一種無菌速溶型藥膜及其腫瘤藥敏測試用途的製作方法

2023-12-02 05:25:46 1

專利名稱：一種無菌速溶型藥膜及其腫瘤藥敏測試用途的製作方法
技術領域：
本發明提供一種無菌速溶型藥膜，應用該藥膜進行抗腫瘤藥物藥敏測試的方法，並還提供了該無菌速溶型藥膜用於抗腫瘤藥敏測試的用途。屬於醫藥技術領域。
背景技術：
惡性腫瘤是嚴重危害人類生命和健康的常見病和多發病，是導致殘疾和早死的主要疾病之一，在35 59歲年齡組中，惡性腫瘤居死因第一位。資料顯示，我國惡性腫瘤年發病例數為200萬，死亡約150萬，並以3%的速度遞增且呈年輕化趨勢，居各類疾病中死亡率之最。目前世界對惡性腫瘤的主要治療手段包括手術、放療、化療、內分泌治療及生物免疫治療等。在惡性腫瘤治療的諸多手段中，化療作為一種全身性的治療方法，較之其他方法有可能最大程度地殺滅患者體內的腫瘤細胞，因此，化療在惡性腫瘤治療中佔有非常重要的地位。隨著醫學的發展，化療已經不再是單純起姑息性治療作用的手段，正在從姑息向根治過渡。1998年，世界衛生組織提出，使用適當化療在部分腫瘤(惡性滋養細胞腫瘤、急性淋巴細胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、睪丸癌、急性粒細胞白血病、胚胎性橫紋肌肉瘤、皮膚癌、小細胞肺癌和卵巢癌等)中已成為可以治癒腫瘤的根治性治療手段。經輔助化療後可能治癒的腫瘤有乳腺癌、成骨肉瘤、大腸癌、骨肉瘤、視網膜母細胞瘤、軟組織肉瘤及腎母細胞瘤等。儘管化療在惡性腫瘤的治療中佔有非常重要的地位，但是在臨床實踐中，結果往往不盡如人意。其中，腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥是導致腫瘤化療失敗的常見因素，也是困擾腫瘤治療的關鍵性難題。 耐藥問題是極為普遍的臨床問題，據美國癌症協會估計，90%以上因腫瘤死亡的患者在不同程度上受到耐藥影響。腫瘤細胞耐藥分為原發性和獲得性耐藥兩大類。目前臨床上通常的做法是，根據國際腫瘤臨床試驗的循證研究結果，得知不同的化療藥物對不同腫瘤的治療敏感性不同，即每一種腫瘤有相應有效的化療藥物敏感譜，從而選擇療效最高的化療單藥或多種藥物組成的聯合方案進行治療。但在臨床上經常碰到這樣的情況，經循證研究公認為對某種腫瘤有效的治療方案，而對有的患者卻毫無效果。如阿黴素對浸潤性乳腺癌是一種具有裡程碑意義的治療藥物，但仍有50%的浸潤性乳腺癌病人對這種藥不敏感。又如健擇，對非小細胞肺癌公認的療效明顯，但也有60%以上的病人療效並不明顯。腫瘤對各種化療藥物存在著明顯的個體差異。即不同的腫瘤類型或同一類型的不同病人，甚至同一病人在不同的發病階段，對化療的敏感性並不完全相同，治療效果差別也很大。至今還沒有一種化療藥物或幾種化療藥物的聯合應用，能對某一種腫瘤100%有效。臨床上，用同一種化療藥物或同一種化療方案治療不同的腫瘤患者，顯然帶有一定的盲目性。因此，在化療前針對不同的患者進行腫瘤藥敏試驗來選擇有效化療藥物進行化療顯得十分必要。為此,建立一種像細菌敏感試驗一樣,通過相對可靠的敏感試驗方法,對不同的病人準確篩選敏感的化療藥物，並確定其劑量，真正實現臨床的個體化用藥。目前腫瘤藥敏試驗操作所需的藥物以臨用現配為主，腫瘤藥敏試驗需要測試多種抗腫瘤藥物，藥液配製稀釋繁瑣，且腫瘤藥敏試驗所需抗腫瘤藥物劑量小，取樣不便。部分藥物溶液狀態下保存時間短，剩餘部分只能報廢，造成藥物的浪費，尤其是價格昂貴的藥物。現有技術公開的腫瘤藥敏測試方法，主要是採用試劑盒。例如，CN93111551.5公開了腫瘤化療藥物敏感預測試劑配製方法及試劑盒，該專利將8種常用抗腫瘤藥物按設定劑量預裝於標本瓶內。但該方法不便於聯合化療方案的測試，且不便於方案的劑量調整。