一種微生物原料藥、其生產方法及其用途的製作方法
2023-12-09 09:17:06
專利名稱：一種微生物原料藥、其生產方法及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物原料藥及其生產方法，特別是利用微生物發酵生產的含有生物硒的抗癌原料藥及其生產方法。
背景技術：
硒是人體必需的微量元素，人的血硒水平直接關係人的健康。現代醫學研究表明，硒是人體內一種強力抗氧化劑，還具有調節人體內維生素A、C、E等的吸收。缺硒與癌症、心腦血管病、人的衰老等疾病密切相關。目前我國成人人均硒攝入量應為每日50-200μg，如人體日攝入量長期低於50μg，將誘發多種嚴重疾病。
日常飲食中含硒極少，主要來源有小麥、糙米、玉米、大蒜、海產品、動物肝等。目前市面上補硒產品主要是亞硒酸鈉、硒酸鈉等化學硒，因毒性較大，只能用於需要嚴格控制的藥品而不能用於食品。
近年來，國內外大量研究表明，硒對癌細胞有「靶向性抑殺作用」，被稱為人體內的「生物飛彈」，由此而此發全球含硒抗癌藥物的研究、生產熱潮。但是，經深入的分子生物學研究，表明並非所有的硒化合物都有抗癌作用，只有轉化為生物活性硒的物質(包括硒蛋白、含硒酶等)才具有良好的抗癌作用。目前市場上主要的生物活性硒為天然酵母硒，但其生物利用度還有待提高。
因此利用現代生物工程技術將化學硒轉化為生物利用度高、天然、安全的生物活性硒，可以從根本上提高硒的生理活性與吸收率，同時降低和消除其毒性。
發明內容
本發明的目的提供一種含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥，該原料藥中含有無毒且易被人體接受的生物活性硒，生物活性硒以硒蛋白為主要形態，提高了硒含量及功效，可進一步加工成膠囊或口服液，是提高免疫力、配合腫瘤患者在手術、化療後理想的抗癌用治療藥和保健藥。
本發明的另一目的在於提供一種含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥的製備方法，該方法能夠以高轉化率將無機硒轉化為生物活性硒，方法簡單，具有良好的重現性，易於工業化。
本發明的再一目的在於提供一種含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥在製備預防及治療癌症藥物上的用途。
為了實現上述目的，本發明採用的技術方案為一種含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥，其中含有200-400mg/kg的生物活性硒(按Se)和400-600mg/kg的真菌多糖。
其中的生物活性硒為硒蛋白、硒胺基酸及含硒酶一種或一種以上的組合，真菌多糖是由食用真菌提取的、主要成份為蛋白多糖體，屬於粘多糖類，生物學上又稱樸菇素樸菇素。
其中的生物活性硒為無機硒經酵母和光合菌進行生物轉化的酵母硒。其中的無機硒為亞硒酸鈉、亞硒酸鈣、亞硒酸鈷或二氧化硒中的一種或一種以上的組合。其中的酵母為啤酒酵母、產朊假絲酵母、產朊球形酵母。
光合菌菌為紅假單胞菌或紅螺菌，優選血色紅假單胞菌(沼澤紅假單胞菌，Rps.Rutila)、嗜硫紅假單胞菌(Rps.Sulfidophila)、綠色紅假單胞菌(Rps.Viridis)中的一種或其組合本發明的含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥中生物活性硒的含量優選為200-400mg/kg。
