治療急性和慢性炎症疾病的藥物的製作方法

2023-12-01 18:53:31 7

專利名稱：治療急性和慢性炎症疾病的藥物的製作方法
技術領域：
本發明是關於某些N-取代的煙醯胺化合物及其適於藥用的酸加成鹽在治療哺乳動物(包括人)的急性和慢性炎症中的應用。
具有下列結構式的N-3-(4-甲氧苄基)-2-[4-氟代苯氧基]煙醯胺。
及其它N-取代煙醯胺化合物在1989年8月29日公告的美國專利4,861,891中提及。此專利是關於使用上述這些化合物作為IV型磷酸二脂酶(PDEIV)的選擇性抑制劑。此專利在此將全面引作參考。
N-取代煙醯胺化合物，包括N-3-甲氧苄基-2-苯氧基煙醯胺，在下文中將稱做「式1化合物」，這類化合物還可用於在U-937細胞中增加PGE1的效用-提高誘導環AMP的水平及在人類嗜酸性細胞中抑制白三烯合成和介質釋放。這些化合物在雪貂中也具有減緩催吐反應的作用。
本發明是關於在哺乳動物(特別是人)中抑制IV型磷酸二脂酶或抑制產生腫瘤壞死因子(TNF)的一種方法，包括給於上述哺乳動物以抗炎劑量的一種化合物或其適於藥用的酸加成鹽，該化合物的結構式為
其中R3是1-哌啶基，1-(3-吲哚基)乙基，(C1-C4)-烷基、苯基、苄基、1-(1-苯乙基)或單取代苄基，其中的取代基為氯、氟、甲基或甲氧基、上述取代基在芳香環上；R4是二環[2.2.1]庚烷-2-基或如下類結構式
其中Y是氫、氟或氯；X是氫、氟、氯、甲氧基、三氟甲基、氰基、羧基、甲氨基甲醯基、二甲基-氨基甲醯基或(C1-C4)烷氧羰基。
本發明的一種優選的實施方案是在上述治療炎症的方法中使用的化合物，其R3為1-哌啶基或1-(3-吲哚基)乙基。
本發明的另一種優選方案是在上述方案使用的化合物中，其R3為1-(3-吲哚基)乙基及R4為二環[2.2.1]庚烷-2-基。
本發明的另一種優選方案是在上述方案中使用的化合物中，其R4為
其中Y是氫；X是(C1-C4)烷氧羰基。
本發明的另一種優選的方案是在上述方案中使用的化合物中，其R3是1-哌啶基和R4為
本發明的另一種優選方案是關於使用上述方法治療或預防下述這組疾病中的任一種疾病氣喘、慢性支氣管炎、特應性皮炎、蕁麻疹、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、春季結膜炎、嗜曙紅細胞肉芽瘤、牛皮癬、風溼性關節炎、膿毒性休克、潰瘍性結腸炎、心肌和大腦的克羅恩氏病再灌注損傷、慢性腎小球腎炎、內毒素休克、成人呼吸窘迫綜合症、尿崩症、多發性硬化和中樞神經系統紊亂、以及其它涉及產生TNF疾病，該方法包括給於病人以有效劑量的化合物或其適於藥用的酸加成鹽，該化合物的結構式為
其中R3是1-哌啶基，1-(3-吲哚基)乙基，(C1-C4)-烷基，苯基，苄基，1-(1-苯乙基)或單取代苄基，其中的取代基為氯，氟，甲基或甲氧基，上述取代基在芳香環上；R4是二環[2.2.1]庚烷-2-基或下式結構的基團
其中Y是氫，氟或氯；以及X是氫、氟、氯、甲氧基、三氟甲基、氰基、羧基、甲基氨基甲醯基、二甲基-氨基甲醯基或碳(C1-C4)烷氧基。
式1化合物及其適於藥用的酸加成鹽可以按照前述美國專利4,861,891中所述之方法製備。
