ID No 218 的 4-20，35-44，65-70，73-87，92-98，112-137，152-161，177-186， 193-200，206-213，229-255，282-294，308—313，320—326，349—355，373—384，388—406，
46420-425 和 115-199 ;Seq ID No 219 的 5-24，35-41，44-70，73-89，103-109，127-143， 155-161，185-190，192-207，212-219，246-262，304-336，372-382，384-393，398-407， 412-418,438-444，1-75,76-161 和 164-239 ；Seq ID No 220 的 4-10，16-58，60-71，77-92， 100-126，132-146，149-164，166-172，190-209，214-220，223-229，241-256，297-312， 314-319,337-343,351-359,378-387,398-418,421-428,430-437,440-448,462-471, 510-519,525-536,552-559,561-568,573-582,596-602,608-630,637-649,651-665, 681-702,714-732,739-745,757-778,790-805,807-815,821-829,836-842,846-873, 880-903，908-914，916-923，931-940，943-948，956-970，975-986，996-1015，1031-1040， 1051-1069，1072-1095，1114-1119，1130-1148，1150-1157，1169-1176，1229-1238 和 802-812 ；Seq ID No221 的 5-12，14-26，35-47，52-67，72-78，83-98，121-141，152-159， 163-183，186-207，209-257，264-277，282-299，301-309，312-318，324-339，358-368， 372-378，387-397，425-431 和 46-291 ；Seq ID No 222 的 29-38，44-64，70-76，78-87， 94-100,102-112,119-134,140-149,163-173,178-186,188-194,207-234,247-262, 269-290 和 73-92 ；SeqID No 223 的 10-28，36-63，77-87，103-119，127-136，141-169， 171-183,195-200,207-232,236-246,251-265,268-283,287-297,314-322,335-343, 354-363,384-390,405-411,419-436,443-455,467-473,480-513,518-529,550-557, 565-585,602-608,616-625,632-660,665-677,685-701,726-736,738-747,752-761, 785-796，801-813，838-853，866-871 和 757-774 ;Seq ID No 224 的 31-38，61-66，74-81， 90-115，123-145，154-167，169-179，182-193，200-206，238-244，267-272 和 235-251 ；Seq IDNo 225 的 19-25，38-54，56-64，66-72，74-92，94-100，116-129，143-149，156-183， 204-232，253-266，269-275，294-307 和 241-313 ；Seq ID No 226 的 5-34，50-56，60-65， 74-85,89-97,108-119，159-165，181-199，209-225，230-240，245-251，257-262，274-282， 300-305 和 64-75 ;Seq ID No 227 的 5-13，16-21，27-42，45-52，58-66，74-87，108-114， 119-131 和 39-51 ；Seq ID No 228 的 6-23，46-54，59-65，78-84，100-120，128-133， 140-146，159-165，171-183，190-204，224-232，240-248，250-259，274-280，288-296， 306-315 和 267-274 ;Seq ID No 229 的 5-12，15-24，26-36，42-65，68-80，82-104，111-116， 125-144,159-167,184-189,209-218,235-243,254-265,269-283,287-300,306-316, 318-336，338-352，374-392 和 162-174 ;Seq ID No 230 的 30-42，45-54 和 25-37 ;Seq ID No 231 的 10-30，53-59，86-95，116-130，132-147，169-189，195-201，212-221，247-256， 258-265,278-283,291-298,310-316,329-339,341-352,360-367,388-396，398-411， 416-432，443-452，460-466，506-512，515-521，542-548 和 419-431 ;Seq ID No 232 的 4-27，30-53，60-67，70-90，92-151，159-185，189-195，198-210，215-239和 173-189 ；Seq ID No 233 的 4-26，41-54，71-78，116-127，140-149，151-158，161-175，190-196,201-208， 220-226,240-252,266-281,298-305,308-318,321-329,344-353, 372-378, 384-405, 418-426，429-442，457-463，494-505，514-522 和 174-188 ;Seq ID No 234 的 17-25，27-39， 61-67,81-89,99-110,120-131，133-139，147-161，167-172，179-185，192-198，203-213， 226-238，243-258，261-267，284-290，296-307，311-328，340-352，356-371 和 239-256 ；Seq ID No 235 的 8-30，40-49，67-80，114-123，126-142，152-162，188-194 和 57-70 ;Seq ID No 236 的 4-23，28-34，36-47，50-61，76-81，89-94，96-104，112-119，126-146，155-181，195-200，208-214，220-229，244-260，263-276，282-288，292-300，317-323，336-351， 353-359,363-375,382-399,415-432,444-455,458-471,476-481,484-492,499-517, 522-529，535-541，543-568，572-584，586-600，607-617，626-637，656-675 和 282-297 ；Seq ID No 237 的 6-24，30-35，38-45，63-91，134-140，146-160，167-188，214-220，226-234， 244-250,260-270,286-301,316-329,340-371,429-446,448-459,474-481,485-491, 512-526，537444，550-565，573-583，596-613，621-630，652-658 和 87-97 ;Seq ID No 238 的 8-20，26-48，56-67，76-8 6，94-109，115-121，123-129，143-160，178-186，191-198， 201-208，221-236，238-244，260-268 和 237-247 ；Seq ID No 239 的 4-40，42-57，73-87， 98-117, 126-135, 150-156, 166-174, 196-217, 231-236,248-258, 276-284,293-301,
307-313,339-347, 359-365,375-387,395-402,428-440,445-456,485-490,497-505, 535-541，547-555，610-625，648-656，665-671 和 448-528 ;Seq ID No 240 的 10-18，39-45， 51-61,80-96,98-106,110-115,158-172，174-183，191-200，220-237，249-255，274-289，
308-324，331-341，372-381，384-397，405-414和 322-338 ;Seq ID No 241 的 30-36，38-56， 85-108，134-147，149-160，163-183，188-201，206-211，219-238，247-254 和 5-13 ；Seq ID No242 的 11-40,98-103,110-115，133-145，151-159，172-179，192-201，204-212，222-228， 235-245,258-268,283-296,298-309,322-329,342-351,354-362,372-378,385-393, 407-418,495-516 和 1-148 ；Seq ID No 243 的 5-19，21-36，73-94，112-119，122-137， 139-145，152-167，184-190，198-204，208-224，249-265，267-281，299-304，309-317， 326-333，356-364，368-374，381-389，391-414，419-425，430-435 和 113-140 ；Seq ID No 244 的 45-54，59-67，78-91 和 15-23 ；Seq ID No 245 的 11-22，33-47，52-80，88-112， 124-129 和 6-25 ；Seq ID No 246 的 26-41，51-63，80-89，93-115，150-163，187-193， 220-237,240-249,286-294,296-306,316-329,345-353,361-370,407-425,428-437, 474-482,484-494,504-517,533-541,549-558,595-613,616-625,660-668,673-685, 711-726,736-744,749-761,787-802,812-820,825-837,863-878,888-896,901-913, 939-954，964-972，977-989，1003-1008，1016-1022，1028-1034，1041-1053，1059-1074， 1101-1122，420-511 和 581-704 ；Seq ID No247 的 18-25，27-55，71-83，89-95，102-113， 120-146，150-156，174-185 和 159-175 ；Seq ID No 248 的 24-30，38-56，63-68，87-93， 136-142，153-164，183-199，213-219，226-234，244-261，269-278，283-289，291-297， 320-328, 330-336, 340-346,348-356,358-366,382-387,401-408,414-419,449-455, 468-491,504-512,531-537,554-560,597-608,621-627,632-643,650-662,667-692, 703-716，724-737，743-758，783-794，800-818，846-856 和 806-884 ；Seq IDNo 249 的 4-14， 21-39,86-92,99-107,121-131，136-144，147-154，158-166，176-185，193-199，207-222， 224-230 和 117-136 ；Seq IDNo 250 的 65-76，85-97，103-109，115-121，125-146，163-169，