專利CN03102260.X採用預製藥敏檢測板的方法，將抗腫瘤藥物按計算劑量加入檢測板內，凍幹、包裝，用於腫瘤藥敏試驗。該方法同樣不便於聯合化療方案的測試，不便於方案的劑量調整，而且所使用方法無法真正解決無菌問題，不符合細胞培養的無菌要求。由於培養板中所加的藥物的量比較少，凍幹過程中各種藥物粉塵相互交叉汙染，使實際診斷結果可疑。臨床目前有少量採用抗腫瘤藥物臨時配製的方法進行抗腫瘤藥物藥敏測試，但是，該方法存在許多問題:配製藥物的準確濃度未知，所配製藥液的準確性存疑；配製所使用的藥物多為臨床使用製劑，製劑中輔料的會干擾對最終結果的判斷；臨床口服抗腫瘤藥物的抗腫瘤藥物藥敏測試無法進行；個體操作誤差大。

發明內容
為了克服現有技術中抗腫瘤藥物藥敏測試存在的缺陷，本發明提供一種提高抗腫瘤藥物藥敏測試的操作效率、靈活性、準確性和經濟性的方法。本發明方案如下:本發明提供了一種抗腫瘤藥物藥敏測試的方法，包括將抗腫瘤藥物溶解於含腫瘤細胞的細胞培養液中以使抗腫瘤藥物與腫瘤細胞充分接觸的步驟，其特徵在於所述的抗腫瘤藥物是通過製成無菌速溶型藥膜形式溶解於所述的細胞培養液中。細胞培養液沒有特別限制，可以為常用的細胞培養液，例如RPMI1640、DMEM、199、MEM、F12、L-15等細胞培養液。本發明上述方法，抗腫瘤藥物製成無菌速溶型藥膜，藥膜易溶解於細胞培養液。膜的厚度和面積控制在合適的範圍，保證溶解速度和機械強度。本發明上述所述的方法，其中所述的無菌速溶型藥膜厚度0.0lmm Imm,優選0.04mm 0.15mm ;面積0.2cm2 25cm2，優選0.5cm2 16cm2 ；lcm2的藥膜在Iml細胞培養液中於5分鐘、優選3分鐘、更優選100秒內完全溶解。藥膜形狀可為圓形、正方形或長方形，可適應各種相應規格的細胞培養板。本發明上述所述的方法，其中所述的無菌速溶型藥膜按重量百分比含0.0001% 30%抗腫瘤藥物、50% 98%成膜材料和1% 20%增塑劑。其中所述的成膜材料選自聚乙烯醇、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮等，優選聚乙烯醇，特別是聚乙烯醇04-88或者聚乙烯醇05-88。其中，上述所述的成膜材料，為易溶於水的成膜材料，考慮到製備工藝難度和成膜性能，更優選的是聚乙烯醇，羥丙甲纖維素、聚乙烯吡咯烷酮。鑑於膜的溶解性能、機械性能等，更優選聚乙烯醇，特別是聚乙烯醇04-88、聚乙烯醇05-88。聚乙烯醇隨著聚合度的升高，水中溶解性下降，成膜後強度增加。聚乙烯醇04-88和聚乙烯醇05-88在水中的溶解性較好,又有足夠的成膜強度。對於在膜中含量較低，對膜強度影響較小的藥物，聚乙烯醇04-88可以很好的滿足要求，對於在膜中含量較高，對膜強度影響較大的藥物，則使用聚乙烯醇05-88提高膜強度，部分或全部替換聚乙烯醇04-88。所述的增塑劑選自甘油、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、山梨醇、檸檬酸三乙酯等；最優選的是甘油。本發明上述所述的方法，其中所述的抗腫瘤藥物沒有特別限制，可以是各種抗腫瘤藥物，例如選自如下中的一種或者兩種以上:氟尿嘧啶、替加氟、二喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、甲氨蝶呤、白消安、阿黴素、柔紅黴素、去甲柔紅黴素、表阿黴素、吡柔比星、米託蒽醌、放線菌素D、博萊黴素、平陽黴素、絲裂黴素、光輝黴素、橄欖黴素、鏈脲黴素、氮芥、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、環磷醯胺、異環磷醯胺、塞替派、卡莫司汀、洛莫司汀、阿糖胞苷、氟脲苷、環胞苷、氯環胞苷、氟達拉濱、吉西他濱、多西他賽、長春瑞濱、長春地