IV型磷酸二脂酶抑制劑可用於治療各種過敏性和炎症疾病，其中包括氣喘、慢性支氣管炎、特應性皮炎、蕁麻疹、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、春季結膜炎、嗜曙紅細胞肉芽瘤、牛皮癬、風溼性關節炎、膿毒性休克、潰瘍性結腸炎、心肌和大腦的克羅恩氏病再灌注損傷、慢性腎小球性腎炎、內毒素休克和成人呼吸窘迫綜合症。此外，PDE IV抑制劑還用於治療尿崩症，多發性硬化和中樞神經系統紊亂，如抑鬱症和多發性梗塞性疾呆症。
IV型磷酸二脂酶抑制劑顯示出能抑制腫瘤壞死因子(TNF)的產生。式1化合物也可用於治療一些病毒感染，這些病毒對TNF的增多敏感或引發體內TNF的產生。這裡為治療所關注的這些病毒是那些產生TNF引起感染的病毒或者是那結對式1的TNF抑制劑所產生的抑制敏感的病毒，所說的抑制如直接或間接地由減少複製而產生的抑制。上述這些病毒包括但並非限於HIV-1，HIV-2和HIV-3，巨細胞病毒(CMV)，流感病毒，腺病毒及皰疹(Herpes)病毒群，例如，但不限於，帶狀皰疹和單純性皰疹。
本發明更具體的是關於一種治療受人的免疫缺損病毒(HIV)感染的哺乳動物的方法，包括給於該哺乳動物以抑制TNF有效劑量的式1化合物。
式1化合物也可用於動物(除人之外)需要抑制TNF產生的獸醫治療。治療或是預防由TNF引起的動物的疾病，包括上述那些疾病，特別是一些病毒感染。這些病毒包括(但不限於)貓的免疫缺損病毒(FIV)，或其它逆轉呆病毒感染，例如馬的感染性貧血病毒，羊的關節炎病毒，綿羊髓鞘脫落病毒，梅迪病毒和其它慢性病毒。
當酵母菌和真菌對TNF增多敏感或將誘導體內TNF的產生時，式1化合物也可用於治療這些酵母菌和真菌的感染。一種適宜治療的疾病是真菌性腦膜炎。另外，式1化合物也可與其它治療全身性酵母菌和真菌感染的藥物合併用藥。用於真菌感染的藥物包括(但並不限於)多粘菌素類化合物，如多粘菌素B；咪唑類化合物，如克黴唑、益康唑、咪康唑和酮康唑；三唑類化合物，如氟康唑和伊康唑，以及二性黴素類藥物，特別是二性黴素B和二性黴素B的脂質體製劑。
抗真菌藥和式1化合物的一種合用時，可以用任何一種優選的成分組成，例如本領域技術人員所熟知的一些配方，如二性黴素B的各種配方。抗真菌藥和式1化合物的合用，可以是同時作用，或者在實用中分次給哺乳動物用藥，但以一種連續的方式進行。特別是式1化合物可與二性黴素B的某種製劑合用，主要用於治療全身性真菌感染。治療用的優選微生物是念珠菌類(Candida)。式1化合物可按類似的方式與抗病毒藥物或抗細菌藥物合用。
通過對需要治療的哺乳動物給於有效劑量的式1化合物，還可以抑制和/或降低抗真菌藥物、殺菌藥物或抗病毒藥物的毒性。最好將一種式1化合物用於抑制或降低二性黴素類藥物的毒性，特別是二性黴素B的毒性。
本發明的方法包括給某哺乳動物使用式1化合物及其適於藥用的酸鹽，以及這些化合物及其鹽的溶劑化物(這裡統稱為「治療藥劑」)。在給所說的哺乳動物使用這些治療藥劑時，可以單獨使用，或者最好是按照規範的製藥方法將其與適於藥用的載體或稀釋劑配合後使用。給藥可以經各種途徑。包括口服，非胃腸道給藥和局部給藥。這裡使用的非胃腸道給藥包括但並限於靜脈注射，肌肉注射，腹腔注射，皮下注射和透皮給藥，但一般最好是口服使用這些物治療藥劑。
這類治療藥物的最佳用途是用於治療急性和慢性的炎症疾病，按照本發明，給藥劑量在約5-約250mg/天之間，最好是約20-約120mg/天，單次或分次服用。對鼻內或用吸入器給藥，一般將其製成0.1-1％(W/V)的溶液型製劑。臨床上醫生將決定最適於某一病人的實際劑量，這個劑量隨具體病人的年齡，體重和對用藥反應的不同而有所不同。上述劑量是一般情況的典型，當然要考慮給於更高或更低劑量的個別病例是存在的。所有這些劑量都屬於本發明的範疇。