196-205，212-219，228-237，241-247，254-262，269-288，294-303，305-313，328-367， 395-401，405-412，418-429，437-447，481-488，506-513，519-524，530-541，546-557 和 266-284 ；Seq ID No 251 的 5-14，37-42，49-71，78-92，97-112，127-136，147-154， 156-163，186-198，216-225，233-243，248-253，295-307，323-332，359-366，368-374， 380-398 和 194-223 ；Seq ID No 252 的 4-11，33-39，45-72，100-113，119-129，136-144， 169-175，177-185，200-208，210-219，262-276，278-297，320-326，336-344，347-362，381-394,443-453 和 438-454 ；Seq ID No 253 的 4-29，31-52，55-61，95-110，138-158， 162-171,179-187,202-229,239-248,251-256,262-267,269-285,304-310,351-360, 362-368，381-388，415-428，435-440，448-458 和 161-178 ;Seq ID No 254 的 4-17，19-28， 32-43,47-59,89-110,112-126,128-134，140-148，152-161，169-184，191-204，230-235， 255-264，328-338，341-347，401-409，413-419，433-441，449-458，463-468，476-482， 486-492，500-506，529-545 和 305-381 ；Seq IDNo 255 的 10-29，38-45，53-61，134-145， 152-160，163-170，202-208，219-229，248-258，266-275，282-288，315-320，328-334， 377-385,392-402,418-424,447-453,460-471,479-487,491-497,500-507,531-537, 581-594,615-623,629-635,644-652,659-666,668-678,710-717,719-728,736-741, 747-760，766-773，784-789，794-800，805-817，855-861，866-887 和 698-715 ；Seq ID No 256 的 16-26，29-37，44-58，62-68，74-80，88-95，97-120，125-144，165-196 和 58-72 ；Seq ID No 257 的 14-21，23-46，49-60，63-74，78-92，96-103，117-129，134-161，169-211， 217-231，239-248，252-281，292-299，313-343 和 243-257 ;Seq ID No 258 的 11-27，46-52， 67-72，76-84，91-112，116-153，160-175，187-196，202-211，213-220 和 43-76 ；Seq ID No 259 的 5-29，37-56，78-86，108-118，152-161 和 120-130 ;Seq ID No 260 的 8-14，19-41， 52-66，75-82，87-92，106-121，127-133，136-143，158-175，180-187，196-204，221-228， 239-245, 259-265, 291-306, 318-323,328-340,352-358,361-368,375-381,391-399, 411-418，431-442，446-455，484-496，498-510，527-533，541-549，558-565，575-585， 587-594，644-655，661-668，671-677 和 184-196 ；Seq ID No 261 的 4-22，29-38，55-62， 75-81,102-107,110-134,143-150,161-167,172-179,191-215,223-233,241-247, 251-264，266-272，288-309，340-352，354-366，394-402，414-438 和 198-218 ;Seq ID No 262 的 24-44，49-70，80-91，105-118，128-136，140-154 和 77-92 ;Seq ID No 263 的 5-22， 31-36，41-47，67-74，83-90，105-122，135-143，160-167 和 118-129 ；Seq ID No 264 的 4-25,33-73,81-93,96-106,114-120,122-128，130-172，179-208，210-241，251-283， 296-301 和 92-100 ;Seq ID No 265 的 14-24，29-38，43-50，52-72，86-97，101-107， 110-125，127-141，145-157，168-175，177-184，186-195，205-226，238-250，255-261， 284-290,293-304,307-314,316-323,325-356,363-371,383-390,405-415,423-432, 442-454,466-485,502-511,519-527,535-556,558-565,569-574,612-634,641-655, 672-686,698-709,715-722,724-732,743-753,760-769,783-792,818-825,830-839, 842-849, 884-896, 905-918,926-940,957-969,979-1007,1015-1021,1049-1057 禾P 336-349 ；Seq ID No 266 的 6-16，26-31，33-39，62-73，75-85，87-100，113-123，127-152， 157-164，168-181，191-198，208-214，219-226，233-254，259-266，286-329 和 181-195 ；Seq ID No 267 的 4-13，32-39，53-76，99-108，110-116，124-135，137-146，149-157，162-174， 182-190，207-231，242-253，255-264，274-283，291-323，334-345，351-360，375-388， 418-425，456-474，486-492，508-517，520-536，547-560，562-577，31-45 和 419-443 ；Seq ID No 268 的 15-26，30-37，42-49，58-90，93-99，128-134，1 47-154，174-179，190-197， 199-205,221-230,262-274,277-287,300-314,327-333,343-351,359-377, 388-396, 408-413，416-425，431-446 和 246-256 ；Seq ID No 269 的 5-26，34-42，47-54，61-67， 71-104,107-115,131-138,144-153,157-189,196-202,204-210,228-245,288-309,316-329,332-341,379-386,393-399,404-412,414-421,457-468,483-489,500-506,508-517,523-534,543-557,565-580,587-605,609-617,619-627,631-636,640-646, 662-668,675-682,705-710,716-723,727-732,750-758,784-789,795-809,869-874, 14-138，166-286，372-503，674-696 和 754-859 ；Seq ID No 270 的 5-17，32-38，40-47， 80-89,113-119,125-137,140-154,157-163,170-177,185-199,213-225,228-236, 242-248,277-290,292-305,323-333,347-353,364-370,385-394,399-406,423-433, 441-451，462-474，477-487 和 116-124 ；Seq ID No 271 的 7-16，18-30，32-49，53-61， 63-85,95-101,105-115，119-134，143-150，159-178，185-202，212-229，236-250，254-265， 268-294 和 63-72 ；Seq ID No 272 的 4-12，19-47，73-81，97-103，153-169，188-198， 207-213,217-223,236-242,255-265,270-278,298-305,309-317,335-347,354-363,
373-394，419-424，442-465，486-492，500-507，542-549，551-558，560-572，580-589， 607-614,617-623,647-653,666-676,694-704,706-714,748-754,765-772,786-792, 795-806 和 358-370 ；Seq IDNo 273 的 18-28，30-38，40-46，49-55，69-78，82-98，104-134， 147-153, 180-190，196-202，218-236，244-261，266-273，275-286，290-295，301-314， 378-387，390-395，427-434 和 290-305 ；Seq IDNo 274 的 4-13，20-31，39-51，54-61，69-84， 87-105，117-124 和 108-125 ;Seq ID No 275 的 24-34，43-54，56-66，68-79 和 50-69 ;Seq ID No 276 的 5-43,71-77，102-131,141-148，150-156，159-186，191-207,209-234， 255-268, 280-286, 293-299,317-323,350-357,363-372,391-397,406-418,428-435,
455-465,484-497,499-505,525-531,575-582,593-607,621-633,638-649,655-673, 684-698,711-725,736-741,743-752,759-769,781-793,813-831,843-853,894-905, 908-916，929-946，953-963，970-978，1001-1007，1011-1033，165-178 和 818-974 ；Seq ID No 277 的 16-44，63-86，98-108，185-191，222-237，261-274，282-294，335-345，349-362，
374-384，409-420，424-430，440-447，453-460，465-473，475-504，522-534，538-551， 554-560,567-582,598-607,611-619,627-640,643-653,655-661,669-680,684-690, 701-707,715-731,744-750,756-763,768-804,829-837,845-853,855-879,884-890, 910-928，77-90，144-212，279-355，434-536，782-810 和 875-902 ;Seq ID No 278 的 4-22， 29-41，45-51，53-66，70-77，86-95，98-104，106-124，129-135，142-151，153-161，169-176， 228-251，284-299，331-337，339-370，380-387，393-398，406-411，423-433，440-452， 461-469, 488-498,501-516,523-530,532-559,562-567,570-602,612-628,630-645, 649-659，666-672，677-696，714-723，727-747 和 212-227 ；Seq IDNo 279 的 4-9,17-31, 35-41,56-61,66-75，81-87，90-124，133-138，149-163，173-192，213-219，221-262， 265-275,277-282,292-298,301-307,333-346,353-363,371-378,419-430,435-448，