辛、長春新鹼、紫杉醇、喜樹鹼、羥基喜樹鹼、順鉬、奧沙利鉬、卡鉬、奈達鉬、樂鉬、庚鉬、利妥昔單抗、替伊莫單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗、白介素_2、醋酸亮丙瑞林、醋酸戈舍瑞林、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、福美坦、依西美坦、鬼白噻吩甙、依託泊苷、噴司他丁、伊立替康、索拉菲尼、卡培他濱、地西他濱、培美曲塞二鈉、丙卡巴肼、三尖杉酯鹼、沙利度胺、氮烯咪胺、三苯氧胺、替莫唑胺、拓撲替康、吉非替尼、厄洛替尼、氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、依西美坦、亞砷酸、靛玉紅等。 藥敏測試中的細胞培養液，是用於培養腫瘤細胞的液體培養基,細胞培養液的主要成分是胺基酸、葡萄糖、無機鹽、維生素和微量元素等。為了維持穩定的PH，培養液中一般有一個PH緩衝系統，同時常加入少量的酚紅作為pH指示劑；另外培養液中一般需要加入一定量的血清或特殊的促細胞生長因子。合適的腫瘤細胞培養液例如可以為RPMI1640(加10% 20%胎牛血清和/或加0.03%穀氨醯胺)、DMEM、199、MEM、F12、L-15等，最為常用的是RPMI1640加10% 20%胎牛血清。由於腫瘤細胞的特殊性，在培養過程中，細胞培養液中常需要適當添加促細胞生長因子，見表I。表I常用的促細胞生長因子及使用的終濃度
權利要求
1.一種抗腫瘤藥物藥敏測試的方法，包括將抗腫瘤藥物溶解於含腫瘤細胞的細胞培養液中以使抗腫瘤藥物與腫瘤細胞充分接觸的步驟，其特徵在於所述的抗腫瘤藥物是通過製成無菌速溶型藥膜形式溶解於所述的細胞培養液中。
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述的無菌速溶型藥膜厚度0.0lmm 1mm，面積0.2cm2 25cm2，Icm2的藥膜在Iml細胞培養液中於5分鐘、優選3分鐘、更優選100秒內完全溶解。
3.根據權利要求1 2所述的方法，其中所述的無菌速溶型藥膜按重量百分比含0.0001% 30%抗腫瘤藥物、50% 98%成膜材料和1% 20%增塑劑。
4.根據權利要求1 3所述的方法，其中所述的抗腫瘤藥物選自如下中的一種或者兩種以上:氟尿嘧啶、替加氟、二喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、甲氨蝶呤、白消安、阿黴素、柔紅黴素、去甲柔紅黴素、表阿黴素、批柔比星、米託蒽醌、放線菌素D、博萊黴素、平陽黴素、絲裂黴素、光輝黴素、橄欖黴素、鏈脲黴素、氮芥、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、環磷醯胺、異環磷醯胺、塞替派、卡莫司汀、洛莫司汀、阿糖胞苷、氟脲苷、環胞苷、氯環胞苷、氟達拉濱、吉西他濱、多西他賽、長春瑞濱、長春地辛、長春新鹼、紫杉醇、喜樹鹼、羥基喜樹鹼、順鉬、奧沙利鉬、卡鉬、奈達鉬、樂鉬、庚鉬、利妥昔單抗、替伊莫單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗、白介素_2、醋酸亮丙瑞林、醋酸戈舍瑞林、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、福美坦、依西美坦、鬼白噻吩甙、依託泊苷、噴司他丁、伊立替康、索拉菲尼、卡培他濱、地西他濱、培美曲塞二鈉、丙卡巴肼、三尖杉酯鹼、沙利度胺、氮烯咪胺、三苯氧胺、替莫唑胺、拓撲替康、吉非替尼、厄洛替尼、氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、依西美坦、亞砷酸、靛玉紅等。