在某些病例中，劑量低於前述劑量範圍的低限可能就已經足夠了，而在另外一些病例中高於上述劑量範圍的用藥也可能不引起任何有害的或有毒的副作用，只要高劑量先分成若干小劑量並在一天內分次服用。
對於口服給藥，片劑中含賦形劑如檸檬酸鈉、碳酸鈣和磷酸二鈣，各種崩解劑如澱粉，最好是馬鈴薯或木薯澱粉，海藻酸和某些矽酸鹽複合物，以及粘合劑如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明膠和阿拉組膠。另外，在製片時潤滑劑例如但並不限於硬脂酸鎂、月桂醇硫酸鈉和滑石粉通常可能是非常有用的。一些類似的固體成分作為填充劑也可用於軟明膠膠囊和硬明膠膠囊的製備中，推薦使用的這類輔料包括但並不限於乳糖(lastose或milk sugar)以及高分子量的聚乙二醇。當需要口服應用的水型混懸劑和/或酏劑時，基本的活性組分可以與各種甜味劑或芳香劑、著色劑或染料、必要時還有乳化劑和/或混懸劑，以及諸如水、乙醇、丙二醇和甘油等稀釋劑及其各種的混合物一起配製後使用。
對非胃腸道給藥，治療藥物可以做成芝麻油，花生油的溶液或含水丙二醇溶液來給藥，也可以將上述列舉的治療藥物中相應的水溶性鹼基鹽做成無菌水溶液來給藥。必要時，這些水溶液應加入緩衝劑，並用充足的鹽水或葡萄糖調成等滲壓的。這些水溶液特別適於靜脈、肌肉和皮下注射。在注射劑的製備方面，無菌的注射用水可以通過一些為本領域的技術人員所熟知的規範技術很容易獲得。例如，蒸餾水通常用作溶液稀釋劑，最後經過適當的除菌濾器過濾，這些濾器有燒熔玻璃濾器，或者一種硅藻土或無釉瓷濾器。比較好的這類濾器包括Berkefeld Chamberland和Asbestos Disk-Metal Seitz公司的濾器，使用時用一個泵將液體通過濾器抽入一個無菌容器中。在整個製備過程中，必須採取必要的措施以確保最後的注射液產品在無菌狀態下獲得。
對於透皮給藥，某種特殊治療藥物的劑型可以包括(舉例而言)溶液，洗劑、軟膏，乳膏劑、凝膠、栓劑以及限速緩釋製劑和裝置。這些劑型含有特定的化合物，還可能含有乙醇、水、滲透促進劑和惰性載體，如產生凝膠的物質，礦物油、乳化劑，苯甲醇及類似物。一些特效透皮吸收增強成分在歐洲專利申請271,983和331,382中披露，它們分別公布於1988年6月22日和1989年9月6日。現將這些申請全面引用於此。
式1化合物抑制PDE IV的能力及展現降低催吐活性的能力可依下述方法分別測定。
IV型磷酸二脂酶(PDE IV)的抑制人的重組PDE IV表現在一種杆狀病毒/SF-9細胞系統中(Pollok BFuogE，Robbins M，Fisher D，Umland J.PillarJ and ChengJBaculovirus expressionof human phosphodiesterase(PDE)IV isoenzymescomparison with PDE IVproduced in mammalian and bacterial expression system Baculovirus and InsectCell Gene Expression Conference，Pinehurst，N.C.March 26-30，1995)。SF-9細胞溶解液能夠水解環AMP(cAMP)，並對環GMP(cGMP)沒有作用。這些酶的動力學分析表明，水解cAMP的米氏常數(Michaelis constant)Km為0.5-4mM範圍。該酶對氯化鎂敏感，並被標準的PDE IV抑制劑咯利普蘭(rolipram)所抑制。這些製劑用於評價被測化合抑制PDE IV的能力。