456-469，551-570，583-599，603-612和 275-291 ;Seq ID No 280 的 28-34，53-58，72-81， 100-128，145-154，159-168，172-189，217-225，227-249，256-263，299-309，322-330， 361-379,381-388,392-401,404-417,425-436,440-446,451-464,469-487,502-511, 543-551，559-564，595-601，606-612，615-626，633-642，644-650，664-670，674-684， 692-701,715-723,726-734,749-756,763-771,781-787,810-843,860-869,882-889, 907-917,931-936,941-948,951-958,964-971,976-993,1039-1049,1051-1065, 1092-1121，1126-1132，1145-1151，1158-1173，1181-1192，1194-1208，1218-1223，1229-1243,1249-1254,1265-1279,1287-1297,1303-1320,1334-1341,1343-1358, 1372-1382,1406-1417,1419-1425,1428-1434,1441-1448,1460-1473,1494-1504, 1509-1514,1529-1550,654-669 和 1400-1483 ；Seq IDNo 281 的 10-16，20-25，58-65， 97-109,118-132,134-146,148-155,186-195,226-233,244-262,275-284,295-310, 317-322,330-339,345-351,366-375,392-403,408-415,423-430,435-444,446-457, 467-479,486-499,503-510,525-537,540-585,602-612,614-623,625-634,639-645, 650-669，700-707，717-724，727-739，205-230 和 733-754 ;Seq ID No 282 的 5-22，37-43， 72-81，105-113，128-133，148-160，188-194，204-230，238-245，251-257 和 194-213 ；Seq IDNo 283 的 16-21，35-41，56-72，74-92，103-109 和 62-68 ;Seq IDNo 284 的 4-15，17-82， 90-104，107-159，163-170，188-221，234-245，252-265 和 220-235 ；Seq ID No 285 的 16-22，36-46，61-75，92-107，113-121，139-145，148-160 和 30-42 ;Seq ID No 286 的 4-12， 20-26，43-49，55-62，66-78，121-127，135-141，146-161，164-170，178-189，196-205， 233-238，269-279，288-318，325-332，381-386，400-407 和 328-346 ；Seq ID No 287 的 5-12，31-49，57-63，69-79，89-97，99-114，116-127，134-142，147-154，160-173，185-193， 199-204，211-222，229-236，243-249，256-274 和 58-68 ;Seq ID No 288 的 10-20，28-34， 39-53，68-79，84-90，99-106 和 73-79 ；Seq ID No 289 的 14-37，45-50，61-66，77-82， 93-98,109-114,125-130,141-146,157-162,173-178,189-194,205-210,221-226, 237-242，253-258，269-274，285-290，301-306，316-332，349-359，371-378，385-406， 34-307 和 312-385 ；Seq ID No 290 的 4-10，17-38，50-85，93-99，109-116，128-185， 189-197，199-210，223-256，263-287，289-312，327-337，371-386，389-394，406-419， 424-432，438-450，458-463，475-502，507-513，519-526，535-542，550-567 和 361-376 ；Seq IDNo 291 的 10-39,42-93，100-144，155-176，178-224，230-244，246-255，273-282， 292-301，308-325，332-351，356-361，368-379，386-393，400-421 和 138-155 ；Seq ID No 292 的 5-11，17-34,40-45，50-55，72-80，101-123，145-151，164-172，182-187，189-195， 208-218,220-241,243-252,255-270,325-331,365-371,391-398,402-418,422-428， 430-435，443-452，463-469，476-484，486-494，503-509，529-553，560-565，570-590， 608-614,619-627,654-661,744-750,772-780,784-790,806-816,836-853,876-885, 912-918,926-933,961-975,980-987,996-1006,1016-1028,1043-1053,1057-1062, 994-1003 和 1033-1056 ;Seq ID No 293 的 17-45，64-71，73-81，99-109，186-192，223-238， 262-275,283-295,336-346,350-363,375-385,410-421,425-431,441-448,454-463,
468-474,476-512,523-537,539-552,568-583,599-608,612-620,628-641,644-654, 656-662，670-681，685-695，702-708，716-723，725-735，757-764，769-798，800-806， 808-816，826-840，846-854，856-862，874-881，885-902，907-928，274-350 和 443-513 ；Seq ID No 294 的4-22，29-41，45-51，53-61，70-76，85-92，99-104，111-122，134-140，142-154， 163-174，224-232，255-265，273-279，283-297，330-335，337-348，356-367，373-385， 391-396,421-431,442-455,475-485,493-505,526-538,544-561,587-599,605-620, 622-651,662-670,675-681,687-692,697-712,714-735 和 252-262 ；Seq ID No 295 的 4-12，15-35,40-46,50-59,67-94,110-128,143-169，182-188，207-215，218-228，238-250 禾口 74-90 ;Seq ID No 296 的 9—18，42—58，78—85，88—95，97—106，115—122，128—134，140-145，154-181，186-202，204-223，261-267，269-278，284-293，300-336，358-368 和 12-29 ；Seq ID No 297 的 7_34，46-53，62-72，82_88，100-105，111-117，132-137，144-160， 166-180，183-189，209-221，231-236，246-253，268-282，286-293，323-336，364-372， 378-392,422-433 和 388-405 ；Seq ID No 298 的 21-27，34-50，72-77，80-95，164-177， 192-198,202-220,226-236,239-247，270-279，285-292，315-320，327-334，348-355， 364-371,388-397,453-476,488-497,534-545,556-576,582-588,601-607,609-616, 642-662,674-681,687-697,709-715,721-727,741-755 和 621-739 ；Seq ID No 299 的 4-14，16-77,79-109 和 25-99 ;Seq ID No 300 的 4-9，17-23，30-37，44-55，65-72，77-93， 102-121，123-132，146-153 和 17-29 ；Seq ID No 301 的 4-18，25-41，52-60，83-92， 104-112，117-123，149-155，159-167，170-192，201-210，220-227，245-250 和 124-137 ；Seq ID No 302 的 8-25，50-55，89-95，138-143，148-153，159-169，173-179,223-238,262-268, 288-295,297-308,325-335,403-409,411-417,432-446,463-475,492-501,524-530, 542-548,561-574,576-593,604-609,612-622,637-654,665-672,678-685,720-725, 731-739，762-767，777-783，820-838，851-865，901-908，913-920，958-970，1000-1006， 1009-1015，1020-1026，1043-1052，1055-1061，1-128，252-341，771-793 和 1043-1058 ；Seq ID No 303 的 16-26,33-46 和 64-76 ；Seq ID No 304 的 4-27，69-77，79-101，117-1 23， 126-142，155-161，171-186，200-206，213-231，233-244，267-273，313-329，335-344， 347-370，374-379，399-408，422-443，445-453，461-468，476-482，518-534，544-553， 556-567,578-595,601-620,626-636,646-658,666-681,715-721,762-768,778-785, 789-803，809-819，22-108，153-318,391-527 和 638-757 ;Seq ID No 305 的 6-21，32-43， 62-92, 104-123, 135-141, 145-152,199-216,218-226,237-247,260-269,274-283, 297-303,1-72 和 127-211 ；Seq ID No 306 的 6-26，50-56，83-89，108-114，123-131， 172-181，194-200，221-238，241-247，251-259，263-271，284-292，304-319，321-335， 353-358,384-391,408-417,424-430,442-448,459-466,487-500,514-528,541-556, 572-578,595-601,605-613,620-631,635-648,660-670,673-679,686-693,702-708, 716-725,730-735,749-755,770-777,805-811,831-837,843-851,854-860,863-869, 895-901,904-914,922-929,933-938,947-952,956-963,1000-1005,1008-1014, 1021-1030,1097-1103,1120-1130,1132-1140,1-213, 269-592 和 992-1120 ；Seq ID No 307 的 9-16,33-39,47-59,65-79,81-95,103-108，115-123，138-148，163-171，176-185， 191-196，205-211，213-221，224-256，261-276，294-302，357-363，384-390，95-111 和 161-189 ；Seq ID No 308 的 21-27，35-45，70-76，92-105，129-143，145-155，161-166， 