一種含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥的生產方法，其特徵在於利用新篩選出的紅假單胞菌首先把無機硒轉化為生物活性硒發酵液(有機態硒)。與此同時從天然食用菌(W)中分離出真菌多糖粗品，然後把生物活性硒發酵液與真菌多糖粗品混合發酵，經後處理得到含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥。
具體地說，本發明的製備方法包括如下步驟1.利用紅假單胞菌液體發酵，使無機硒達到生物轉化，製得到硒蛋白為主要形態的生物硒發酵液。
2.利用W菌進行液體深層連續發酵，然後從發酵液中提取真菌多糖粗品。
3.在一定條件下使「生物硒發酵液」與「真菌多糖粗品」進行混合發酵、精製、提純，最終製得以生物活性硒、真菌多糖為主要成份的抗癌原料藥——「富硒生物多糖」或「生物活性硒真菌多糖」。
本發明的菌種為紅假單胞菌(Rhodopseudomonas)，特別是血色紅假單胞菌(沼澤紅假單胞菌，Rps.Rutila)。
其中的天然食用菌(W)為市售金針菇或其他富含樸菇素的食用菌。也可以是經誘變育種培育出專供提取真菌多糖的食用菌，除野生外可在日光大棚內培育。
所述真菌多糖粗品為主要成份為粘多糖類蛋白多糖，優選真菌多糖粗品為樸菇素。
生物活性硒發酵液的製備過程為在培養基中接入5-10wt％的紅假單胞菌菌種、攪拌、滅菌；然後加入200-500mg/kg濃度的無機硒，培養至物料逐漸轉成深紅色和/或活菌數為10-20億個/ml。
其中所述無機硒為亞硒酸鈉、亞硒酸鈣、亞硒酸鈷或二氧化硒中的一種或一種以上的組合。
所述培養基為0.1-1g酵母膏、1-10g醋酸鈉、0.1-5g氧化銨、0.1-5g磷酸二氫鉀、0.1-3g g氧化鎂、1-6g碳酸氫鈉，使用時將其溶解在1000ml蒸餾水中。
所述培養基優選為0.3g酵母膏、5g醋酸鈉、1g氧化銨、1g磷酸二氫鉀、0.5g氧化鎂、3g碳酸氫鈉使用時將其溶解在1000ml蒸餾水中。
所述真菌多糖粗品可以直接採用市售樸菇素，或者在室溫下用食用酒精浸提食用菌(W)得到的真菌多糖粗液經後處理得到真菌多糖粗品。
其中食用酒精的用量為食用菌重量的10-40倍。
後處理包括過濾去渣，取上清液經鹽析、透析、濃縮、乾燥得真菌多糖粗品。
生物活性硒發酵液與真菌多糖粗品混合發酵的過程為將生物活性硒發酵液置於發酵容器中，加入10-20wt％的真菌多糖粗品，攪勻後加蓋密封厭氧發酵48-72h，經後處理得到生物活性硒真菌多糖產品。
其中混合發酵的溫度優選為32℃；後處理包括真空過濾、濃縮、乾燥。
上述生物活性硒真菌多糖產品可用於配製膠囊。若是用於生產口服液，需經超濾或反滲透加工製成清亮液態產品。
所述真菌多糖粗品也可以採用食用菌進行液體深層連續發酵，然後從發酵液中提取真菌多糖粗品的方法製備。
真菌多糖的製備精選W菌鮮子實體1000g，按20倍量加入食品酒精，在室溫30度(攝氏)下浸提24h，過濾去渣，取上清液經鹽析、透析、濃縮、冷凍乾燥得真菌多糖粗品。
本發明的生物活性硒中，無機硒鹽與酵母及光合菌蛋白結合得到生物活性硒，生物活性硒中的生物硒含量佔總硒量的95％以上，非常適合人體吸收利用。是純天然生物態製劑，符合人體最佳硒需求量，安全無副作用。動物試驗還表明，本發明的生物活性硒沒有致畸和致突變方面的危險；此外，本發明的生物活性硒硒富含硒蛋白、硒胺基酸及含硒酶、B族維生素和多種微量元素。
