一種全緣葉細筒苣苔葉片組培兩步成苗法
2023-12-08 16:19:11
一種全緣葉細筒苣苔葉片組培兩步成苗法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物技術領域，具體地，涉及一種全緣葉細筒苣苔葉片組培兩步成苗 法。
【背景技術】
[0002] 全緣葉細筒苣苔為苦苣苔科細筒苣苔屬多年生草本植物，根狀莖近圓柱形，葉片 草質，基部近圓形或淺心形，邊緣全緣，花冠紫色，花期6月，果期6月。中國特有珍稀植物，特 產廣西龍州，生於石灰巖山地林下巖壁上，海拔約為530m。
[0003] 全緣葉細筒苣苔分布區域極其狹窄，目前僅在廣西龍州地區石灰巖山陡崖上發現 少量植株，由於生長環境惡劣缺少水肥，加之其種子細小，萌發需要的溫度範圍、溼度範圍 和土壤酸鹼度範圍比較小，自然界難以進行有性繁殖，急需建立有效的繁育和保護體系，本 發明旨在通過組織培養技術葉片兩步成苗法對全緣葉細筒苣苔種質資源進行有效的繁育 和保護，是目前對全緣葉細筒苣苔育苗最便捷、穩定的手段，可以節約大量的人力、物力和 場地，便於種質交換和轉移，避免有害病蟲的人為傳播。
【發明內容】
[0004] 本發明目的在於提供一種全緣葉細筒苣苔葉片組培兩步成苗法，能夠短時間內提 供大量優質適合栽培的全緣葉細筒苣苔種苗。
[0005] 為了實現上述目的，本發明提供了如下技術方案： 全緣葉細筒苣苔葉片組培兩步成苗法，其特徵在於： (1) 葉片誘導分化不定芽培養:取全緣葉細筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，無菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,無菌水2~3次，0.1% Hgch 3min，無菌水2~3次衝 洗幹後切分為0.5 cmX I cm大小接種在誘導及分化培養基上，在溫度為22~26°C，光照強度 1800~26001ux，光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽； (2) 不定芽壯苗生根培養:選擇全緣葉細筒苣苔葉片分化1~1.5個月，具有2片以上葉 子、高1.5~3cm不定芽接種到壯苗生根培養基，在溫度為22~26° C，光照強度2000~28001UX， 光照時間為8~10小時/天的條件下進行培養，1~2個月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。
[0006] 採用本發明方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內提供大量全緣葉細筒苣 苔的優質種苗，並減少了配製培養基和轉瓶的步驟，節約了大量人力物力，因此簡單易行、 生產成本降低，有效解決了全緣葉細筒苣苔規模化育苗及種質資源保存問題。
【具體實施方式】
[0007] 下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。
[0008] 全緣葉細筒苣苔葉片組培兩步成苗法法，包括以下步驟： (1)葉片誘導分化不定芽培養:取全緣葉細筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，無菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,無菌水2~3次，0.1% Hgch 3min，無菌水2~3次衝 洗幹後切分為0.5 cmX I cm大小接種在誘導及分化培養基上，在溫度為22~26°C，光照強度 1800~26001ux，光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽。
[0009] 表1不同激素對不定芽數的影響
注:芽增殖倍數=(30天後芽數一接種時芽數)/接種時芽數 (2)不定芽壯苗生根培養:選擇全緣葉細筒苣苔葉片分化1~1.5個月高1.5~3cm不定芽 接種到壯苗生根培養基，在溫度為22~26° C，光照強度2000~28001UX，光照時間為8~10小時/ 天的條件下進行培養，1~2個月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。
[0010] 表2不同激素水平對不定芽生根效果的影響
當無菌苗每株生根4條以上、根長達2.5~4cm時，打開瓶蓋，在室內煉苗3~4天後，將組培 苗從培養瓶中取出，洗去培養基，將其移栽至滅菌的栽培基質中。
[0011] 備註：6-BA(6-苄氨基嘌呤），NAA(萘乙酸），KT(激動素），IAA(B引噪乙酸），AC (活性炭）。
【主權項】
1. 一種全緣葉細筒苣苔葉片組培兩步成苗法，其特徵在於： (1) 葉片誘導分化不定芽培養:取全緣葉細筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，無菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,無菌水2~3次，0.1% Hgcl2 3min，無菌水2~3次衝 洗幹後切分為0.5 cmX 1 cm大小接種在誘導及分化培養基上，在溫度為22~26°C，光照強度 1800~26001ux，光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽； (2) 不定芽壯苗生根培養:選擇全緣葉細筒苣苔葉片分化1~1.5個月，具有2片以上葉 子、高1.5~3cm不定芽接種到壯苗生根培養基，在溫度為22~26° C，光照強度2000~28001UX， 光照時間為8~10小時/天的條件下進行培養，1~2個月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。
【專利摘要】一種全緣葉細筒苣苔葉片組培兩步成苗法：取全緣葉細筒苣苔幼嫩葉片作為外植體進行滅菌處理，然後將其切分後接種到誘導及分化培養基上，1~1.5個月後選擇幼嫩葉片上分化出的具有2片以上葉子、高1.5~3cm的無菌芽苗轉接到壯苗生根培養基上；當無菌苗每株生根4條以上、根長達2.5~４cm時，打開瓶蓋，在室內煉苗３~４天后，將組培苗從培養瓶中取出，洗去培養基，將其移栽至滅菌的栽培基質中。採用本發明方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內提供大量全緣葉細筒苣苔的優質種苗，並減少了配製培養基和轉瓶的步驟，節約了大量人力物力，因此簡單易行、生產成本降低，有效解決了全緣葉細筒苣苔規模化育苗及種質資源保存問題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105706930
【申請號】CN201610108544
【發明人】李翠, 張佔江, 呂惠珍, 繆劍華, 韋瑩, 韋坤華, 李林軒, 王一諾, 肖冬
【申請人】廣西壯族自治區藥用植物園