170-191，204-211，214-231，234-246，249-255，259-275 和 1-18 ；Seq ID No 309 的 21-35， 45-53，56-64，69-97 和 1-16 ；SeqID No 310 的 25-33，41-47，61-68，86-101，106-114， 116-129，134-142，144-156，163-176，181-190，228-251，255-261，276-292，295-305， 334-357, 368-380, 395-410,424-429,454-460,469-482,510-516,518-527,531-546, 558-570,579-606,628-636,638-645,651-656,668-674,691-698,717-734,742-754, 765-770,792-797,827-835,847-859,874-881,903-909,926-933,942-961,964-977, 989-1004,1010-1028,1031-1047,1057-1075,1081-1095, 1108-1117, 1138-1144, 1182-1189,1193-1206,1220-1229,1239-1246,1257-1267,1271-1279,1284-1301,1312-1320,1329-1335,1341-1347,1358-1371,1399-1404,1417-1426,1458-1463, 1468-1476,1478-1485,1493-1506,1535-1541,1559-1574,1583-1590,1595-1601, 1603-1611,1622-1628,1634-1644,1671-1685,1689-1696,1715-1720, 1734-1746, 1766-1775,1801-1806,1838-1844,1858-1871,1910-1917,1948-1955,1960-1974, 2000-2015，2019-2036，2041-2063，748-847 和 1381-1391 ；Seq IDNo 311 的 5-12，18-24， 27-53，56-63，96-113，119-124，131-136，157-163，203-209，215-223，233-246，264-273， 311-316,380-389,393-399,425-433,445-450,457-462,464-470,475-482,507-513, 527-535,542-548,550-565,591-602,607-613,627-642,644-664,673-712,714-732, 739-764，769-782，812-818，826-838，848-854，860-871，892-906，930-938，940-954， 957-973,990-998,1002-1021，1024-1033，1037-1042，1050-1060，1077-1083，1085-1092， 1100-1129，1144-1161，1169-1175，1178-1189，1192-1198，1201-1207，1211-1221， 1229-1239,1250-1270,1278-1292,1294-1300,1314-1335,1344-1352,1360-1374, 1394-1405,1407-1414,1416-1424,1432-1452,1456-1462,1474-1497, 1500-1510, 1516-1522，1534-1542，1550-1559，1584-1603，1608-1627，187-273 和 306-441 ；Seq ID No 312 的 70-80，90-97，118-125，128-140，142-148，154-162，189-202，214-222，224-232， 254-260,275-313,317-332,355-360,392-398,425-432,448-456,464-470,476-482, 491-505,521-528,533-546,560-567,592-597,605-614,618-626,637-644,646-653, 660-666，677-691 和 207-227 ;Seq ID No 313 的 5-19，26-34，37-55，57-66，69-83，86-102， 115-134，138-143，154-172，178-195，209-246，251-257，290-302，306-311 和 256-266 ；Seq ID No 314 的 10-20，22-28，35-57，72-79，87-103，108-128，130-144，158-171，190-198， 225-242，274-291，301-315，317-324，374-385 和 353-365 ;Seq ID No 315 的 4-9，17-30， 34-54，59-66，73-94，118-130，135-150，158-171，189-198，219-239，269-275，283-301， 89-106 和 176-193 ；Seq ID No 316 的 14-20，22-74，77-86，89-99，104-109，126-135， 154-165，181-195，197-212，216-224，264-275 和 107-118 ；Seq ID No 317 的 4-18，21-38， 63-72,101-109,156-162,165-179,183-192,195-210,212-218,230-239,241-256, 278-290, 299-311, 313-322,332-341,348-366,386-401,420-426,435-450,455-460, 468-479，491-498，510-518，532-538，545-552，557-563，567-573，586-595，599-609， 620-626，628-636，652-657，665-681 和 1-198 ；Seq ID No 318 的 4-10，16-38，51-68， 73-79，94-115，120-125，132-178，201-208，216-223，238-266，269-295，297-304，337-342， 347-356，374-401，403-422，440-447，478-504，510-516，519-530，537-544 和 191-206 ；Seq ID No 319 的 12-40，42-48，66-71，77-86，95-102，113-120，129-137，141-148，155-174， 208-214,218-225,234-240,256-267,275-283,300-306,313-321,343-350,359-367, 370-383，398-405，432-439，443-461，492-508，516-526，528-535 和 370-478 ；Seq ID No 320 的 6-14,20-37,56-62,90-95,97-113,118-125，140-145，161-170，183-202，237-244， 275-284,286-305,309-316,333-359,373-401,405-412 和 176-187 ;Seq ID No 321 的 33-44,50-55,59-80,86-101,129-139，147-153，157-163，171-176，189-201，203-224， 239-245，257-262，281-287，290-297，304-320，322-331，334-350，372-390，396-401，71-88 和 353-372 ；Seq ID No 322 的 5-11，15-24，26-33，40-47，75-88，95-103，105-112 和 17-30 ；Seq ID No 323 的 5-11，16-39，46-54，62-82，100-107，111-124，126-150，154-165，167-183，204-238，245-295，301-313，316-335和 8-16 ；Seq ID No 324 的 4-19，34-48， 69-74，79-107，115-127，129-135，143-153，160-169，171-182 和 142-153 ;Seq ID No 325 的 4-30，65-74，82-106，110-120，124-132，135-140，146-175，179-184，190-196，217-223， 228-233，250-267，275-292，303-315，322-332 和 174-186 ；Seq IDNo 326 的 9-16，29-41， 47-57,68-84,87-109,113-119,162-180，186-193，195-201，203-208，218-230，234-243， 265-271，28卜292，305-312，323-332，341-347，349-363，368-374，383-390，396-410， 434-440,446-452,455-464,466-473,515-522,529-542,565-570,589-600,602-613, 618-623,637-644,1019-1027，1238-1244，1258-1264，1268-1276，1281-1292，1296-1302 和 883-936 ；Seq IDNo 327 的 10-17，23-32，39-44，54-72，75-81，88-111，138-154，160-167， 178-185，201-210，236-252，327-334，336-342，366-376，388-400，410-430，472-482， 493-526，552-558，586-592，598-603，612-621，630-635，641-660 和 384-393 ；Seq ID No 328 的 4-22，24-39，50-59，73-84，100-105，111-117，130-138，155-161，173-178，182-189， 205-215, 266-284,308-313,321-328,330-337,346-363,368-374,388-395,397-405, 426-434,453-459,482-492,501-507,509-515,518-523,527-544,559-590,598-612, 614-629，646-659，663-684，686-694，698-721 和 445-461 ;Seq ID No 329 的 14-22，27-33 和 3-17 ；Seq ID No 330 的 29-41，66-73，81-87，90-108，140-146，150-159，165-184， 186-196，216-226，230-238，247-253，261-269 和 126-140 ;Seq ID No 331 的 5-12，16-25， 27-33，36-45，60-68，83-88，103-126 和 86-101 ;Seq ID No 332 的 14-23，36-47，56-66， 84-89,94-105，111-127，140-153，160-174，176-183，189-203，219-225，231-237，250-257 和 194-227 ;Seq ID No 333 的 4-25，54-60，64-71，73-82，89-106，117-124，157-169， 183-188，199-210，221-232，236-244，255-264 和 58-98 ;Seq ID No 334 的 13-19，26-36，
41-53,55-71,77-84,86-108,114-135，157-172，177-183，187-194，208-213，218-226， 110-125 和 156-170 ；Seq ID No 335 的 5-24，63-69，77-85，94-112，120-137，140-146， 152-159，166-172，179-187，193-199，206-212，222-228，234-240，244-252，257-264， 270-289，298-309，316-328，337-348，363-375，1-56 和 340-352 ;Seq ID No 336 的 18-39，
42-71，78-120，124-144，152-173，179-189，199-209，213-222，228-258，269-304，329-361， 364-372，374-389，396-441 和 313-327 ;Seq ID No 337 的 19-25，91-98，108-120，156-162，