本發明的製備過程中，先對無機硒進行發酵，使無機硒轉化為生物硒，然後與含有真菌多糖的另一種微生物發醇產品進行混合發醇，經以上兩級發酵後硒的轉化率達到95％以上，終端產品「富硒生物多糖」或「生物活性硒真菌多糖」中含有高量和活性硒、含硒酶和真菌多糖，用於癌症製藥有療效顯著、使用安全、無毒副使用等多種優越性能。由於生物活性硒和真菌多糖具有良好的協同作用，使產品的綜合效力更高，臨床應用效果更好。本發明「生物活性硒真菌多糖」生產成本低、藥效成份明確，療效顯著、無毒副作用，可用於配製各類抗癌新藥，不失為一種理想的抗癌原料藥。
本發明的產品具有以下優點1.加入的無機硒經過兩次發酵轉化，促使硒的轉化充分、安全，轉化後的生物硒基本上屬無毒物質，可保證製藥的安全。
2.生物活性硒與真菌多糖在防治癌症上有極佳協同作用，前者(指生物硒)利用其「靶向抑殺」作用可撲滅原有的癌細胞，後者(指真菌多糖)可顯著提高患者免疫功能「抑制癌細胞增生」作用，兩種藥效成份相結合，可達到「標本兼治」，從根源上防治腫腫瘤病症。
3.克服了目前醫藥市場上大多數抗腫瘤藥物存在的毒副作用大的弊端。本產品對癌細胞針對性強，既具有強的抑殺癌細胞功能，又不傷及健康細胞。它的奧妙在於產品中的真菌多糖具有極佳的刺激抗體增生的作用，真菌多糖雖無直接殺死癌細胞的功能(更不傷及健康細胞)，但可依靠大量的抗體在機體中築起堅強的防禦體系，使癌細胞「無生長的餘地」，唯其走向「自然死亡」。發明的詳細描述下面結合附圖和具體實施例詳細描述本發明
附圖1為本發明的生物活性硒真菌多糖的生產工藝流程圖；附圖2為本發明中真菌多糖的生產工藝流程圖。
下面為本發明的具體實施例，光合菌由中科院微生物所提供，其中紅假單胞菌(Rhodopseudomonas)，特別是血色紅假單胞菌(沼澤紅假單胞菌，Rps.Rutila)、紅螺菌(0192Rhodospiriliuml)、酵母為市售產品，見農業部公告第244號，生產單位為惠州市惠山水生生物製品有限公司(許可證號2002-1256)，珠江水產研究所微生物製品廠也生產該產品。
實施例11.生物活性硒的製備在1000ml蒸餾水中加入0.3g酵母膏、5g醋酸鈉、1g氧化銨、1g磷酸二氫鉀、0.5g氧化鎂、3g碳酸氫鈉，攪拌溶解後煮沸滅菌，降溼至32℃後按5wt％的比例接入紅假單胞菌(Rhodopseudomonas)，特別是血色紅假單胞菌(沼澤紅假單胞菌，Rps.Rutila)，置日光溼室25℃-26℃培養3天後，加入200mg/kg濃度的亞硒酸鈉，繼續培養5天，物料逐漸轉成深紅色，表明已經成熟。取樣檢測，活菌數為10-11億個/ml。
2.真菌多糖的製備精選天然食用菌金針菇菌鮮子實體1000g，按20倍量加入食用酒精，在室溫(30℃)下浸提24h，過濾去渣，取上清液經鹽析、透析、濃縮、冷凍乾燥得真菌多糖粗品。收率約在2％左右。
3.混合發酵在生物硒發酵容器中按20wt％的比例加入真菌多糖粗品，攪勻後加蓋密封，厭氧發酵(調溫32℃)48h，放出物料，經真空過濾、棄渣、濃縮去溶劑、乾燥得紅色粉狀物，即為生物活性硒真菌多糖的微生物原料藥，該原料藥可用於配製膠囊、片劑、衝劑等各種製劑。
上述原料藥也可用經超濾及反滲透加工，製成清亮液態產品用於生產口服液。