5.一種用於抗腫瘤藥物藥敏測試的無菌速溶型藥膜，按重量百分比含0.0001% 30%抗腫瘤藥物、50% 98%成膜材料和1% 20%增塑劑，其特徵在於其中所述的成膜材料選自聚乙烯醇、羥丙甲纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮等；所述的增塑劑選自甘油、聚乙二醇、 乙二醇、丙二醇、山梨醇、檸檬酸三乙酯等。
6.根據權利要求5所述的無菌速溶型藥膜,其特徵在於藥膜的厚度0.0lmm Imm,面積0.2cm2 25cm2，Icm2的藥膜在Iml細胞培養液中於5分鐘、優選3分鐘、更優選100秒內完全溶解。
7.根據權利要求5 6所述的無菌速溶型藥膜，其中所述的抗腫瘤藥物選自如下中的一種或者兩種以上:氟尿嘧啶、替加氟、二喃氟啶、去氧氟尿苷、卡莫氟、甲氨蝶呤、白消安、阿黴素、柔紅黴素、去甲柔紅黴素、表阿黴素、吡柔比星、米託蒽醌、放線菌素D、博萊黴素、平陽黴素、絲裂黴素、光輝黴素、橄欖黴素、鏈脲黴素、氮芥、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、環磷醯胺、異環磷醯胺、塞替派、卡莫司汀、洛莫司汀、阿糖胞苷、氟脲苷、環胞苷、氯環胞苷、氟達拉濱、吉西他濱、多西他賽、長春瑞濱、長春地辛、長春新鹼、紫杉醇、喜樹鹼、羥基喜樹鹼、順鉬、奧沙利鉬、卡鉬、奈達鉬、樂鉬、庚鉬、利妥昔單抗、替伊莫單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗、白介素-2、醋酸亮丙瑞林、醋酸戈舍瑞林、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、福美坦、依西美坦、鬼臼噻吩甙、依託泊苷、噴司他丁、伊立替康、索拉菲尼、卡培他濱、地西他濱、培美曲塞二鈉、丙卡巴肼、三尖杉酯鹼、沙利度胺、氮烯咪胺、三苯氧胺、替莫唑胺、拓撲替康、吉非替尼、厄洛替尼、氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、依西美坦、亞砷酸、靛玉紅等。
8.一種製備權利要求5 7所述的無菌速溶型藥膜的方法，其包括如下步驟: (I)將成膜材料加入水中，攪拌溶解或加熱溶解；(2)加入增塑劑和抗腫瘤藥物，攪拌溶解均勻，採用加熱、靜置或超聲等方式脫氣； (3)將上述溶液塗布於制膜設備，採用熱風或冷風等方式乾燥； (4)脫膜，測定含量，並按照測定結果進行分劑量分割； (5)將分割後的藥膜採 用放射線照射滅菌或環氧乙烷滅菌,優選放射線照射滅菌。
9.權利要求5 7所述的無菌速溶型藥膜用於抗腫瘤藥物藥敏測試的用途。
10.根據權利要求9所述的用途，其中藥膜可直接用於腫瘤細胞藥敏測試，或者必要時將藥膜溶解後加入藥物代謝酶活化後進行腫瘤細胞藥敏測試。
全文摘要
本發明提供一種無菌速溶型藥膜，應用該藥膜進行抗腫瘤藥物藥敏測試的方法，並還提供了該無菌速溶型藥膜用於抗腫瘤藥敏測試的用途。本發明所述的抗腫瘤藥物藥敏測試的方法，包括將抗腫瘤藥物溶解於含腫瘤細胞的細胞培養液中以使抗腫瘤藥物與腫瘤細胞充分接觸的步驟，其特徵在於所述的抗腫瘤藥物是通過製成無菌速溶型藥膜形式溶解於所述的細胞培養液中。本發明通過將抗腫瘤藥物製成無菌速溶型藥膜進行抗腫瘤藥物藥敏測試，提高了抗腫瘤藥物藥敏測試的操作效率、靈活性、準確性和經濟性。
文檔編號C12Q1/02GK103088102SQ20131000675
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月9日 優先權日2013年1月9日
發明者王守立, 戚文榮, 宋任波, 陶徵宇, 鄧鋼, 邱瑞寶, 吳明輝 申請人:蘇州麥克威爾生物醫藥科技有限公司