168-174，191-204，211-216，232-266，272-278，286-308，316-321，327-333，344-355， 358-364，384-391，395-428，464-476，487-495，497-511，544-561，563-573，575-582， 588-594，10-25 和 322-338 ;Seq ID No 338 的 14-26，32-49，51-57，59-72，80-91，102-112， 119-125，147-161，164-173，175-183，188-213，217-222，246-254，260-276，282-303， 308-318, 321-328,333-350,352-359,371-378,392-401,407-414,416-443,448-463, 471-484, 490-497,501-514,519-527,539-551,557-570,578-590, 592-598,600-610, 618-629,633-647,654-667,676-689,702-709,718-726,728-737,741-760,764-780, 786-795, 808-826,836-842,845-852,865-874,881-887,931-945,949-957,968-974, 979-986，1003-1009，1023-1029 和 90-103 ;Seq ID No 339 的 11-16，37-56，60-66，69-77， 80-88，93-106，117-139，166-171 和 72-90 ；Seq ID No 340 的 59-84，123-133，145-150， 161-167,178-189 和 115-128 ；Seq ID No 341 的 15-33，39-46，52-64，74-87，108-124， 127-144，150-156，173-179，184-194，201-208，219-236，243-269，272-295，302-309，343-349,356-361,370-379,405-411,414-423,430-451,457-464,466-475,477-483, 496-502,507-522,541-548,557-563,571-577,579-585,590-605,626-642,650-662, 671-691,704-710,751-769,775-781,786-791,794-829,851-858,868-878,884-904, 913-919,931-939 和 132-142 ；Seq ID No 342 的 33-58，64-71，74-80，83-88，96-120， 122-139，146-157，167-177，207-213，220-225，236-242，264-279，300-305，326-336， 340-347，350-360，97-115 和 199-211 ；Seq ID No343 的 4-26，43-57，70-99，102-117， 121-133，142-148，151-168，170-183，192-220，235-249，258-279 和 30-41 ;Seq ID No 344 的 34-42，48-58，70-94，110-130，154-160，164-172，178-183，195-203，211-222，229-250， 256-261，274-284，286-292，312-323 和 222-233 ；Seq ID No 345 的 4-9，15-36，38-45，
49-74，78-88，100-112，136-191，211-220，226-233，239-246，254-274，287-307，316-322， 342-353，356-366，373-378，384-393，405-431，449-457，459-468，487-511，515-524， 529-541，544-552，562-568，571-576 和 208-280 ；Seq IDNo 346 的 10-27，31-37，39-54， 71-108,124-143和 2-107 ;Seq IDNo 347 的 16-27，38-57，64-70，90-102，104-113， 116-137,160-166 和 1-80 ；Seq ID No 348 的 13-21，31-36，56-67，127-136，153-171， 173-180，184-200，214-222，225-231，239-263，267-273 和 135-159 ；Seq ID No 349 的 12-27，31-51，68-74，77-87，94-101，108-114，117-123，127-134，138-168，173-196， 201-207，212-217，227-237，247-257，264-280 和 205-223 ;Seq ID No 350 的 17-22，25-54， 70-76，92-100 和 98-110 ;Seq ID No 351 的 7-29，40-50，60-67，87-96，105-111，119-164， 172-199，206-212，220-227，237-259，272-279，282-293，295-309，313-319，321-328， 345-363，376-386 和 159-176 ;Seq ID No 352 的 4-19，24-30，36-43，50-68，71-89，93-106， 141-152，154-172，179-197，199-215，229-239，246-252，255-263，281-298，319-325， 329-356, 358-368,374-390,397-409,420-429,432-444,450-456,459-475,483-494, 496-502，520-528，532-556 和 362-377 ;Seq ID No 353 的 18-25，40-62，77-85，91-97， 105-116，123-133，139-184，189-197 和 122-140 ；Seq ID No 354 的 4-49，52-58，62-70， 79-105,109-133,142-150,163-168,206-214,220-228,233-240,243-254,274-281, 303-311,327-338,357-373,378-396,403-413,420-436,441-453,461-467,475-481, 484-498, 506-512, 514-521,523-529,562-579,589-595,598-603,615-648,714-722, 728-742，749-758，777-792，795-807 和 643-658 ；Seq IDNo 355 的 8-27，37-48，51-56，
72-79，87-106，120-138，140-147，167-176，187-197，205-216，222-229，234-239，243-249， 277-288,292-315,334-343,347-353,363-391,398-404,430-447,461-467,478-492, 498-507 和 456-470 ;Seq ID No 356 的 5-12，18-24，59-69，80-93，95-109，119-125， 130-137，139-147，158-163，168-176，182-202，206-215，222-239，241-249，267-277， 291-298,311-318,321-327,338-344,348-355,373-386,393-406,411-417,434-443, 446-465，473-484，514-521，532-553，584-594 和 221-237 ；Seq IDNo 357 的 4-14，27-34，
50-58，63-72，79-106，109-114，121-142，146-154，161-167，169-175，178-201，223-238， 249-254，259-264，278-292，294-312，319-330 和 167-191 ；Seq ID No 358 的 7-28，36-42， 50-61,63-80，122-152，161-174，176-191 和 140-190 ；SeqID No 359 的 20-57，59-65， 70-78,86-102,119-133，142-161，163-173，177-188，192-202，204-220，222-236，240-253， 279-319，326-331，337-383，390-399，406-412，420-427，431-438 和 381-395 ；Seq ID No360 的 13-18，28-34，37-43，50-59，75-81，83-97，105-121，139-147，200-206，209-227， 231-247，260-271，318-327，366-381，388-394，399-406 和 182-201 ;Seq ID No 361 的 6-29,37-43,51-56,70-77,82-102,110-119,127-143,178-190,201-209,216-243, 261-269，281-292，305-313，327-339，341-354，356-373，391-397，423-429，438-445， 450-478 和 21-314 ;Seq ID No 362 的 4-12，15-21，32-41，59-76，80-89，96-104 和 90-103 ； Seq ID No 363 的 9-28，30-41，44-54，69-74，77-82，90-97，104-123，125-135，149-155， 164-173，177-184，217-226，230-235，238-244，258-272，282-297，300-305，309-315， 317-322，327-336，348-362，368-374，380-387，400-411，414-424，451-458，460-466， 483-494,497-503,506-511,521-528,540-553,569-587,598-606,628-642,661-681, 688-700，718-733，740-749，752-764，769-783，823-834，848-854，862-872，878-884， 886-898，915-920，938-951，954-961，963-972，982-989，996-1003，1010-1016，1021-1032， 1038-1044,1047-1057,1060-1070,1079-1088,1094-1102,1117-1127,1129-1135, 1142-1153,1158-1204,1212-1229,1234-1263,1269-1277,1308-1313, 1327-1338, 1344-1376，1400-1415，1436-1443，1448-1458，1497-1504，1511-1522，1544-1566，3-82 和 509-576 ；Seq ID No 364 的 8-36，40-64，71-79，88-94，102-109，118-127，138-148，
151-159，163-174，192-198，200-206，220-233，268-273，290-301，304-309，316-323， 331-349，378-391，414-420，427-437，455-475，494-510，541-547，549-555，616-640，1-60, 55-139，212-308，386-458 和 458-624 ；Seq ID No 365 的 16-31，35-42，70-77，91-101， 120-130，132-140，143-153，185-190，195-202，215-222，228-238，241-251，257-264， 268-277,288-302,312-324,326-333,341-348,364-382,415-429,438-454,458-466, 491-499,501-521 和 273-281 ;Seq ID No 366 的 8-14，32-57，74-149，155-177，179-212， 221-266,271-296,304-324,329-346,349-359,368-401,413-419,426-454,465-478, 493-510 和 466-490 ;Seq ID No 367 的 22-28，33-51，64-89，96-119，126-132，138-146，