測試化合物的製備化合物溶於二甲亞碸，濃度為10-2M，然後以1∶25的比例用水稀釋(4×10-2M濃度的化合物，4％的二甲亞碸)。在4％二甲亞碸中再進一步做一系列稀釋以獲得需要的濃度。測試試管中二甲亞碸的最終濃度為1％。
三個平行組中，在4℃下向每個12×75mm玻璃試管依次加入下列物質(給出的所有濃度為測試管中最終濃度)25μl化合物或二甲亞碸(1％，用於對照和空白)25μl測試緩衝液(50μM Tris，10mM氯化鎂，pH7.5)25μl[3H]-環AMP(1μM)25μ1PDEIV酶(用於空白，酶在沸水浴中予先保溫10分鐘。
振蕩反應試管並將其置於37℃水浴中10-30分鐘，然後將試管置於沸水浴中2分鐘終止反應。在冰浴中向每管加入洗滌緩衝液(0.5ml，0.1MHEPES/0.1M氯化鈉，pH8.5)將每支試管中的內容物上樣到予先用洗滌緩衝液平衡的Affi-Gel 601柱(硼化親和凝膠，1.2ml柱床體積)。用2×6ml洗滌緩衝液衝洗[3H]環AMP，然後用6ml 0.25M乙酸洗脫[3H]5′AMP。混勻後，在一個合適的小瓶中把1ml的洗脫液加到3ml原子光閃爍液中，混勻並進行[3H]計數。
用下式確定抑制百分率
IC50意義為抑制[3H]CAMP水解至[3H]5′AMP達50％的化合物濃度。
在某一實驗中，使用類似於Thompson等人發表的一步酶檢驗方法評價了被試化合物對PDE IV的抑制作用(Thompson JW，BrokkerG，and ApplemanMMAssay of cyclic nucleotide phosphodiesterases with radioactire substrates.Methods in Enzymology 38205-212，1974)。
對化合物的環AMP(cAMP)升高的評估獲得在連續培養中生長的人U937細胞，將其在22℃溫度下在SorvallRT6000B上以1400轉/(rpm)離心5分鐘。棄去上清液，將該細胞沉澱再懸浮於加有2％胎牛血清(此後稱FBS)的RPM1 1640培養基中。用血細胞計數器將細胞計數並檢測存活度。向細胞懸液中加入適當體積的RPM1＋2％FBS，使細胞濃度為106細胞/ml。在平行的兩組或之組試樣中，把500ml懸液(5×105細胞)加入到12×75mm玻璃試管，其中含有5μl+/-被試化合物。將該混合物在37℃下保溫15分鐘。加入1μl PGE1，再保溫15分鐘，然後將試管置於沸水浴中10分鐘。
試管在Sorvall RT6000B中以3700rpm離心10分鐘。小心取10μl上清液進行放射免疫測試(此後稱RIA)。用cAMP RIA試劑盒(new Enngland Nuclearcat no.NEK-033)定量每支試管的cAMP。接著根據試劑盒中RIA手冊所述的非乙醯化測試方法作修正。
