一種檢測鹽酸溴己新原料的細菌內毒素含量的方法
2023-12-09 11:26:01 1
一種檢測鹽酸溴己新原料的細菌內毒素含量的方法
【專利摘要】本發明的目的是提供一種靈敏、可靠的方法，能快速檢測出鹽酸溴己新原料中細菌內毒素的含量。方法具體操作如下：取鹽酸溴己新粉末，用DMSO(二甲基亞碸)溶解，進行預幹擾實驗，找出最大稀釋倍數；按找出的最大稀釋倍數1600倍，製備鹽酸溴己新供試液，與兩個不同廠家的靈敏度為0.25EU／ml的鱟試劑進行幹擾實驗，最終確認是否存在幹擾因素的影響，確認細菌內毒素的限度值；按照無幹擾時的最大有效稀釋倍數稀釋鹽酸溴己新溶液，再進行細菌內毒素檢查。
【專利說明】一種檢測鹽酸溴己新原料的細菌內毒素含量的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於微生物檢驗領域，涉及一種藥物原料鹽酸溴己新細菌內毒素檢測方法，也就是檢測鹽酸溴己新原料中細菌內毒素含量的方法。
【背景技術】
[0002]鹽酸溴己新是一種粘痰溶解劑，可直接作用於支氣管腺體，促使粘液分泌細胞的溶酶體釋出，使痰中的粘多糖纖維分化裂解，使痰液稀釋，易於咳出。臨床上主要用於急性及慢性支氣管炎、哮喘、支氣管擴張、肺氣腫，尤適用於白色粘痰咳出困難者及因痰液廣泛阻塞小支氣管引起的危重急症等。而細菌內毒素是一種能引起人體發熱、白細胞減少等一系列生理反應的物質。鹽酸溴己新作為注射劑藥物的原料時，應進行細菌內毒素含量的檢查控制。目前國內外沒有針對鹽酸溴己新原料進行細菌內毒素檢查的文獻報導。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是提供一種靈敏、可靠的方法，能快速檢測出鹽酸溴己新原料中細菌內毒素的含量。
[0004]本發明的鹽酸溴己新原料的細菌內毒素檢查方法是:取鹽酸溴己新，用DMSO(二甲基亞碸)溶解、製備成濃度為IOmg / ml的鹽酸溴己新溶液，再用細菌內毒素檢查用水分別稀釋至200、400、800、1600和3200倍，將此系列濃度溶液記為A。同時在上述試驗液中加入細菌內毒素標準溶液，使每一濃度的實驗液中均含有2 λ (λ為所用鱟試劑的標示靈敏度)濃度的細菌內毒素，記此系列溶液為B。取靈敏度為0.25EU / ml的兩個不同廠家的鱟試劑，分別與上述A和B進行反應，每一濃度重複兩管，並設陽性和陰性對照，進行預幹擾試驗，找出最大稀釋倍數。再按找出的最大稀釋倍數，製備鹽酸溴己新供試液。按《中華人民共和國藥典》二部附錄中的「細菌內毒素檢查方法」，與兩個不同廠家的靈敏度為0.25EU /ml的鱟試劑進行幹擾實驗，最終確認是否存在幹擾因素的影響，確認細菌內毒素的限度值；將鹽酸溴己新溶液用DMSO(二甲基亞碸)稀釋1600倍，作為供試品溶液，同時取上述供試品溶液，加入細菌內毒素標準溶液，使其含有2 λ (λ為所用鱟試劑的標示靈敏度)濃度的細菌內毒素，作為陽性對照，分別加入靈敏度為0.25EU / ml的鱟試劑，按照《中華人民共和國藥典》二部附錄細菌內毒素檢查法規定，進行鹽酸溴己新原料細菌內毒素檢查，根據鱟試劑的反應結果，判斷內毒素是否符合規定。
[0005]本發明有如下優點:
[0006]1、可以快速、準確地檢測出鹽酸溴己新原料中的細菌內毒素的含量。
[0007]2、通過預幹擾試驗確定最大稀釋倍數，再進行幹擾試驗可以降低檢驗成本。
【具體實施方式】
[0008](I)、限值的確定
[0009]公式:L=K/ M[0010]根據鹽酸溴己新說明書:「肌肉注射或靜脈注射。一次4mg，一日8~12mg。靜脈注射時用0.9%氯化鈉注射液或5%葡萄糖注射液稀釋後使用。」確定人用最大劑量為12mg / h。K:為人每公斤體重每小時最大可接受的內毒素劑量，以EU/kg / hr表示，注射劑 K=5EU / kg / hrο
【權利要求】
1.一種檢測鹽酸溴己新原料的細菌內毒素含量的方法，其特徵在於先通過預幹擾試驗找出最大稀釋倍數；再按最大稀釋倍數製備供試液進行幹擾試驗，驗證確認有無幹擾:最大稀釋倍數為1600倍；鹽酸溴己新內毒素限值為IOEU / mg。
2.權利要求1所述的檢驗方法，其特徵在於鹽酸溴己新原料用DMSO(二甲基亞碸)溶解。
3.如權利要求1所述的檢驗方法，其特徵在於鹽酸溴己新的濃度為I?20mg/ ml，最佳為 IOmg / ml ο
4.如權利要求1所述的檢驗方法，採用如下方法操作: 1)鱟試劑靈敏度覆核實驗，按照《中華人民共和國藥典》二部附錄細菌內毒素檢查法規定，進行鱟試劑的標示靈敏度覆核； 2)預幹擾實驗:取鹽酸溴己新粉末，用DMSO(二甲基亞碸)溶解、製備成濃度為I?20mg / ml的鹽酸溴己新溶液，再用細菌內毒素檢查用水分別稀釋至200倍、400倍、800倍、1600倍、3200倍，將此系列濃度溶液記為A ;在上述試驗液中加入細菌內毒素標準溶液，使每一濃度的實驗液中均含有2λ (λ為所用鱟試劑的標示靈敏度)濃度的細菌內毒素，記此系列溶液為B;取靈敏度為0.25EU / ml的兩個不同廠家的鱟試劑，分別與上述A和B進行反應，每一濃度重複兩管，並設陽性和陰性對照，進行預幹擾試驗，找出最大稀釋倍數； 3)幹擾實驗:再按找出的最大稀釋倍數，製備鹽酸溴己新供試液，與兩個不同廠家的靈敏度為0.25EU / ml的鱟試劑進行幹擾實驗，最終確認是否存在幹擾因素的影響，確認細菌內毒素的限度值； 4)細菌內毒素檢查:按照無幹擾時的最大有效稀釋倍數稀釋鹽酸溴己新溶液，再進行細菌內毒素檢查。
【文檔編號】G01N1/38GK103837673SQ201410098657
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月18日 優先權日:2014年3月18日
【發明者】張嵩 申請人:張嵩