152-159，161-169，172-179，193-198，205-211，221-231，235-254，273-280，297-303， 312-320，328-346，351-373，378-384，391-398，448-454，460-468，470-481，516-558， 574-593,597-602,613-623,626-646,649-656,668-673,675-683,696-708,715-722, 724-739，745-751，759-777，780-804，816-822 和 102-113 ;Seq ID No 368 的 12-28，41-91， 98-107，112-120，125-131，151-193,215-221，240-250，263-280 和 128-138 ；Seq ID No 369 的 16-24，32-38，46-62，68-81，90-105，127-133，144-150，160-166，178-184，186-202， 210-219,232-240,252-258,264-273,293-324,337-344,349-357,360-369,385-398, 410-416,419-427,441-449,458-476,508-515,523-539,544-549,562-569,571-579, 96-109 和 127-139 ;Seq ID No 370 的 19-25，28-34，56-61，85-97，110-116 和 39-53 ;Seq ID No 371 的 4-37，41-50，62-72，91-97，99-109，114-125，136-141，149-158，160-166， 201-215 和 27-225 ;Seq ID No 372 的 15-31，44-51，96-105，122-130，149-157，162-168， 178-183,185-192,198-204,206-213,221-234,239-245,248-255,257-266,289-335, 349-357，415-422，425-441，448-454，462-468 和 463-481 ;Seq ID No 373 的 5-31，39-55， 63-72，76-99，106-155，160-177，179-199，207-217，223-240，245-255，261-267，294-316， 321-343,354-378,382-452,477-488,529-536,555-569,584-591,593-612,620-627, 632-640，647-654，671-680，698-704，723-730，732-750，769-775，781-788，822-852 和505-525 ；Seq ID No 374 的 3-18 ;Seq ID No 375 的 4-14 和 12-24 ;Seq ID No 376 的 4-11，22-30 和 12-25 ;Seq ID No377 的 5-12 和 4-18 ;Seq ID No 378 的 4-28 和 7-14 ;Seq ID No379 的 6-16 和 8-16 ;Seq ID No 380 的 4-15，18-33 和 24-36 ;Seq ID No 381 的 4-10， 16-21 和 20-31 ；Seq ID No 382 的 6-19 ；Seq ID No 383 的 11-18 和 3-10 ；Seq ID No 384 的 13-24 和 3-15 ；Seq ID No 385 的 15-27 和 7-16 ；Seq ID No 386 的 11-16 和 1-15 ；Seq ID No 387 的 4-16 和 9-21 ；Seq ID No 388 的 4-24，40-48，54-67 和 22-39 ;Seq ID No 389 的 6-30，34-55，62-68，78-106 和 68-74 ;Seq ID No 390 的 3-14 ;Seq ID No 391 的 9-19 和 6-21 ；Seq ID No 392 的 4-17 和 1-9 ；Seq ID No 393 的 5-30 和 1-8 ；SeqID No 394 的 4-16， 23-46，51-56 和 45-55 ;Seq ID No 395 的 7_16;Seq ID No 396 的 2-14 ;Seq ID No 397 的 4-36，43-65 和 50-62 ；Seq ID No 398 的 10-30 和 14-21 ；Seq ID No 399 的 9-17 和 1-10 ； Seq ID No 400 的 4-12 和 3-16 ；Seq ID No 401 的 4-15 和 5-23 ；Seq ID No 402 的 10-21 ； Seq ID No 403 的 6-16 ;Seq ID No 404 的 4-29，31-38 和 2-14 ;Seq ID No 405 的 4-35 和 33-42 ；Seq ID No406 的 2-17 ；Seq ID No 407 的 9-18，30-35 和 15-33 ；Seq ID No408 的 4-9 和 6-12 ；Seq ID No 409 的 3-17 ；Seq ID No 410 的 12-21，37-44，52-61，72-80 和 38-48 ；Seq ID No 411 的 4-10，29-44，54-61，69-78 和 13-27 ;Seq ID No 412 的 13-23， 36-53和 2-15 ;Seq ID No 413 的 4-25，28-46，56-72，81-99，120-132，134-142，154-160和 129-141 ；Seq ID No 414 的 4-15，24-33，35-41，64-86 和 21-33 ;Seq ID No 415 的 9-15 禾口 4-13 ；Seq ID No 416 的 4-11，13-19，34-4 8 和 15-32 ;Seq ID No 417 的 4-21 和 11-31 ;Seq ID No 418 的 23-57 和 38-50 ；Seq ID No 419 的 4-32 和 3-13 ；Seq ID No 420 的 4-10， 13-25，32-42，56-68，72-84 和 26-38 ；SeqID No 421 的 4-20，31-48，52-58，65-71，80-93， 99-108，114-123和 37-49 ;Seq ID No 422 的 6-12，14-20和 3-25 ;Seq ID No 423 的 14-25， 27-38 和 5-14 ;Seq ID No 424 的 4-41，57-105，109-118，123-136，144-152 和 86-99 ;Seq ID No 425 的 6-19 ；Seq ID No 426 的 2-19 ；Seq ID No 427 的 14-47 和 1-14 ；Seq ID No 428 的 4-21，29-44 和 2-18 ；Seq ID No 429 的 23-29 和 10-28 ；Seq ID No 430 的 6-16， 22-36 和 11-22 ；Seq ID No 431 的 4-19，30-44 和 18-27 ；Seq ID No 432 的 5-15，37-45， 58-65 和 38-47 ;Seq ID No 433 的 4-15，23-34 和 4-15 ;Seq ID No 434 的 30-36，44-54， 79-85,101-114,138-152,154-164,170-175,179-200,213-220,223-240,243-255, 258-264,268-284和10-28 ；包含表IB的「相同區域」縱欄的胺基酸序列的肽，尤其是包含 如下胺基酸的肽Seq ID No 449 的 210-226 和 738-753 ;Seq ID No 450 的 326-344， 326-348，338-354，371-392，801-809和 877-901 ；Seq ID No 451 的 893-906 ;Seq ID No452 的 51-69 ;Seq ID No 453 的 110-125 ;Seq ID No 454 的 291-305 ;Seq ID No 455 的 210-226 和 738-753 ;Seq ID No 456 的 326-344，326-348，338-354，371-392，801-809 和 877-901 ；Seq ID No 457 的 893-906 ；Seq ID No 458 的 51-69 ；Seq ID No 459 的 110-125 ； SeqID No 460 的 291-305 ;Seq ID No 461 的 32-44 ;Seq ID No 462 的 399-410 ；表 2 的「氨 基酸從」到「胺基酸至」縱欄中指定的血清反應性表位，尤其是包含如下胺基酸的肽Sep ID No 218 的 120-143，138-161 和 156-179 ;Seq ID No 219 的 110-129 和 168-184 ;Seq ID No 222 的 74-90 ；Seq ID No 223 的 759-773 ；Seq ID No 224 的 237-260 ；SeqID No 225 的 265-284 ；Seq ID No 226 的 65-74 ；Seq ID No 227 的 41-50 ；Seq ID No 229 的 163-174 ； Seq ID No 230 的 26-37 ；SeqID No 232 的 174-189 ；Seq ID No 234 的 240-256 ；Seq ID No236 的 285-297 ;Seq ID No 238 的 238-247 ;Seq ID No 239 的 491-519 ;Seq ID No 243 的 114-140 ；Seq ID No 250 的 267-284 ;Seq ID No252 的 439-453 ;Seq ID No 253 的 162-178 ；Seq ID No 254 的 347-364 ；Seq ID No 255 的 699-715 ；Seq ID No 256 的 60-71 ； SeqID No 257 的 244-257 ；Seq ID No 258 的 44-63 和 57-76 ；Seq IDNo 260 的 185-196 ； Seq ID No 263 的 119-129 ；Seq ID No 266 的 182-195 ；Seq ID No 267 的 32-44 和 424-442 ；Seq ID No 268 的 247-256 ;Seq ID No 269 的 678-694，785-805，55-77 和 72-94 ； Seq ID No 281 的 210-226 ；Seq ID No 289 的 37-59 ；Seq ID No 296 的 13-29 ；Seq ID No 348 的 136-159 ；Seq ID No 349 的 205-222 ；Seq ID No 350 的 99-110 ；Seq ID No 351 的 160-176 ；Seq ID No 355 的 457-470 ；Seq ID No 356 的 221-237 ；Seq ID No 357 的 167-1 90 ；Seq ID No 361 的 96-120 ；Seq ID No 364 的 399-417，503-519 和 544-563 ；Seq ID No 371 的 46-68，159-183 和 184-198 ；Seq ID No372 的 463-481 ；表 4 的「胺基酸從，，到 「胺基酸至」縱欄中指定的免疫原性表位；尤其是包含如下胺基酸的肽Seq ID No 219的 110-129 和 168-184 ；Seq ID No 277 的 877-901，333-354，326-344 和 801-809 ;Seq ID No 347 的 l-54;Seq ID No 364 的 544-563，31-51，107-119，399-417 和 503-519 ;Seq ID No 218 的 120-198 ；Seq ID No 219 的 20-35 ；Seq ID No 221 的 118-201 ；Seq ID No 242 的 48-132 ；SeqID No 249 的 118-136 ;Seq ID No 253 的 162-178 ;Seq ID No 254 的 347-364 ； Seq ID No 255 的 699-715 ;Seq ID No 258 的 50-76 ;Seq ID No 269 的 785-819 和 44-128 ； Seq ID No 274 的 90-128 ；Seq ID No 289 的 314-384 ；Seq ID No 293 的 327-349 ；Seq ID No304 的 242-314,405-478 和 23-100 ;Seq ID No 305 的 129-210 ;Seq ID No 307 的 162-188 ；Seq ID No 310 的 750-772 ；Seq ID No335 的 1-56 ；Seq ID No 337 的 322-337 ； Seq ID No 339 的 72-90 ；Seq ID No 345 的 374-395 ；Seq ID No 348 的 136-159 ；Seq ID No358 的 141-164 ；Seq ID No 361 的 96-157 ；Seq ID No 363 的 1-82 ；Seq ID No 364 的 489-556 ；Seq ID No 371的159-183和49-133 ；包含表5的「推定的免疫原性胺基酸」和 「鑑別的免疫原性區域(aa)的位置」縱欄的胺基酸序列的肽，尤其是包含如下胺基酸的肽 Seq ID No475 的4-26，35-41，53-61，73-84，103-108，114-120，140-146，156-162，192-208， 214-219，227-233，239-252，260-268，284-297，1-48 和 113-133 ;Seq ID No 476 的 4-27， 38-44，50-56，59-64，72-79，83-89，92-97，108-116，123-148，152-167，183-196，200-220， 232-244，255-261，265-274，282-302，309-317，1-79 和 231-302 ;Seq ID No 477 的 6-28， 66-72,85-105,115-121，144-151，160-170，176-185，223-230，252-288，296-310，319-333， 367-374，458-464，471-480，483-488，520-528，530-549，559-564，593-601，606-616， 636-643，655-662，676-682，684-699，719-726，735-750，757-764，777-785，799-810， 812-843,846-853,868-873,880-889,891-899,909-929,934-940,963-969,998-1004, 1007-1014，1016-1022，1030-1046，1-80 和 808-821 ;Seq ID No 478 的 7-24，35-41，75-81， 91-114，122-132，137-144，148-156，183-192，194-200，212-228，233-238，251-258， 275-295，326-332，337-346，1-79 和 305-321 ;Seq ID No 479 的 31-38，42-52，66-72， 86-92，98-104，115-122，127-146，154-164，169-187，198-212，225-237，255-269，13-92 和 135-142 ；Seq ID No 480 的 4-36，39-49，63-69，71-77，81-88，123-131，133-139，160-169， 174-180，188-194，210-217，273-278，289-300，317-334，336-341，383-401，425-438，1-68, 212-270 和 402-446 ;Seq ID No 481 的 21-29，31-42，49-63，72-79，81-93，112-132，159-165，188-195，197-232，262-267，279-286，294-301，318-326，348-366，381-405， 409-426,436-465,471-480,484-492,497-505,521-544,554-561,567-577,581-589, 601-609,611-622,636-651,653-667,669-685,700-708,716-722,729-744,749-766, 780-786，789-811，814-864，1-57 和 84-106 ;Seq ID No 482 的 6-24，35-48，57-63，72-78， 87-92，113-119，123-137，147-153，173-181,212-233 和 1-124 ;Seq ID No 483 的 13-34， 62-69，78-83，86-91，98-104，107-115，146-159，179-188，195-205，209-221，226-233， 239-253，276-282，284-294，297-308，331-354，375-382，388-399，421-433，449-458， 464-469,472-491,508-513,525-531,534-550,575-593,601-618,629-635,654-661, 666-680，706-721，723-740，771-805，810-830，845-851 和 1-84 ;Seq ID No 484 的 4-32， 45-64，73-83，86-92，100-111，125-147，157-163，170-175，177-188，226-232，245-252， 258-274，320-335，348-359 和 1-71 ;Seq ID No485 的 13-40，43-71，76-83，87-101， 109-119，125-156，162-175，182-219，226-232，240-262，270-287，306-318，326-342， 344-408，414-444，449-456 和 1-51 ；Seq ID No 486 的 4-16，18-34，45-54，99-108， 134-140,203-212,241-257,266-274,279-291，308-315，330-336，355-370，374-382， 402-410，428-455，466-472，474-480，531-554，560-566，572-580，597-618，632-660， 664-674，676-685，691-705，708-735，750-768，1-87 和 342-480 ；表 6 的「胺基酸從」到「氨 基酸至」的 縱欄中指定的血清反應性表位，尤其是包含如下胺基酸的肽No 475的115-132 和 1-26 ；Seq ID No 476 的 33-55 ；Seq IDNo 478 的 1-25 ；Seq ID No 479 的 37-61 ；Seq ID No 480 的 l_24;Seq ID No 481 的 1-23 ;Seq ID No 482 的 46-60 ;Seq ID No 483 的 1-28， 23-50 和 45-71 ；Seq ID No 484 的 1-22 和 17-38 ；Seq ID No485 的 1-22 和 17-38 ；Seq ID No 486的1-27，22-47和422-447 ；表7的「胺基酸從」到「胺基酸至」縱欄中指定的免疫原 性表位，尤其是包含如下胺基酸的肽Seq ID No 475的115-132和1-47 ;Seq ID No476的 1-55 ；Seq ID No 477 的 22-85 ；Seq ID No 478 的 307-320 和 1-44 ；Seq ID No 479 的 15-76 和 40-92 ；Seq ID No 480 的 1-59，213-269 和 403-445 ；Seq ID No 481 的 1-56 和 85-105 ；Seq ID No482 的 37-121 ；Seq ID No 483 的 1-71 ；Seq ID No 484 的 1-38 ；Seq ID No 485的1-38 ；Seq ID No 486的1_47以及包含所述序列至少6個優選地多於8個尤其 多於10個胺基酸並且優選地不多於70、50、40、20、15或11個胺基酸的片段。所有這些片 段單獨地並且每一個獨立地形成了本發明優選的挑選的方面。通過一套長度至少10個胺基酸有1個胺基酸重疊的肽分析蛋白質抗原的全部序 列可以鑑別特定抗原的所有線性超免疫血清反應片段。隨後，通過使用表達的全長蛋白質 或其結構域多肽的用超免疫血清分析蛋白質抗原可以鑑別非線性表位。假設蛋白質獨特的 結構域足夠形成不依賴於天然蛋白質的3D結構，各個重組或合成產生的結構域多肽用超 免疫血清的分析將允許在多結構域蛋白質各個結構域內的構象抗原結構域的鑑別。對於結 構域擁有線性以及構象性表位的那些抗原，用相應於線性表位的肽的競爭試驗可用於證實 構象性表位的存在。將理解本發明尤其也涉及編碼前面提到的片段的核酸分子，雜交編碼片段的核酸 分子的核酸分子，特別是在嚴格條件下雜交的那些，以及用於擴增編碼片段的核酸分子的 例如PCR引物的核酸分子。在這些點上，優選的核酸分子是如上面討論的相應於優選片段 的那些。
本發明也涉及包含本發明的一個或多個核酸分子的載體、用本發明的載體進行基 因工程的宿主細胞以及通過重組技術的超免疫血清反應性抗原及其片段的產生。大量的表達載體能用於表達根據本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段。一 般，適於維持、繁殖或表達核酸以在宿主中表達多肽的任何載體可以用於在這方面的表達。 與本發明的這個方面一致，載體可以例如是質粒載體、單或雙鏈噬菌體載體、單或雙鏈RNA 或DNA病毒載體。此處公開的起始質粒或者是市售可獲得的、公開可獲得的，或者通過眾所 周知的公開的程序的常規應用能從可獲得的質粒構建。在某些方面，載體之中優選的是為 了本發明的核酸分子和超免疫血清反應性抗原或其片段的表達的那些。宿主細胞中的核酸 構建體能以傳統方式用於產生重組序列編碼的基因產物。或者，本發明的超免疫血清反應 性抗原及其片段能通過傳統肽合成器合成產生。成熟的蛋白質能表達於哺乳細胞、酵母、細 菌或其它在合適的啟動子控制下的細胞。使用來源於本發明的DNA構建體的RNA，也能採用 無細胞的翻譯系統以產生這樣的蛋白質。能對宿主細胞進行基因工程化以整合核酸分子和表達本發明的核酸分子。合適宿 主的代表性實例包括例如鏈球菌、葡萄球菌、大腸桿菌、鏈黴菌和枯草芽孢桿菌細菌細胞； 例如酵母細胞和麴黴屬細胞的真菌細胞；例如果蠅S2和夜蛾Sf9細胞的昆蟲細胞；例如 CHO，COS, Hela，C127，3T3，BHK, 293和Bowes黑素瘤細胞的動物細胞；以及植物細胞。本發明也提供了產生無乳鏈球菌超免疫血清反應性抗原及其片段的方法，包括從 宿主細胞表達本發明提供的核酸分子編碼的超免疫血清反應性抗原或其片段。本發明還提 供了產生表達無乳鏈球菌超免疫血清反應性抗原或其片段的細胞的方法，包括用根據本發 明的載體轉化或轉染合適的宿主細胞使得轉化的或轉染的細胞表達載體中含有的核酸編 碼的多肽。可以以例如融合蛋白質的修飾形式表達多肽，並且多肽可以不僅包括分泌信號還 有額外的異源性功能區域。因而，例如，尤其是帶電荷胺基酸的額外胺基酸區域可以加到多 肽的N或C末端以改進在純化過程中或隨後的操作和儲存過程中在宿主細胞中的穩定性和 持續性。區域也可加到多肽以促進純化。這樣的區域可以在多肽的最後製備之前去除。多 肽基團加到多肽以引起分泌或排洩、以改進穩定性或促進純化在其它之中是本領域熟悉的 和常規的技術。優選的融合蛋白質包含對於溶解或純化多肽是有用的來自免疫球蛋白的異 源性區域。例如，EP-A-0 464 533 (加拿大副本2045869)公開了包含免疫球蛋白分子的恆 定區不同部分和另一個蛋白質或其部分的融合蛋白質。在藥物發現中，例如，為了鑑別拮抗 劑的高通量篩選試驗的目的蛋白質已經與抗體Fc部分融合。見例如{Bennett，D.等人， 1995}和{Johanson, K.等人，1995}。通過眾所周知的方法能從重組細胞培養物中重新獲得和純化無乳鏈球菌超免疫 血清反應性抗原或其片段，包括硫酸銨或乙醇沉澱、酸提取、陰離子或陽離子交換色譜、磷 酸纖維素色譜、疏水相互作用色譜、羥基磷灰石色譜和凝集素色譜。通過化學合成以及通過生物工程手段能生產根據本發明的超免疫血清反應性抗 原及其片段。後者包含了用含有根據本發明的核酸的載體轉染或轉化宿主細胞，以及在本 領域技術人員已知的條件下培養轉染或轉化的宿主細胞。為了純化或分離要生產的多肽的 生產方法也可以包含純化步驟。優選的實施方案中載體是根據本發明的載體。根據本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段可用於含有這些生物體或其衍生