校正稀釋液和細胞濃縮物的cAMP，以每1×106細胞產生的皮摩爾(pmol)cAMP表示，也算出每個試樣的平均值+/-標準誤差(如果適用)。計算兩種衡量化合物效力的指標(EC50或PC50)中的任何一種。EC50是扣除基線應答後，產生50％任意最大應答(如10mM咯利普蘭產生的cAMP濃度)的化合物濃度。PC50是扣除基線響應後，產生該化合物50％最大應答的化合物濃度。被測化合物的最大應答必須至少為基線應答的150％。以便計算PC50。
化合物對產生EDN/LTE4抑制作用用真空管#6480(143 USP Units Sodium Heparin，10ml draw)從健康的捐獻者得到100ml血液。肝素處理的全血在室溫下倒入矽化的玻璃燒杯或50ml錐形離心管中。用Diff-Ouik方法進行全血塗片，確定單核白細胞總數中嗜曙紅細胞的百分比。在平行三組中，把1ml全血加到含有1μl＝甲亞碸或1μl1000×被試化合物的12×75mm聚丙烯或矽化玻璃管中。混勻後將試管置於37℃振蕩水浴中15分鐘。在所有的試管中加入溶於二甲亞碸的1μlPGE1，使最終濃度為1μM或0.1μM PGE1。混勻後，試管中加入100μl PBS(陰性對照)或懸於PBS的葡聚糖G-15球(最終濃度8.25-16.5mg/ml)。混勻後所有試管於37℃振蕩水浴中保溫1-2小時。
培育的最後，向每個測試管中加入20μl溶於PBS的15％乙二胺四乙酸，最終濃度為0.3％。混勻後，所有測試管於22℃以2000rpm離心5分鐘。
測定所有血漿上清液的EDN水平。根據試劑盒製造商的說明(KabiPharmacia Diagnostics)以所有比推薦的少5倍的體積(如10μl未知樣品的體積)進行EPX RIA。EDN和EPX已被證明是相同的蛋白(Dahl et al.，AsthmaBasic Mechanisms and Clinical Management 2nd ed.p112，1992)。用MicrosoftExcel或其它合適軟體，通過與標準曲線相比較來計算EDN水平，表示為ng/ml。用下式計算對照的EDN釋放的百分比％對照EDN＝(EDN樣品－EDN空白)/(EDN總量－EDN空白)其中EDN空白是沒有葡聚糖G-15的EDN釋放，EDN總量是葡聚糖G-15存在時的EDN釋放。若適用的話，用Microsoft Excel或其它合適的軟體確定被試化合物的IC50。
LTE4酶免疫測定(EIA)對所有血漿上清液進行LTE4水平檢測。根據試劑盒製造商的說明(Cayman Chemical)，使用在EIA緩衝液中1∶10的血漿樣品稀釋液作為未知樣品進行LTE4 EIA。可使用其它LTE4標準品而不是試劑盒提供的標準品。用Microsoft Excel或其它合適軟體，通過與標準曲線比較計算LTE4水平，並表示為ng/ml。用下式計算對照LTE4的釋放百分率％對照LTE4＝(LTE4樣品－LTE4空白)/(LTE4總量－LTE4空白)其中LTE4空白是沒有葡聚糖G-15的LTE4釋放。LTE4總量是有葡聚糖G-15時的LTE4釋放。如果適用的話，用Microsoft Excel或其它適當的軟體確定被試化合物的IC50。
化合物催吐活性的評價把被試化合物給於五隻雄性雪貂(口服或腹腔給藥)，然後將其置於單獨的有機玻璃籠中，口服給藥的載體是含2％Tween 80的3ml蒸餾水。腹腔給藥的載體是3ml蒸餾水。