實施例21.生物活性硒的製備在1000ml蒸餾水中加入1g酵母膏(啤酒酵母菌Brewer′Sreast)、3g醋酸鈉、5g氧化銨、3g磷酸二氫鉀、0.1g氧化鎂、1g碳酸氫鈉，攪拌溶解後煮沸滅菌，降溼至32℃後按10wt％的比例接入紅螺菌菌種，菌種編號為0192(Rhodospiriliuml共1株)，置日光溫室29℃-30℃培養2天後，加入500mg/kg濃度的亞硒酸鈷，繼續培養3天，物料逐漸轉成深紅色，表明已經成熟。取樣檢測，活菌數一般可達19-20億個/ml。
2.真菌多糖的製備精選天然食用菌金針菇菌鮮子實體1000g，按10倍量加入食用酒精，在室溫(30℃)下浸提至基本提盡樸菇素，過濾去渣，取上清液經鹽析、透析、濃縮、真空乾燥得真菌多糖粗品。收率約在2％左右。
3.混合發酵在生物硒發酵容器中按10wt％的比例加入真菌多糖粗品，攪勻後加蓋密封，厭氧發酵(調溫32℃)72h，放出物料，經真空過濾、棄渣、濃縮去溶劑、乾燥得紅色粉狀物，即為生物活性硒真菌多糖的微生物原料藥，該原料藥可用於配製膠囊，每顆0.5克，含硒150μg，含真菌多糖300μg。
實施例31.生物活性硒的製備在1000ml蒸餾水中加入0.1g酵母膏、1g醋酸鈉、0.1g氧化銨、5g磷酸二氫鉀、3g氧化鎂、10g碳酸氫鈉，攪拌溶解後煮沸滅菌，降溼至32℃後按8wt％的比例接入紅假單胞菌菌種(球形紅假單胞菌Rps.Globiformis)，置日光溼室28℃-29℃培養2.5天後，加入500mg/kg濃度的亞硒酸鈣，繼續培養3天，物料逐漸轉成深紅色，表明已經成熟。取樣檢測，活菌數一般可達19-20億個/ml。
2.真菌多糖的製備精選天然食用菌金針菇菌鮮子實體1000g，按15倍量加入食用酒精，在室溫(30℃)下浸提至基本提盡樸菇素，過濾去渣，取上清液經鹽析、透析、濃縮、真空乾燥得真菌多糖粗品。收率約在3％左右。
3.混合發酵在生物硒發酵容器中按15wt％的比例加入真菌多糖粗品，攪勻後加蓋密封，厭氧發酵(調溫32℃)50h，放出物料，經真空過濾、棄渣、濃縮、乾燥得紅色粉狀物，即為生物活性硒真菌多糖的微生物原料藥，該原料藥可用於配製片劑，每顆1.0克，含硒150μg，含真菌多糖300μg。
實驗例經過多年來的探索。各國科學家取得了共識，微量元素中的硒成為″抗癌之王″。這一研究結果從多方面得到印證。在實驗中，給實驗鼠體內注入不同程度的腸癌，肝癌致癌物，再在它們的飲用水中加入一定劑量的硒多糖。其結果表明，這兩種癌症的發病率分別減少了50％左右。這說明，硒多糖能有效地抑制致癌物的毒性作用。與此同時，挑選了13隻患有結腸癌的動物進行的試驗，在飼料中加進一定量的硒多糖，然後觀察餵養，半年後，科研人員對這13隻動物進行檢驗。結果發現已有7隻的癌症病灶神奇地消失了，其餘6隻也大有好轉。
硒還能降低放、化療的毒副作用，實踐證明，如在化療1小時前或同時補硒，可減少順鉑在殺傷癌細胞的同時所造成的紅、白細胞下降，腹瀉等不良反應。為了證明硒在放療中的作用，對經過補硒處理的小白鼠進行全身輻射損傷的防護效應實驗。其結果證明，這隻小白鼠的正常組織未被傷害，實驗證明硒是抗輻射損傷必需的微量元素。除此之外，硒還可以緩解晚期癌症病人的劇痛。
權利要求
1.一種含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥，其中含有200-400mg/kg的生物活性硒(按Se)和400-600mg/kg的真菌多糖。