60的多肽的樣品中一個或多個生物體的檢測。優選的這樣的檢測是為了診斷，更加優選地 為了疾病的診斷，最優選地為了與革蘭氏陽性細菌的存在或豐度相關或相聯的疾病的診 斷，尤其是選自鏈球菌、葡萄糖球菌和乳球菌的細菌。更加優選地，微生物選自肺炎鏈球 菌(Streptococcus pneumoniae)、化月農鏈球菌(Streptococcus pyogenes)禾口變形鏈球菌 (Streptococcus mutans)，尤其微生物是化膿鏈球菌。本發明也涉及診斷試驗，例如用於檢測細胞和組織中本發明的超免疫血清反應性 抗原及其片段的水平的定量和診斷試驗，包括正常和異常水平的測定。所以，例如，根據本 發明，為了檢測與正常組織樣品相比多肽的過度表達的診斷試驗可以用於檢測感染的存 在，以及鑑別感染生物體。能用於測定源自宿主的樣品中多肽水平的試驗技術對於本領域 技術人員是眾所周知的。這樣的試驗方法包括放射免疫試驗、競爭結合試驗、Western斑點 分析和ELISA試驗。這些之中，ELISA常常是優選的。ELISA試驗最初包含製備特異於多肽 的抗體，尤其是單克隆抗體。另外，一般地製備了結合於單克隆抗體的報告抗體。報告抗體 附著於檢測試劑，例如放射活性的、螢光的或酶試劑，例如辣根過氧化物酶。根據本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段可用於陣列的目的或與其相連。更 加特別的，至少一個根據本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段可以固定於支持物上。 所述支持物一般包含各種超免疫血清反應性抗原及其片段，由此可以使用一種或一些根據 本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段和/或不同的超免疫血清反應性抗原及其片段 產生多樣性。這樣的陣列以及任何陣列的特徵性特性一般是獨特的多肽固定於所述支持物 或其表面上獨特的或預先定義的區域或位置上。因為這個，陣列獨特位置或區域上的任何 活性與特異性多肽相關。不同超免疫血清反應性抗原及其片段固定於支持物的數量可以在 從10個那麼少到幾千個不同超免疫血清反應性抗原及其片段的範圍內。優選實施方案中 每cm2超免疫血清反應性抗原及其片段的密度是從每cm2 10個肽/多肽那麼少到每cm2至 少400個不同肽/多肽，更加特別的每cm2至少1000個不同超免疫血清反應性抗原及其片 段。這種陣列的生產對於本領域的技術人員是已知的，例如，在美國專利5，744，309 中有描述。陣列優選地包含具有至少第一個表面的平坦的、多孔或非多孔的固相支持物。如 此出公開的超免疫血清反應性抗原及其片段固定於所述表面。其它之中優選的支持物材料 是玻璃或纖維素。為了此處描述的任何診斷應用使用矩陣也在本發明內。除了根據本發明 的超免疫血清反應性抗原及其片段外，為了如上面描述的陣列的產生也可以使用根據本發 明的核酸。這個也應用於抗體製成的陣列，優選地其它之中如此處描述的單克隆抗體。另一方面本發明涉及指向任何根據本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段、其 衍生物或片段的抗體。本發明包括例如單克隆和多克隆抗體、嵌合、單鏈和人源化抗體，以 及Fab片段或Fab表達文庫的產物。抗體可以是嵌合的也在本發明之內，即它們的不同部 分源自不同種屬或者至少各自的序列取自不同的種屬。通過將超免疫血清反應性抗原及其片段直接注射到動物或者通過給予優選非人 類的動物超免疫血清反應性抗原及其片段，能夠獲得產生的抗相應於本發明的序列的超免 疫血清反應性抗原及其片段的抗體。然後如此得到的抗體將結合超免疫血清反應性抗原及 其片段本身。以這個方式，甚至僅僅編碼超免疫血清反應性抗原及其片段的一個片段的序 列能用於產生結合整個天然超免疫血清反應性抗原及其片段的抗體。然後這樣的抗體能用於從表達那些超免疫血清反應性抗原及其片段的組織中分離超免疫血清反應性抗原及其 片段。為了單克隆抗體的製備，能夠使用本領域已知的提供連續細胞系培養物產生的抗 體的任何技術(如原先{Kohler, G.等人，1975}中描述地)。能使為了單鏈抗體的產生描述的技術適應於產生抗根據本發明的免疫原性的超 免疫血清反應性抗原及其片段的單鏈抗體。轉基因小鼠或例如其它哺乳動物的其它生物體 可以用於表達抗根據本發明的免疫原性超免疫血清反應性抗原及其片段的人源化抗體。或者，噬菌體展示技術或核糖體展示能用於從篩選擁有各自靶抗原的人類淋巴細 胞的PCR擴增v-基因文庫或從幼稚文庫挑選對超免疫血清反應性抗原及其片段有結合 活性的抗體基因{McCafferty, J.等人，1990} ； {Marks, J.等人，1992}。也能通過鏈改組 (chain shuffling) {Clackson, T.等人，1991}改進這些抗體的親和力。如果存在兩個抗原結合結構域，每個結構域可以指向不同的表位-稱為「雙特異 性」抗體。上面描述的抗體可以應用於分離或鑑別表達超免疫血清反應性抗原及其片段的 克隆或為了用親和色譜的分離和/或純化通過將抗體附著於固相支持物而純化本發明的 超免疫血清反應性抗原及其片段。因而，抗本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段的抗體尤其可以應用於抑制和 /或治療感染，特別是細菌感染，特別是來自無乳鏈球菌的感染。超免疫血清反應性抗原及其片段包括抗原性、表位或免疫原性等同的衍生物，它 形成了本發明的特定方面。如此處使用的術語「抗原性等同衍生物」包含某些抗體特異性識 別的超免疫血清反應性抗原及其片段或其等同物，所述抗體當針對根據本發明的蛋白質或 超免疫血清反應性抗原及其片段培養時，幹擾病原體和哺乳動物宿主之間的相互作用。如 此處使用的術語「免疫原性等同衍生物」包含肽或其等同物，當其用於合適的製劑以在脊柱 動物中培養抗體時，抗體起幹擾病原體和哺乳動物宿主之間相互作用的作用。超免疫血清反應性抗原及其片段，例如抗原性或免疫原性等同衍生物或其融合蛋 白能夠用作抗原以免疫小鼠或例如大鼠或小雞的其它動物。融合蛋白質可以給超免疫血清 反應性抗原及其片段提供穩定性。抗原可以例如通過結合連接於例如牛血清白蛋白(BSA) 或匙孔血藍蛋白(KLH)的免疫原性載體蛋白質。或者，包含蛋白質或超免疫血清反應性抗 原及其片段多個拷貝的抗原肽或抗原性、免疫原性等同的超免疫血清反應性抗原及其片段 可以有足夠的抗原性以改進免疫原性而避免載體的使用。優選地，修飾抗體或其衍生物使其在個體有更少的免疫原性。例如，如果個體是 人，抗體最優選地可以是「人源化的」，其中雜交瘤衍生的抗體的互補決定區域被接種到人 單克隆抗體，例如如{Jones, P.等人，1986}或{Tempest, P.等人，1991}中描述地。本發明的多核苷酸在基因免疫中的使用將優選地採用合適的遞送方法，例如質粒 DNA直接注射入肌肉，與特異性蛋白質載體複合的DNA的遞送，用磷酸鈣的DNA共沉澱，DNA 包裝在各種形式的脂質體中，粒子轟擊{Tang，D.等人，1992}，{Eisenbraun，M.等人，1993} 以及使用克隆的逆轉路病毒載體的體內感染{Seeger，C.等人，1984}。另一方面本發明涉及結合於根據本發明的任何超免疫血清反應性抗原及其片段 的肽，以及這樣肽的生產方法，由此所述方法特徵在於根據本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段的使用，並且基礎步驟對於本領域的技術人員是已知的。可以通過使用根據本領域技術的方法產生這樣的肽，例如噬菌體展示或核糖體展 示。在噬菌體展示的情況下，基本上產生了噬菌體形式的肽的文庫，這種文庫與靶分子接 觸，在這個情況下是根據本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段。隨後從各自的反應中 去除那些結合於靶分子的肽，優選地是與靶分子的複合物。結合的特性至少在某個程度依 賴於例如鹽濃度等等特定實行的實驗設置是本領域技術人員已知的。結合於有更高的親和 力或更大力量的靶分子的那些肽從文庫的非結合成員分離之後，並且可選地也在靶分子從 靶分子與肽的複合物去除後，隨後可以特徵分析各自的肽。特徵分析之前，可選地實行擴增 步驟，例如通過增殖編碼肽的噬菌體。特徵分析優選地包含靶結合肽的測序。基本上，肽不 限制它們的長度，然而優選地在各自的方法中優選地得到具有從大約8至20個胺基酸的長 度的肽。文庫的大小可以是大約102至1018，優選地108至1015個不同的肽，然而並不限於 這些。特定形式的靶點結合超免疫血清反應性抗原及其片段是所謂的「抗促成素」，在其 它之中它們在德國專利申請DE 197 42 706中有描述。在另一方面本發明涉及與任何的根據本發明的超免疫血清反應性抗原及其片段 相互作用的功能性核酸，以及這樣功能性核酸的生產方法，由此所述方法特徵在於根據本 發明的超免疫血清反應性抗原及其片段的用途，並且基礎步驟對於本領域的技術人員是已 知的。功能性核酸優選地是適體和鏡面體。適體是單鏈或雙鏈的、並且特異性與靶分子相互作用的D-核酸。適體的生產或挑 選在例如歐洲專利EP 0 533 838中有描述。基本上實行了下面的步驟。首先，提供了核酸 的混合物，即潛在的適體，由此每個核酸一般包含一些優選地至少8個隨後隨機的核苷酸 的片段。這個混合物隨後與靶分子接觸，由此例如基於與候選混合物對靶點增加的親和力 或對靶點更大的力量核酸與靶分子結合。隨後從剩餘的混合物中分離結合核酸。可選地， 使用例如多聚酶鏈式反應擴增這樣得到的核酸。這些步驟可以重複數次，只要最後混合物 具有增加的特異性結合於靶點的核酸的比例，然後可選地從中挑選最終結合核酸。這些特 異性結合的核酸指的是適體。很明顯在適體的生產或鑑別方法的任何階段，為了使用標準 技術測定它的序列可以採集個體核酸混合物的樣品。例如通過引入對產生適體的技術領域 技術人員已知的定義的化學基團可以穩定適體在本發明之內。這樣的修飾例如可以存在於 氨基基團在核苷酸糖基團2』位置的引入。適體目前用作治療劑。然而，這樣挑選的或產生 的適體可以用於靶點確認和/或用作優選基於小分子藥劑的藥劑開發的先導物質也在本 發明之內。這個實際上通過競爭試驗完成，由此候選藥物抑制靶分子和適體之間特異性相 互作用，由此在適體從靶點和適體的複合物取代時，可以假設各自的候選藥物允許靶點和 適體之間相互作用的特異性抑制，如果相互作用是特異性的，所述候選藥物將至少在原則 上適於阻斷靶點並因而降低其在包含這樣靶點的各自的系統中的生物利用度或活性。這樣 得到的小分子可以進行進一步的衍生化和修飾以優化其物理、化學、生物和/或醫學特徵， 例如毒性、特異性、生物降解度和生物利用度。鏡面體和它們的產生或製造基於一個簡單的原則。鏡面體的製造在國際專利申請 W0 98/08856中有描述。鏡面體是L-核酸，這是指它們由L-核苷酸而不是象適體的D-核 苷酸組成。鏡面體特徵在於它們在生物系統具有非常高的穩定性並且與適體相比特異性地與它們指向的靶分子相互作用這個事實。產生鏡面體的方法中，產生了 D-核酸的異源群， 這個群與靶分子的光學對映體接觸，在這個情況下例如與根據本發明超免疫血清反應性抗 原及其片段的天然發生的L-對映體的D-對映體接觸。隨後，分離不與靶分子的光學對映 體相互作用的那些D-核酸。但是分離、可選地鑑別和/或測序與靶分子的光學對映體相互 作用的那些D-核酸，隨後基於從D-核酸獲得的核酸序列信息合成相應的L-核酸。就與靶 分子的光學對映體相互作用的前面提到的D-核酸的序列而言相同的這些L-核酸將特異性 地與天然發生的靶分子而不是它的光學對映體相互作用。與適體產生的方法相似，重複各 種步驟幾次並因而濃集特異性與靶分子的光學對映體相互作用的那些核酸是可能的。
在另一方面，本發明涉及與根據本發明的任何核酸分子相互作用的功能性核酸， 以及這樣功能性核酸的製造方法，由此所述方法特徵在於根據本發明的核酸分子和它們各 自序列的用途並且基礎步驟對於本領域技術人員是已知的。功能性核酸優選地是核酶、反 義寡核苷酸和siRNA。核酶是催化活性的核酸，優選地由基本上包含兩個基團的RNA組成。第一個基團 顯示了催化活性而第二基團負責與靶核酸的特異性相互作用，在這個情況下是編碼根據本 發明的超免疫血清反應性抗原及其片段的核酸。靶核酸和核酶第二基團相互作用時，一般 通過兩個雜交鏈上基本上互補的鹼基的延伸雜交和Watson-Crick鹼基配對，催化活性基 團可以變成有活性的，就是指它或者分子內或者分子間催化核酸分子，倘若核酶的催化活 性是磷酸二酯酶活性。隨後，可以有靶核酸進一步的降解，最後導致了靶核酸以及源自所述 靶核酸的蛋白質的降解。核酶、它們的使用和設計原則對於本領域技術人員是已知的，例如 {Doherty, E.等人，2001}和{Lewin，A.等人，2001}中有描述。用於藥劑的製造以及作為診斷試劑的反義寡核苷酸的活性和設計分別基於作用 的相同模式。基本上，反義寡核苷酸基於鹼基互補與靶RNA優選地與mRNA雜交，因而激活 RNase H。RNase H被磷酸二酯和硫代磷酸酯偶聯的DNA激活。然而除了硫代磷酸酯偶聯 的DNA以外，磷酸二酯偶聯的DNA很快地被細胞內核酶降解。這些抗性的非天然發生DNA 衍生物在與RNA雜交時不抑制RNase H。換而言之，反義聚核苷酸僅僅作為DNA RNA雜交 複合物是有效的。這種反義寡核苷酸的實例在其它之中的美國專利US 5，849，902和US 5，989，912。換而言之，基於靶分子的核酸序列，在這個情況下靶分子是根據本發明的超免 疫血清反應性抗原及其片段的核酸分子，可以基於鹼基互補的原則，從原則上可從其推測 的各自的核酸序列的靶蛋白質或者通過了解尤其是mRNA這樣的核酸序列設計合適的反義 寡核苷酸。特別優選的是具有硫代磷酸酯DNA(3至9個鹼基)的短的延伸的反義寡核苷酸。 最少3個DNA鹼基對於細菌RNase H的激活是必需的，最少5個鹼基是哺乳動物RNase H激 活必需的。在這些嵌合寡核苷酸中有形成RNase H底物的中心區域，它與由不形成RNase H 底物的修飾的核苷酸組成的雜交「臂」側面相接。可以例如通過2』 -氧-甲基或2』 -氟修 飾嵌合寡核苷酸的雜交臂。替代的方法使用了所述臂中的甲基膦酸酯或氨基磷酸酯連接。 本發明的實踐中有用的反義寡核苷酸進一步實施方案是P-甲氧基寡核苷酸，部分P-甲氧 基寡脫氧核糖核酸或P-甲氧基寡核苷酸。本發明尤其相關和有用的是如上面提到的兩個美國專利更加特別描述的那些反 義寡核苷酸。這些寡核苷酸不含有天然發生的5' —3'-連接的核苷酸。更合適的寡核苷酸具有兩個類型的核苷酸激活RNase H的2』-脫氧硫代磷酸酯和不激活RNase H的2』 修飾的核苷酸。2』-修飾的核苷酸之間的連接是磷酸二酯、硫代磷酸酯或P-乙氧基磷酸二 酯。通過連續的RNase H激活