在研究期間(典型為60分鐘)連續觀察動物。記錄下列行為(1)大量嘔吐，(2)乾嘔(逆著封閉的呼吸聲門作無痰的有節奏的腹部收縮)，(3)張口作嘔，動物張開口，逆著封閉的聲門收緊(這不包括有節奏的腹部收縮)。對於每隻動物，記錄每種行為的數目和發生嘔吐的時間。其它行為也要記錄。
雪貂7天內不再作試驗。用PDE IV抑制劑咯利普蘭的研究表明，雪貂可以每周接受此催吐刺激三次而在第四周不表現對鹽水的嘔吐。給於雪貂咯利普蘭四周後，第五周對鹽水刺激提早發生嘔吐。因此用於此篩選試驗的動物只能給於催吐刺激三次，然後從群體中撤出。
如果需要血漿藥物水平，動物用甲苯噻嗪(Rompum)和氯胺酮(Ketamine)麻醉。然後用標準心臟穿刺技術從心臟取1ml血液。
數據表示為每組5隻動物的嘔吐，乾嘔和張口作嘔的數目。計算嘔吐，乾嘔或張口作嘔的動物與動物總數的比值為[(產生嘔吐的數目/試驗組中的總數)×100]
權利要求
1.下式化合物或其適於藥用的酸加成鹽用於製備在哺乳動物特別是人中抑制IV型磷酸二脂或抑制產生腫瘤壞死因子的藥物
其中R3是1-哌啶基、1-(3-吲哚基)乙基、(C1-C4)烷基、苯基、苄基、1-(1-苯乙基)或單取代的苄基，其取代基為氯、氟、甲基或甲氧基，所述取代基在芳香環上；R4是二環[2.2.1]庚烷-2-基或以下結構式的基團
其中Y是氫、氟、氯；x是氫、氟、氯、甲氧基、三氟甲基、氰基、羧基、甲氨基甲醯基、二甲氨基甲醯基或(C1-C4)烷氧羰基。
2.按照權利要求1的用途，其中被使用的化合物是一種R3為1-哌啶基或1-(3-吲哚基)乙基的化合物。
3.按照權利要求1的用途，其中被使用的化合物是一種R3為1-(3-吲哚基)乙基和R4為二環[2.2.1]庚烷-2-基的化合物。
4.按照權利要求1的用途，其中被使用的化合物是一種R4為下式的化合物
其中Y是氫和X是(C1-C4)烷氧羰基。
5.按照權利要求1的用途，其中被使用的化合物是一種R3為1-哌啶基和R4為下式的化合物
6.按照權利要求1的用途，其中所製備的藥物用於治療或預防下述這組疾病中的任一種疾病，這些疾病是氣喘、慢性支氣管炎、特應性皮炎、蕁麻疹、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、春季結膜炎、嗜曙紅細胞肉芽瘤、牛皮癬、風溼性關節炎、膿毒性休克、潰瘍性結腸炎、心肌和大腦的克羅恩氏病再灌注損傷、慢性腎小球性腎炎、內毒素休克、成人呼吸窘迫綜合症、尿崩症、多發性硬化和中樞神經系統紊亂、以及其它涉及產生TNF疾病，所說藥物含有下式結構的化合物或其適於藥用的酸加成鹽
其中R3是1-哌啶基，1-(3-吲哚基)乙基，(C1-C4)烷基、苯基，苄基、1-(1-苯乙基)或單取代苄基，其中取代基為氯、氟、甲基或甲氧基，所述取代基在芳香環上；R4是二環[2.2.1]庚烷-2-基或具有以下結構的基團
其中Y是氫、氟或氯；及X是氫、氟、氯、甲氧基、三氟甲基、氰基、羧基、甲氨基甲醯基、二甲氨基甲醯基或(C1-C4)烷氧羰基。
全文摘要
本發明是關於治療哺乳動物特別是人的炎症疾病的方法，包括給於上述哺乳動物一種抗炎劑量的具有以下結構式的化合物或其適於藥用的酸加成鹽，其中R
文檔編號A61P13/02GK1157136SQ9611244
公開日1997年8月20日 申請日期1996年10月17日 優先權日1995年10月27日
發明者約翰·B·陳, 安東尼·馬菲特, 約翰·W·沃森 申請人:美國輝瑞有限公司