2.根據權利要求1所述的原料藥，其中的生物活性硒為為無機硒經酵母、光合菌進行生物轉化的生物活性硒，真菌多糖是由食用真菌提取的樸菇素
3.根據權利要求2所述的原料藥，其中的無機硒為亞硒酸鈉、亞硒酸鈣、亞硒酸鈷或二氧化硒中的一種或一種以上的組合，其中的酵母為啤酒酵母、產朊假絲酵母、產朊球形酵母。
4.權利要求1-3所述含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥的生產方法，包括利用新篩選出的紅假單胞菌首先把無機硒轉化為生物活性硒發酵液，與此同時從天然食用菌中分離出真菌多糖粗品，然後把生物活性硒發酵液與真菌多糖粗品混合發酵，經後處理得到含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥。
5.根據權利要求4所述的微生物原料藥的生產方法，其中的天然食用菌(W)為金針菇或其他富含樸菇素的食用菌，所述真菌多糖粗品為樸菇素。
6.根據權利要求4所述的微生物原料藥的生產方法，其中生物活性硒發酵液的製備過程為在培養基中接入5-10wt％的光合菌菌種、攪拌、滅菌；然後加入200-500mg/kg濃度的無機硒，培養至物料逐漸轉成深紅色和/或活菌數為10-20億個/ml，優選光合菌菌為紅假單胞菌或紅螺菌，特別優選血色紅假單胞菌(沼澤紅假單胞菌，Rps.Rutila)、嗜硫紅假單胞菌(Rps.Sulfidophila)、綠色紅假單胞菌(Rps.Viridis)中的一種或其組合。
7.根據權利要求4所述的微生物原料藥的生產方法，其中所述培養基為0.1-1g酵母膏、1-10g醋酸鈉、0.1-5g氧化銨、0.1-5g磷酸二氫鉀、0.1-3gg氧化鎂、1-6g碳酸氫鈉，使用時將其溶解在1000ml蒸餾水中；優選培養基為0.3g酵母膏、5g醋酸鈉、1g氧化銨、1g磷酸二氫鉀、0.5g氧化鎂、3g碳酸氫鈉使用時將其溶解在1000ml蒸餾水中。
8.根據權利要求4所述的微生物原料藥的生產方法，其中所所述真菌多糖粗品可以直接採用市售樸菇素，或者在室溫下用食用酒精浸提食用菌(W)得到的真菌多糖粗液經後處理得到真菌多糖粗品。(附圖為發酵得到真菌多糖粗品，請確認工藝)附圖是說明與生物硒發酵液混合後發酵
9.根據權利要求4所述的微生物原料藥的生產方法，其中生物活性硒發酵液與真菌多糖粗品混合發酵的過程為將生物活性硒發酵液置於發酵容器中，加入10-20wt％的真菌多糖粗品，攪勻後加蓋密封厭氧發酵48-72h，經後處理得到生物活性硒真菌多糖產品。
10.權利要求1-3所述含生物活性硒和真菌多糖的微生物原料藥在製備預防或治療腫瘤藥物上的用途。
全文摘要
本發明是一種用於癌症治療和保健的含硒微生物製劑，其特徵是利用新篩選出的菌種對無機硒進行了發酵，使轉化為無毒的生物硒，然後與從天然食用菌中提取的真菌多糖進行復混發醇，最終製得以含生物活性硒和真菌多糖為主要成分的「生物活性硒真菌多糖」，一種可用於配製抗癌藥物的原料藥。由於生物活性硒和真菌多糖具有良好的協同作用，使產品的綜合效力更高，臨床應用效果更好。本發明「生物活性硒真菌多糖」生產成本低、藥效成分明確，療效顯著、無毒副作用，可用於配製各類抗癌新藥，不失為一種理想的抗癌原料藥。
文檔編號C12P19/00GK1631372SQ20031012307
公開日2005年6月29日 申請日期2003年12月24日 優先權日2003年12月24日
發明者伍智文, 湯珍山 申請人:北京精硒生物工程有限責任公司